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正文內(nèi)容

乙肝表面抗原的elisa法定量分析方法學(xué)驗(yàn)證畢業(yè)論文(參考版)

2024-08-30 16:21本頁面
  

【正文】 謹(jǐn)以此致謝最后,我要向百忙之中抽時間對本文進(jìn)行審閱的各位老師表示衷心的感謝。 感謝所有授我以業(yè)的老師,沒有這些年知識的積淀,我沒有這么大的動力和信心完成這篇論文。在這篇論文構(gòu)思和寫作過程,我的論文指導(dǎo)老師 王敏 教授,對我論文的完成更是功不可沒, 張 老師每次 對 我的疑問給予細(xì)心的解答并給出寫作建議,對我的論文進(jìn)行細(xì)心的修改,使得我的論文結(jié)構(gòu)一步一步的完善,內(nèi)容日趨豐滿。這篇論文 是在老師的精心指導(dǎo)和大力支持下才完成的 。 致謝 18 致 謝 在本次論文設(shè)計(jì)過程中,感謝我的學(xué)校,給了我學(xué)習(xí)的機(jī)會,在學(xué)習(xí)中,老師從選題指導(dǎo)、論文框架到細(xì)節(jié)修改,都給予了細(xì)致的指導(dǎo),提出了很多寶貴的意見與建議,老師以其嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的治學(xué)態(tài)度、高度的敬業(yè)精神、兢兢業(yè)業(yè)、孜孜以求的工作作風(fēng)和大膽創(chuàng)新的進(jìn)取精神對我產(chǎn)生重要影響。HBsAg:日間精密度 CV≤ %。 研究 結(jié)果 是 HBsAg定性試驗(yàn)的臨界值分別為 。連續(xù) 20d對 HBsAg的弱陽性質(zhì)控血清進(jìn)行檢測 ,計(jì)算 s/co值 ,統(tǒng)計(jì)分析日間精密度 CV。本次研究的 目的 是 對乙肝病毒表面抗原 (HBsAg)的方法學(xué)性能和實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行評價和分析。選擇最低濃度為 ,絕大多數(shù) HBV感染者外周血中可出現(xiàn) HBsAg,含量在 5ng/ml ~ 600ug/ml之間,高者可達(dá) 2020ug/ ml以上,滿足了現(xiàn)階段文獻(xiàn)報道的最低濃度值。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度 OD值,計(jì)算樣品濃度。用底物 TMB顯色, TMB在過氧化物的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,并在酸的作用下最終轉(zhuǎn)化為黃色。試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。以避免競爭抑制,最大程度地解決鉤狀效應(yīng)( HOOK)的問題。全自動酶免分析儀目前也廣泛應(yīng)有,自動化、標(biāo)準(zhǔn)化的操作手段使實(shí)驗(yàn)達(dá)到了全過程控制和全過程標(biāo)準(zhǔn)化分析,大大提高了實(shí)驗(yàn)的精密度,使檢測結(jié)果更趨穩(wěn)定,從而保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。此次實(shí)驗(yàn)只是對一種試劑盒的可用性進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證, 而目前常用的定量方法已有很多,如 TRFIA, TRFIA法又稱解離增強(qiáng)鑭系熒光免疫分析,是近十年發(fā)展起來的一種微量分析方法。而且乙肝兩對半定量檢測可與 HBV DNA熒光測定相互補(bǔ)充,綜合評價患者病情與藥物療效,為低含量的慢性乙肝、病毒攜帶者提供了正確判斷病情的依據(jù)。但隨著臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展,乙肝兩對半定性檢測已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床及患者的要求,特別是在療效觀察以及乙肝疫苗注射后抗體產(chǎn)生情況的觀 察上有明顯的不足。我們在追求低成本檢測的同時 ,必須保證檢測的質(zhì)量。隨著醫(yī)療檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展 ,臨床檢測乙肝表面抗原采用的方法有了新的發(fā)展 ,尤其是發(fā)光法定量 (或半定量 )檢測乙肝表面抗原近年有上升趨勢。我國是乙型肝炎病毒的高發(fā)區(qū) ,加強(qiáng)對乙型肝炎 (簡稱乙肝 )的檢出能力 ,是保障我國人民健康 ,促進(jìn)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和社會進(jìn)步的重要措施。 參考文獻(xiàn) 14 參考文獻(xiàn) 【 1】魏來,陶其敏.努力規(guī)范肝臟疾病的免疫學(xué)診斷.中華檢驗(yàn)雜志, 2020,26: 69— 71 【 2】劉曉梅,張世蘭. HBsAg陰性結(jié)果的慢性乙型肝炎患者病毒血癥水平與臨床的關(guān)系 [J】.臨床檢驗(yàn)雜志, 2020, 22(5): 381382. 【 3】 李輝霞,王德志,楊朋,乙肝兩對半定 量檢測及臨床意義,醫(yī)學(xué)信息雜志2020, 23( 9)。 綜上分析,該試劑盒對于高濃度樣品的檢測具有良好的準(zhǔn)確性和較高的精密度,而對于低濃度樣品( )的檢測 在準(zhǔn)確性和精密度方面都低于高濃度樣品,不適合低濃度樣品的檢測。在做 3個組數(shù)據(jù)的批間的精密度分析時,發(fā)現(xiàn) 6, 3, ,%, %,分布方式從低到高,前 2個濃度滿足對 ng/ml級水平的 RSD一般應(yīng) 15%的要求。但是 HBsAg 濃度為 .5ng/ml的回收率為 %,顯示此試劑盒對于低濃度樣品的檢測準(zhǔn)確度差。檢測限則表示分析低濃度樣品的能力,通常又稱為前言 13 靈敏度。方法準(zhǔn)確度指待測濃度與真實(shí)濃度的接近值了,一般用相對回收率表示,限度要求在 85%— 115%的范圍內(nèi)。 方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容 方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容一般包括標(biāo)準(zhǔn)曲線,準(zhǔn)確度,精密度和檢測限。 應(yīng)用試劑盒 HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品從濃度為 8, 4, 2, 1, , 個濃度梯度做標(biāo)準(zhǔn)曲線,以 6, 3, ,進(jìn) 行準(zhǔn)確度,精密度和檢測限等方法學(xué)驗(yàn)證。顏色的深淺和樣品中得 HBsaAg呈正相關(guān)。往預(yù)先包被 HBsAg捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本,標(biāo)準(zhǔn)品,HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。本次實(shí)驗(yàn)是對實(shí)驗(yàn)室的一種試劑盒,即福州藍(lán)圖生物工程有限公司生產(chǎn)的HBsAg的 ELISA法定量分析試劑盒進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證,以判斷是否能用前言 12 于 臨床樣本分析。 方法概述 目前普遍使用的 HBsAg試劑盡管在制備時采用了高親和力的單克隆抗體,并且使包被抗體、酶標(biāo)抗體的結(jié)合位點(diǎn)盡可能的遠(yuǎn)。此技術(shù)集酶標(biāo)記、同位素標(biāo)記技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)于一身,具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好,且測定范圍更寬,試劑盒貨架壽命長,操作簡便和非放射性等特點(diǎn),成為最有潛力的一種標(biāo)記免疫分析方法【 3】。這在目前的臨床治療中應(yīng)用十分廣泛。隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展,乙肝兩對半定量測定成為可行,大大彌補(bǔ)了乙肝兩對半定性檢測的不足。 3. 討論 乙肝表面抗原定量分析的意義 乙肝表面抗原是乙肝兩對半的其中一項(xiàng),乙肝兩對半定性檢測對乙肝疾病的診斷,病情監(jiān)測,療效觀察起到了一定的作用。 表 10 空白孔的 OD值 1 2 3 4 5 Mean SD LOD 空白孔 OD 值 由上表可知, LOD為 。綜上對于 HBsAg理論濃度為 間精密 度相對于高濃度的線性要差一些。 前言 10 ng/ml 從上表可知第一組數(shù)據(jù)和第三組數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性差,精密度高。 3 177。而 HBsAg ,不滿足 ng/ml級水平的 RSD一般應(yīng) 15%的要求,顯示低濃度的孔間重復(fù)性差,精密度不是很高,故以下對 HBsAg理論濃度為 。下表對 3組前言 9 數(shù)據(jù)做板間分析。 0 1 2 3 4 5 6 7 8 90 . 00 . 5. 01 . 52 . 0
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