【正文】 加樣步驟 加入酶標抗體， 50 ul/well，震蕩。 50ul/well, 共 1孔需 50ul，每孔配置 60ul備用，按照下表稀釋方案進行稀釋。 儀器 酶標儀： BioRad 680 ；洗板機： BioRad 1575；超純水系統(tǒng)：Millipore Elix ；電熱恒溫培養(yǎng)箱 (DNP9052)上海精宏實驗設備有限公司；振蕩器（蘇州管械， KJ201A）；移液器； Tip頭； EP管。隨著免疫學技術的不斷發(fā)展，抗原抗體檢測靈敏度明顯提高，使低水平乙肝病毒得以檢出，對臨床診斷及流行病學有重要意義 [1]。 方法 ：ELISA 法定量分析，應用試劑盒 HBsAg 標準品從濃度為 8ng/ml 做 2倍稀釋的 6 個濃度梯 度做標準曲線，以 6， 3， 度 5 復孔做準確度，精密度和檢測限等方法學驗證。 結果： 標準曲線R2=，準確度 %， ，不滿足 ng/ml級水平的 RSD 一般應 15%的要求，檢測限 LOD 為 ， 低濃度樣品（ ）的檢測在準確性和精密度方面都低于高濃度樣品，不適合低濃度樣品的檢測 。 ELISA法具有較高靈敏度、特異性強、 重復性好、可進行定量和半定量測定等優(yōu)點，可以在酶免疫分析儀上做批量檢測。 方法 前言 4 ．溶液配置 1 PBS緩沖液的配置： 稱取 8g NaCl、 KCl、 Na2HPO4和 KH2PO4，溶于 800ml蒸餾水中，用 HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至 ，最后加蒸餾水定容至 1L即可。 表 1 標準品的稀釋方案 質(zhì)控品的配置： 50ul/well, 共 5復孔需 250ul，配置 300ul備用，取 3個 2mlEP管，分別標記為 C1， C2， C3，按照下表稀釋方案進行稀釋。 37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱溫育 60min，取出后洗板 4次， 加入 A、 B液 , 50 ul/ well， 37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱溫育15 min。 表 6 準確度的驗證 HBsAg (ng/ml) 測定值（ ng/ml） 回收率（ %） 平均回收率 RR（ %） 3 個濃度的平均回收率 6 前言 7 3 % 結果顯示 HBsAg 6ng/ml和 3ng/ml的平均回收率為 %，%，滿足限度要求在 85%115%的范圍內(nèi)，而 HBsAg 的平均回收率為 %，滿足方法定量限在 80%120%的范圍內(nèi)。 177。首先對同一實驗條件下不同實驗人員所獲得的數(shù)據(jù)是否可用于板間分析做驗證。下表對 3組前言 9 數(shù)據(jù)做板間分析。 3 177。綜上對于 HBsAg理論濃度為 間精密 度相對于高濃度的線性要差一些。 3. 討論 乙肝表面抗原定量分析的意義 乙肝表面抗原是乙肝兩對半的其中一項，乙肝兩對半定性檢測對乙肝疾病的診斷，病情監(jiān)測，療效觀察起到了一定的作用。這在目前的臨床治療中應用十分廣泛。 方法概述 目前普遍使用的 HBsAg試劑盡管在制備時采用了高親和力的單克隆抗體，并且使包被抗體、酶標抗體的結合位點盡可能的遠。往預先包被 HBsAg捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本，標準品，HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。 應用試劑盒 HBsAg標準品從濃度為 8， 4， 2， 1, ， 個濃度梯度做標準曲線，以 6， 3， ，進 行準確度，精密度和檢測限等方法學驗證。方法準確度指待測濃度與真實濃度的接近值了，一般用相對回收率表示，限度要求在 85%— 115%的范圍內(nèi)。但是 HBsAg 濃度為 .5ng/ml的回收率為 %，顯示此試劑盒對于低濃度樣品的檢測準確度差。 綜上分析，該試劑盒對于高濃度樣品的檢測具有良好的準確性和較高的精密度，而對于低濃度樣品（ ）的檢測 在準確性和精密度方面都低于高濃度樣品，不適合低濃度樣品的檢測。我國是乙型肝炎病毒的高發(fā)區(qū) ,加強對乙型肝炎 (簡稱乙肝 )的檢出能力 ,是保障我國人民健康 ,促進經(jīng)濟發(fā)展和社會進步的重要措施。我們在追求低成本檢測的同時 ,必須保證檢測的質(zhì)量。而且乙肝兩對半定量檢測可與 HBV DNA熒光測定相互補充，綜合評價患者病情與藥物療效，為低含量的慢性乙肝、病毒攜帶者提供了正確判斷病情的依據(jù)。全自動酶免分析儀目前也廣泛應有，自動化、標準化的操作手段使實驗達到了全過程控制和全過程標準化分析，大大提高了實驗的精密度，使檢測結果更趨穩(wěn)定，從而保證了實驗結果的可靠性。試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度 OD值，計算樣品濃度。本次研究的 目的 是 對乙肝病毒表面抗原 (HBsAg)的方法學性能和實驗方法進行評價和分析。 研究 結果 是 HBsAg定性試驗的臨界值分別為 。 致謝 18 致 謝 在本次論文設計過程中，感謝我的學校，給了我學習的機會，在學習中，老師從選題指導、論文框架到細節(jié)修改，都給予了細致的指導，提出了很多寶貴的意見與建議，老師以其嚴謹求實的治學態(tài)度、高度的敬業(yè)精神、兢兢業(yè)業(yè)、孜孜以求的工作作風和大膽創(chuàng)新的進取精神對我產(chǎn)生重要影響。在這篇論文構思和寫作過程，我的論文指導老師 王敏 教授，對我論文的完成更是功不可沒， 張 老師每次 對 我的疑問給予細心的解答并給出寫作建議，對我的論文進行細心的修改，使得我的論文結構一步一步的完善，內(nèi)容日趨豐滿。 謹以此致謝最后，我要向百忙之中抽時間對本文進行審閱的各位老師表示衷心的感謝。 感謝所有授我以業(yè)的老師，沒有這些年知識的積淀，我沒有這么大的動力和信心完成這篇論文。這篇論文 是在老師的精心指導和大力支持下才完成的 。HBsAg:日間精密度 CV≤ %。連續(xù) 20d對 HBsAg的弱陽性質(zhì)控血清進行檢測 ,計算 s/co值 ,統(tǒng)計分析日間精密度 CV。選擇最低濃度為 ，絕大多數(shù) HBV感染者外周血中可出現(xiàn) HBsAg，含量在 5ng/m