【正文】 消毒時(shí)，直。 臭氧不僅對(duì)各種細(xì)菌（如大腸桿菌、綠膿桿菌及雜菌等）、肝炎病毒等有極強(qiáng)的殺滅能力，面且對(duì)霉菌也有很強(qiáng)的殺滅能力。多余的氧原子則會(huì)自行重新結(jié)合成為普通氧分子（ O2），不存在任何有毒殘留物 。 臭氧滅菌消毒 臭氧（ O3）具有強(qiáng)烈的滅菌消毒作用，且不存在任何有毒殘留物，近年來(lái)為制藥 企業(yè)廣泛應(yīng)用。 清潔與滅菌往往是聯(lián)系在一起的，總是在房間清潔之后再進(jìn)行消毒，消毒之后再次清潔。我國(guó) GMP（ 1998）第 49 條明確規(guī)定：“藥品生產(chǎn) 車間、工序、崗位均應(yīng)按生產(chǎn)和空氣潔凈度級(jí)別的要求制定廠房、設(shè)備、容器等清潔規(guī)程，內(nèi)容應(yīng)包括：清潔方法、程序、間隔時(shí)間，使用的清潔劑或消毒劑，清潔工具的清潔方法和存放地點(diǎn)。 清潔和滅菌是解決微粒與微生物污染的主要手段，但必須保證清潔與滅菌的徹底性。 對(duì)于潔凈室的地面、墻面、頂棚表面、設(shè)備的表面、人體衣服表面等，都要采取合適的清潔、消毒的方法。 我國(guó) GMP（ 1998）第 55 條規(guī)定，潔凈室（區(qū)）應(yīng)定期消毒。從理論上說(shuō)，經(jīng) HVAC 系統(tǒng)處理送入潔凈室的空氣， 可以使房間的活微生物數(shù)控制在規(guī)定的范圍內(nèi)。 一 對(duì)潔凈室的消毒及其方法 潔凈室要獲得相對(duì)“無(wú)菌”的空氣，主要應(yīng)用對(duì)靜止環(huán)境內(nèi)空氣滅菌法，以及對(duì)流動(dòng)空氣的過(guò)濾除菌法；兩者應(yīng)結(jié)合應(yīng)用。針對(duì)兩種污染形式（微粒和微生物），要對(duì)可能造成污染的途徑（空氣、水、表面、物料及人員）進(jìn)行控制。 潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)；若某潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先進(jìn)行消毒，然 后重新采樣兩次，測(cè)試結(jié)果均須合格。 7） 結(jié)果評(píng)定 。 沉降菌測(cè)試報(bào)告表 編號(hào) 測(cè)試單位 測(cè)試狀態(tài) 環(huán)境溫度 相對(duì)濕度 測(cè)試依據(jù) 培養(yǎng)基名稱 培養(yǎng)溫度 ℃ 靜壓差 Pa 培養(yǎng)基批號(hào) 檢測(cè)日期 報(bào)告日期 培養(yǎng)皿 區(qū)域 1 2 3 4 平均數(shù) 級(jí)別 備注 評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)論 檢驗(yàn)人 日期 復(fù)核人 日期 6)結(jié)果計(jì)算 用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。 測(cè)試報(bào)告中應(yīng)記錄房間溫度、相對(duì)濕度壓差及測(cè)證心伏態(tài)。工作區(qū)采樣點(diǎn)的位置離地 ~｛略高于工作面）；可在關(guān)鍵 設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。在滿足最少采樣點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù) 。 4） 沉降菌計(jì)數(shù)沉降法的最少采樣點(diǎn)數(shù)與懸浮粒子測(cè)試方法的采樣點(diǎn)數(shù)相同 。 2） 測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服；靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于 2 人。 測(cè)試規(guī)則 1） 測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，側(cè)試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。若培養(yǎng)皿上有 2 個(gè)或 2 個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以 2 個(gè)或 2 個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)（每批選定 3 只培養(yǎng)皿），檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染。 測(cè)試 步驟 1） 采樣方法 ： 將已制備好的培養(yǎng)皿按要求放置，打開(kāi) 培 養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露 ，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒 置。該標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容如 下： 本測(cè)試方法采用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若 干 時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來(lái)判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來(lái)評(píng)定潔凈室〔區(qū)）的潔凈度。其沉降濃度用 CFU/皿 (30min）表示。 三 沉降菌的測(cè)定 沉降菌（ settling microbe）是用標(biāo)準(zhǔn)提及的方法（沉降暴露法）收集到的活微生物粒子．通過(guò)專用的培養(yǎng)基，在適宜的生長(zhǎng)條件下繁殖到可見(jiàn)的菌落數(shù)。在我國(guó)以 GMP（ 1998）附錄一的標(biāo)準(zhǔn)為據(jù)。 浮游菌測(cè)試報(bào)告表 測(cè)試單位 測(cè)試日期 測(cè)試依據(jù) 生產(chǎn)批號(hào) 測(cè)試區(qū)域 房間或?qū)恿鞴ぷ髋_(tái) 潔凈度級(jí)別 面積（ m2） 測(cè)試狀態(tài) 溫度（ ℃ ） 相對(duì)濕度（ %） 靜壓差（ Pa） 采集器名稱 培養(yǎng)基名稱 采集器型號(hào) 送風(fēng)口 工作區(qū) 采樣點(diǎn)編號(hào) No. 采樣速率（ L/min） 采樣量（ m3） 開(kāi)始時(shí)間 菌落數(shù)（ CFU） 平均濃度（ CFU/ m3） 最高濃度（ CFU/ m3） 最低濃度（ CFU/ m3） 評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)論 測(cè)試人 報(bào)告人 批準(zhǔn)人 日期 日期 日 期 5）結(jié)果計(jì)算 用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)；每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度的計(jì)算， 平均濃度（個(gè)／ m3）＝ 菌落數(shù) /采樣量 例 1：某測(cè)點(diǎn)采樣量為 400L.，菌落數(shù)為 1，則：平均濃度 = 1/ = 個(gè) /m3 例 2：某測(cè)點(diǎn)采樣量為 2 m3，菌落數(shù)為 3，則： 平均濃度 = 3/2 = 1..5 個(gè) /m3 6） 結(jié)果評(píng)定 用浮游菌平均濃度判斷潔凈室（區(qū)）空氣中的微生物。 4） 測(cè)試報(bào)告測(cè)試報(bào)告中應(yīng)記錄房間溫度、相對(duì)濕度、壓差及測(cè)試狀態(tài)。 每次最小采樣量表 潔凈度級(jí)別 采樣量， L 日常監(jiān)測(cè) 環(huán)境驗(yàn)證 100 級(jí) 600 1000 10000 級(jí) 400 500 100000 級(jí) 50 100 2） 采樣次數(shù)每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣 1 次。如 下 圖所示采樣點(diǎn)布置可作參考。工作區(qū)測(cè)點(diǎn)位置離地 ~（略高于工作面）；送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開(kāi)送風(fēng)面 30cm 左右；可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。 對(duì)每個(gè) 10000 級(jí)潔凈工作區(qū)域（如 藥物開(kāi)口工作區(qū)）可在工作面處設(shè)測(cè)點(diǎn)， 每 班 1 次。 2 日 常監(jiān)測(cè)的采樣點(diǎn)數(shù)目由 生產(chǎn)工藝的關(guān)鍵操作點(diǎn)來(lái)確定。 浮游菌濃度計(jì)算 1)采樣點(diǎn)數(shù)量及其布置 浮游菌測(cè)試的最少采樣點(diǎn)數(shù)目分為日常監(jiān)測(cè)及環(huán)境驗(yàn)證兩種情況，最少采樣點(diǎn)數(shù)目見(jiàn) 下 表 。靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2 人。浮游菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈室（區(qū)）應(yīng)經(jīng)過(guò)消毒，溫度、相對(duì)濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定位內(nèi)。 ? 由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì) 觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。 ? 采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對(duì)樣本的污染。 若平板上有 2 個(gè)或 2 個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以 2 個(gè)或 2 個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。可每批選定 3 只培養(yǎng)皿做對(duì)照培養(yǎng)。置采樣口于采樣點(diǎn)后，依次開(kāi)啟采樣器、真空泵，轉(zhuǎn)動(dòng)定時(shí)器．根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時(shí)間。 2)狹縫式采樣器的采樣程序儀器經(jīng)消毒后先不放 入 培養(yǎng)皿，開(kāi)動(dòng)真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于 5min，并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤、轉(zhuǎn)速。 測(cè)試步驟 1)測(cè)試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。培養(yǎng)基可使用普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認(rèn)可的培養(yǎng)基。 細(xì)菌培養(yǎng)應(yīng)按規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)（如 YYIT )及有關(guān) SOP 執(zhí)行。已知采樣器的 流量（ L/min)、 設(shè)定采樣時(shí)間 (min)、 兩者相乘即采樣量（ L）。 ②每次測(cè)試前應(yīng)按說(shuō)明書上的規(guī)定，先接通電源．啟動(dòng)真空抽氣泵，然后調(diào)節(jié)流量計(jì)及定時(shí)器。采樣器必須按儀器的檢定周期定期對(duì)儀器做檢定，以保證測(cè)試數(shù)據(jù)的可靠性。 離心式采樣器由于內(nèi)部風(fēng)機(jī)的高速旋轉(zhuǎn)．氣流從采樣器前部吸人從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時(shí)問(wèn)撞擊到專用的固形培養(yǎng)條上，經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計(jì)數(shù)。 3\浮游菌測(cè)定需有專門的采樣器，宜采用撞擊法機(jī)理的采樣器，一般采用 狹 縫式采樣器或離心式采樣器，并配備流量計(jì)和定時(shí)器，并嚴(yán)格按儀器說(shuō)明書的要求定期校驗(yàn)和操作。 標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 收載了“培養(yǎng)基的準(zhǔn)備及滅菌”，規(guī)定培養(yǎng)皿可置于 121℃濕熱滅菌 20min或 180℃ 干熱滅菌 2h。 浮游菌測(cè)定所使用的專門的培養(yǎng)基是普通肉湯瓊脂 培 養(yǎng)基或藥典認(rèn)可的其他培養(yǎng)基。 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)蛋醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測(cè)試方法》〔 GB/T 162931996)的主要內(nèi)容如下： 本標(biāo)準(zhǔn)適用范圍為醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）、無(wú)菌室或無(wú)菌區(qū)域（包括潔凈工作臺(tái)）的浮游菌的測(cè)定和環(huán)境的驗(yàn)證。浮游菌用計(jì)數(shù)濃度 CFU/L 或 CFU/m 3表示；沉降菌用沉降濃 度 CFU/皿 （沉降 30min）表示。只有將它們采集或沉降到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，形成菌落，才能肉眼看到。因此，活微生物的測(cè)定有浮游菌和沉降菌兩種測(cè)定 方法。 二 浮游菌的測(cè)定 潔凈室（區(qū)）不僅要控制懸浮粒子，也要控制活微生物數(shù)。 2） 全部采樣點(diǎn)的粒子濃度平均值均值的 95%置信上限必須低于或等于規(guī)定的級(jí)別界限，即 UCL。 95％置信上限的 t分布系數(shù)表 15 采樣點(diǎn)數(shù) 2 3 4 5 6 7 8 9 9 t 注：當(dāng)采樣 點(diǎn)多于 9 個(gè)點(diǎn)時(shí)，不需耍計(jì)算 UCL 在計(jì)算出上述結(jié)果后，要對(duì)結(jié)果評(píng)定。 4） t 分布與置信上限 ： t 分布（ t distribution）是正態(tài)總體中的一種抽樣分布，其分布函數(shù)為 ： t=（總體平均值 — 樣本平均值） /標(biāo)準(zhǔn)誤差 置 信上限 (UCL, upper confidence limit)定義為：從正態(tài)分布抽樣得到的實(shí)際均值按給定的置信度（此處為 95%）計(jì)算得到的估計(jì)上限將大于此實(shí)際均值，則稱計(jì)算得到的這一均值 估計(jì) 上限為置信上限。 2） 平均值的均值 ： M = （ A1 + A2 + ? + An） /L 式中， M 為平均值的均值，即潔凈室（區(qū)）的平均粒子濃度，粒／ m3； A 為某一采樣點(diǎn)的平均粒子濃度（ i = 1， 2， ? ， n），粒／ m3； L 為某一潔凈室〔區(qū)）內(nèi)的總采樣點(diǎn)數(shù)。 懸浮粒子濃度的采樣數(shù)據(jù)應(yīng)按下述步驟作統(tǒng)計(jì)計(jì)算： 1） 采樣點(diǎn)的平均粒 子 濃度 ： A=（ C1 + C2 + ? + Cn） /N。 3） 布置采樣點(diǎn)時(shí)，應(yīng)避開(kāi)回風(fēng)口。不同潔凈度級(jí)別每次最小的采樣量見(jiàn) 下 表 ： 每次最小采樣量 潔凈度級(jí)別 采樣量， L ≥ m ≥ 5μ m 100 10000 100000 采樣注意事項(xiàng)： 1） 在確認(rèn)潔凈室（區(qū)）送風(fēng)量和壓差達(dá)到要求后，方可進(jìn)行采樣。 對(duì)任何小潔凈室或局部?jī)艋瘏^(qū)域，采樣點(diǎn)的數(shù)目不得少于 2 個(gè)，總采樣次數(shù)不得少于 5次。 最少采樣點(diǎn)數(shù)目表 14 面積（ S） m2 潔凈度級(jí)別 100 10000 1000000 S10 2~3 2 2 10≤ S20 4 2 2 20≤ S40 8 2 2 40≤ S100 16 4 2 100≤ S200 40 10 3 200≤ S400 80 20 6 400≤ S1000 160 40 13 1000≤ S2020 400 100 32 2020≤ S 800 200 63 注：表中的而積，對(duì)于單向流潔凈室，指的是送風(fēng)口面 積；對(duì)非單向流潔凈室，指的是房 間 面積。 懸浮粒子計(jì)數(shù)應(yīng)注意采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置、采樣點(diǎn)的限定和采樣量： 1）采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)及工藝關(guān)鍵操作區(qū)設(shè)置，采樣點(diǎn)布置規(guī)則可參見(jiàn)（ GB/T 162921996《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒于的測(cè)試方法》附錄 A（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。測(cè)試報(bào)告中應(yīng)標(biāo)明測(cè)試時(shí)所采用的狀態(tài)。動(dòng)態(tài)測(cè)試（ operational test）是指潔凈室（區(qū)）已處 于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進(jìn)行的測(cè)試。 測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)測(cè)試和動(dòng)態(tài)測(cè)試兩種。 在測(cè)試時(shí)，要控制測(cè)試的條件。 5） 計(jì)數(shù)器采樣口和儀器工作位置應(yīng)處在同一氣壓和溫度下，以免產(chǎn)生測(cè)量誤差。 3）采樣管必須干凈，嚴(yán)禁滲漏。其使用要點(diǎn)如下： 1） 儀器開(kāi)機(jī)，預(yù)熱至穩(wěn)定后，方可按說(shuō)明書的規(guī)定對(duì)儀器進(jìn)行校正。光散射粒子計(jì)數(shù)器的原理是利用空氣中的懸浮粒子在光的照射下產(chǎn)生光散射現(xiàn)象 ，其散射光的 強(qiáng) 度與粒子的表面積成正比。 一 懸浮粒子測(cè)定 測(cè)試方法采用計(jì)數(shù)濃度法，即通過(guò)測(cè)定潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某粒徑的懸浮粒子數(shù)，來(lái)評(píng)定潔凈室（區(qū)）的懸浮粒子潔凈度等級(jí)。醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）的潔凈度測(cè)定包括了懸浮粒子和活微生物兩個(gè)方面，活微生物的測(cè)試又包括了浮游菌和沉 降菌的測(cè)試。制藥企業(yè)應(yīng)制定環(huán)境監(jiān)測(cè)儀表校準(zhǔn)規(guī)程，符合國(guó)家有關(guān)部門的規(guī)定，符合 GMP 的要求。在無(wú)菌生產(chǎn)期間，每天都要進(jìn)行潔凈度和浮游菌、沉降菌等的側(cè)定。 五 浮游菌采樣器 浮游菌的測(cè)定是通過(guò)收集懸浮在空氣中的生物粒子，通過(guò)專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長(zhǎng)條件下讓其繁殖成可見(jiàn)的菌落進(jìn)行 計(jì) 數(shù)，從而判定潔凈環(huán)境中單位體積空氣中細(xì)菌數(shù)的多 少。 國(guó)內(nèi)有些企業(yè)使用的光散射粒子計(jì)數(shù)器一般用于粒徑 ≥ m 的懸浮粒子計(jì)數(shù)．配合濾膜顯微鏡用于粒徑 ≥ 5μ m 的懸浮粒子計(jì)數(shù)。激光粒子計(jì)數(shù)器采用等動(dòng)力采樣，能與微機(jī)聯(lián)網(wǎng)、對(duì)于人員不能進(jìn)人的潔凈室，可采用自動(dòng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)。在工程驗(yàn)收和潔凈室日常管理中，塵埃粒子計(jì)數(shù)器是不可缺少的儀器。在工程驗(yàn)收中，和更換高效過(guò)濾器后，風(fēng)量罩還常用于測(cè)定換氣次數(shù)，以檢驗(yàn)是否達(dá)到 GMP 的有關(guān)規(guī)定。直接將罩子罩住風(fēng)口就可以讀數(shù)。在這個(gè)過(guò)程中必須精確測(cè)量風(fēng)量，此時(shí)必須使用風(fēng)量罩。尤其是無(wú)菌生產(chǎn)區(qū)，潔凈級(jí)別不同，風(fēng)壓差逐步降低，任何風(fēng)閥位置的變動(dòng)，都會(huì)引起各房間風(fēng)壓的連鎖反應(yīng)。制藥