【正文】 加樣步驟 加入酶標(biāo)抗體， 50 ul/well，震蕩。 50ul/well, 共 1孔需 50ul，每孔配置 60ul備用，按照下表稀釋方案進(jìn)行稀釋。 儀器 酶標(biāo)儀： BioRad 680 ；洗板機(jī)： BioRad 1575；超純水系統(tǒng)：Millipore Elix ；電熱恒溫培養(yǎng)箱 (DNP9052)上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；振蕩器（蘇州管械， KJ201A）；移液器； Tip頭； EP管。隨著免疫學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，抗原抗體檢測(cè)靈敏度明顯提高，使低水平乙肝病毒得以檢出，對(duì)臨床診斷及流行病學(xué)有重要意義 [1]。 方法 ：ELISA 法定量分析，應(yīng)用試劑盒 HBsAg 標(biāo)準(zhǔn)品從濃度為 8ng/ml 做 2倍稀釋的 6 個(gè)濃度梯 度做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，以 6， 3， 度 5 復(fù)孔做準(zhǔn)確度，精密度和檢測(cè)限等方法學(xué)驗(yàn)證。 結(jié)果： 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)R2=，準(zhǔn)確度 %， ，不滿(mǎn)足 ng/ml級(jí)水平的 RSD 一般應(yīng) 15%的要求，檢測(cè)限 LOD 為 ， 低濃度樣品（ ）的檢測(cè)在準(zhǔn)確性和精密度方面都低于高濃度樣品，不適合低濃度樣品的檢測(cè) 。 ELISA法具有較高靈敏度、特異性強(qiáng)、 重復(fù)性好、可進(jìn)行定量和半定量測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)，可以在酶免疫分析儀上做批量檢測(cè)。 方法 前言 4 ．溶液配置 1 PBS緩沖液的配置： 稱(chēng)取 8g NaCl、 KCl、 Na2HPO4和 KH2PO4，溶于 800ml蒸餾水中，用 HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至 ，最后加蒸餾水定容至 1L即可。 表 1 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋方案 質(zhì)控品的配置： 50ul/well, 共 5復(fù)孔需 250ul，配置 300ul備用，取 3個(gè) 2mlEP管，分別標(biāo)記為 C1， C2， C3，按照下表稀釋方案進(jìn)行稀釋。 37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱溫育 60min，取出后洗板 4次， 加入 A、 B液 , 50 ul/ well， 37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱溫育15 min。 表 6 準(zhǔn)確度的驗(yàn)證 HBsAg (ng/ml) 測(cè)定值（ ng/ml） 回收率（ %） 平均回收率 RR（ %） 3 個(gè)濃度的平均回收率 6 前言 7 3 % 結(jié)果顯示 HBsAg 6ng/ml和 3ng/ml的平均回收率為 %，%，滿(mǎn)足限度要求在 85%115%的范圍內(nèi)，而 HBsAg 的平均回收率為 %，滿(mǎn)足方法定量限在 80%120%的范圍內(nèi)。 177。首先對(duì)同一實(shí)驗(yàn)條件下不同實(shí)驗(yàn)人員所獲得的數(shù)據(jù)是否可用于板間分析做驗(yàn)證。下表對(duì) 3組前言 9 數(shù)據(jù)做板間分析。 3 177。綜上對(duì)于 HBsAg理論濃度為 間精密 度相對(duì)于高濃度的線(xiàn)性要差一些。 3. 討論 乙肝表面抗原定量分析的意義 乙肝表面抗原是乙肝兩對(duì)半的其中一項(xiàng)，乙肝兩對(duì)半定性檢測(cè)對(duì)乙肝疾病的診斷，病情監(jiān)測(cè)，療效觀察起到了一定的作用。這在目前的臨床治療中應(yīng)用十分廣泛。 方法概述 目前普遍使用的 HBsAg試劑盡管在制備時(shí)采用了高親和力的單克隆抗體，并且使包被抗體、酶標(biāo)抗體的結(jié)合位點(diǎn)盡可能的遠(yuǎn)。往預(yù)先包被 HBsAg捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本，標(biāo)準(zhǔn)品，HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。 應(yīng)用試劑盒 HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品從濃度為 8， 4， 2， 1, ， 個(gè)濃度梯度做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，以 6， 3， ，進(jìn) 行準(zhǔn)確度，精密度和檢測(cè)限等方法學(xué)驗(yàn)證。方法準(zhǔn)確度指待測(cè)濃度與真實(shí)濃度的接近值了，一般用相對(duì)回收率表示，限度要求在 85%— 115%的范圍內(nèi)。但是 HBsAg 濃度為 .5ng/ml的回收率為 %，顯示此試劑盒對(duì)于低濃度樣品的檢測(cè)準(zhǔn)確度差。 綜上分析，該試劑盒對(duì)于高濃度樣品的檢測(cè)具有良好的準(zhǔn)確性和較高的精密度，而對(duì)于低濃度樣品（ ）的檢測(cè) 在準(zhǔn)確性和精密度方面都低于高濃度樣品，不適合低濃度樣品的檢測(cè)。我國(guó)是乙型肝炎病毒的高發(fā)區(qū) ,加強(qiáng)對(duì)乙型肝炎 (簡(jiǎn)稱(chēng)乙肝 )的檢出能力 ,是保障我國(guó)人民健康 ,促進(jìn)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和社會(huì)進(jìn)步的重要措施。我們?cè)谧非蟮统杀緳z測(cè)的同時(shí) ,必須保證檢測(cè)的質(zhì)量。而且乙肝兩對(duì)半定量檢測(cè)可與 HBV DNA熒光測(cè)定相互補(bǔ)充，綜合評(píng)價(jià)患者病情與藥物療效，為低含量的慢性乙肝、病毒攜帶者提供了正確判斷病情的依據(jù)。全自動(dòng)酶免分析儀目前也廣泛應(yīng)有，自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化的操作手段使實(shí)驗(yàn)達(dá)到了全過(guò)程控制和全過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化分析，大大提高了實(shí)驗(yàn)的精密度，使檢測(cè)結(jié)果更趨穩(wěn)定，從而保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度 OD值，計(jì)算樣品濃度。本次研究的 目的 是 對(duì)乙肝病毒表面抗原 (HBsAg)的方法學(xué)性能和實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)和分析。 研究 結(jié)果 是 HBsAg定性試驗(yàn)的臨界值分別為 。 致謝 18 致 謝 在本次論文設(shè)計(jì)過(guò)程中，感謝我的學(xué)校，給了我學(xué)習(xí)的機(jī)會(huì)，在學(xué)習(xí)中，老師從選題指導(dǎo)、論文框架到細(xì)節(jié)修改，都給予了細(xì)致的指導(dǎo)，提出了很多寶貴的意見(jiàn)與建議，老師以其嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的治學(xué)態(tài)度、高度的敬業(yè)精神、兢兢業(yè)業(yè)、孜孜以求的工作作風(fēng)和大膽創(chuàng)新的進(jìn)取精神對(duì)我產(chǎn)生重要影響。在這篇論文構(gòu)思和寫(xiě)作過(guò)程，我的論文指導(dǎo)老師 王敏 教授，對(duì)我論文的完成更是功不可沒(méi)， 張 老師每次 對(duì) 我的疑問(wèn)給予細(xì)心的解答并給出寫(xiě)作建議，對(duì)我的論文進(jìn)行細(xì)心的修改，使得我的論文結(jié)構(gòu)一步一步的完善，內(nèi)容日趨豐滿(mǎn)。 謹(jǐn)以此致謝最后，我要向百忙之中抽時(shí)間對(duì)本文進(jìn)行審閱的各位老師表示衷心的感謝。 感謝所有授我以業(yè)的老師，沒(méi)有這些年知識(shí)的積淀，我沒(méi)有這么大的動(dòng)力和信心完成這篇論文。這篇論文 是在老師的精心指導(dǎo)和大力支持下才完成的 。HBsAg:日間精密度 CV≤ %。連續(xù) 20d對(duì) HBsAg的弱陽(yáng)性質(zhì)控血清進(jìn)行檢測(cè) ,計(jì)算 s/co值 ,統(tǒng)計(jì)分析日間精密度 CV。選擇最低濃度為 ，絕大多數(shù) HBV感染者外周血中可出現(xiàn) HBsAg，含量在 5ng/m