乙肝表面抗原的elisa法定量分析方法學驗證畢業(yè)論文(編輯修改稿)
2025-10-01 16:21 本頁面
【文章內容簡介】 PBS 取 剩余（ ul） 標記 （ ul） C1 6 150 標準品 450 C2 3 300 C1 300 300 C3 300 C2 300 300 前言 5 空白對照加入 1 PBS緩沖液。 表 3 鋪板方案 ．加樣步驟 加入酶標抗體， 50 ul/well，震蕩。 37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱溫育 60min，取出后洗板 4次， 加入 A、 B液 , 50 ul/ well， 37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱溫育15 min。加入終止液， 50 ul/ well。酶標板放入酶標儀，蓋上蓋子，在電腦上打開 Microplate Manager ，選擇 450nm波長（參照波長630nm），設置 LAYOUT和報告模式，測定各孔吸收值。 2. 結果 標準曲線與線性范圍 標準品理論濃度對應的實測 OD值 表 4 實測 OD值 HBsAg(ng/ml) 8 4 2 1 OD 以 HBsAg理論濃度為橫坐標，所測 OD值為縱坐標作圖，繪制標準曲線觀察線性關系，結果顯示 R2=，顯示具有良好的相關性 1 2 3 4 5 A S1 C1 C2 C3 PBS B S2 C1 C2 C3 PBS C S3 C1 C2 C3 D S4 C1 C2 PBS E S5 C1 C3 PBS F S6 C2 C3 PBS 前言 6 0 1 2 3 4 5 6 7 8 90 . 00 . 51 . 01 . 52 . 0y = 0 . 1 8 1 6 X + 0 . 2 3 0 7 R2 = 0 . 9 9 7 3C o n c ( n g / m l )Absorbance(OD) 圖 1 線性關系圖 準確度（回收率）的驗證 質控品理論稀釋濃度對應實測濃度值 表 5 實測濃度值 HBsAg (ng/ml) 測定值 1 2 3 4 5 6 3 質控品做了 3個濃度梯度，每個濃度做了 5個復孔，下表是對每個濃度梯度進行準確度（回收率）的驗證。 表 6 準確度的驗證 HBsAg (ng/ml) 測定值（ ng/ml） 回收率（ %） 平均回收率 RR（ %） 3 個濃度的平均回收率 6 前言 7 3 % 結果顯示 HBsAg 6ng/ml和 3ng/ml的平均回收率為 %，%，滿足限度要求在 85%115%的范圍內，而 HBsAg 的平均回收率為 %，滿足方法定量限在 80%120%的范圍內。 3個濃度梯度的平均回收率為 %，顯示準確性好。 精密度的驗證 板內 精密度的驗證 表 7 板內精密度的驗證 HBsAg (ng/ml) 測定值 XS? RSD(%) 1 2 3 4 5 6 177。 3 177。 177。 上表中 RSD(%)這一參數表示相對標準偏差，也就是變異系數 CV值， HBsAg 6ng/ml的 5個復孔的變異系數 CV值為 %，顯示孔間差異較大，精密度不高，但是也符合 ng/ml級 RSD水平的一般應 15%的要求，其中有一孔濃度為 ，與其它孔比較差異較大，可能是由于操作引起例如加樣不準。而 3ng/ml,和 ，%，符合顯示孔間重復性好，符合 ng/ml級 RSD水平的一般應 15%前言 8 的要求，精密度高。 板間精密度的驗證 從同一實驗室中獲取 2組同樣的數據，做板間精密度的驗證。首先對同一實驗條件下不同實驗人員所獲得的數據是否可用于板間分析做驗證。 表 8 板間精密度的驗證 HBsAg(ng/ml) 8 4 2 1 第二組 OD 值 第三組 OD 值 以 HBsAg理論濃度為橫坐標，所測 OD值為縱坐標作圖，繪制標準曲線觀察線性關系。 0 1 2 3 4 5 6 7 8 90 . 00 . 5. 01 . 52 . 02 . 5第三組第二組R 2 = 0 . 9 9 1R 2 = 0 . 9 6 7C o n c ( n g / m l )Absorbance(OD) 圖 2 線性關系曲線 以上標準曲線結果顯示第二組數據的 R2 =，第三組數據 R2 =。第二組數據由于有一些孔與標準曲線偏離較大，但考慮到隨機抽樣與均數存在一定誤差，還是可以用于統(tǒng)計學分析。下表對 3組前言 9 數據做板間分析。 從表中 3個組的數據比較可知， HBsAg 6ng/ml和 3ng/ml的 RSD分別為 %， %，滿足對 ng/ml級水平的 RSD一般應 15%的要求，精密度高。而 HBsAg ，不滿足 ng/ml級水平的 RSD一般應 15%的要求，顯示低濃度的孔間重復性差，精密度不是很高，故以下對 HBsAg理論濃度為 。 對 HBsAg理論濃度為 ，精密度分析 表 9 精密度分析 HBsAg (ng/ml) 測定值（ ng/ml） 回收率（ %） 平均回收率 RR（ %） SD% CV% 第一組數據 ng/ml 第二組數據 ng/ml 第三組數據 HBsAg (ng/ml
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