【文章內(nèi)容簡介】 求 司可巴比妥的含量 l)1 3 . 0 1 ( m g / . 0 52Br????T溴滴定液的滴定度 T %100%)(100%)(%含量3222322OSNaBrOSNas0??????????WFTVV）（司可巴比妥二、光譜分析法 光譜分析法 ， 是利用物質(zhì)的光譜進(jìn)行定性 、定量和結(jié)構(gòu)分析 。 通過測定被測物質(zhì)在光譜的特定波長處或一定波長范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度 ， 對物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的方法稱為分光光度法 。 《 中國藥典 》 收載的光譜分析法有：紫外 可見分光光度法 、 紅外分光光度法 、 熒光分析法等 。 可見分光光度法 紫外光區(qū)： 200～ 400；可見光區(qū)： 400～ 760nm ① 朗伯 比爾定律 A：吸光度； T：透光率； L：比色皿厚度； C：每 100ml溶液中所含被測物質(zhì)的重量（ g）； E：吸收系數(shù)，以 表示，物理意義為當(dāng)溶液 濃度為 1%(g/ml)， L為 1cm時(shí)的吸光度。 E C LTA ?? 1lo g%11cmE② 特點(diǎn) a. 靈敏度高（ 104～ 107g/ml） b. 準(zhǔn)確度高（相對誤差： 2%～ 5%） c. 儀器價(jià)格低廉，操作簡單，易于普及。 d. 應(yīng)用廣泛，借助化學(xué)計(jì)量學(xué)方法，可不經(jīng)分離直接測定混合物中各組分含量。 ③ 儀器校正和鑒定 a. 波長校正 :利用汞燈或氘燈中的較強(qiáng)譜線 。 b. 吸光度的準(zhǔn)確度的檢定：利用重鉻酸鉀的硫酸溶液在規(guī)定波長處的吸收系數(shù) 。 c. 雜散光的檢查：利用規(guī)定濃度的碘化鈉或亞硝酸鈉溶液在規(guī)定波長處的透光率 。 ④ 對溶劑的要求 a. 含雜原子的有機(jī)溶劑具有很強(qiáng)的末端吸收 ，使用時(shí)不能超出其截止波長 （ 如甲醇和乙醇的截止波長為 205nm） 。 b. 溶劑的吸光度： 220～ 240nm， ≤ 241～ 250nm， ≤ 251～ 300nm， ≤ 300nm以上 ， ≤ ⑤ 測定方法 a. 對照品比較法 : RRXX CAAC ??CX：供試品溶液的濃度； AX：供試品溶液的吸光度 CR：對照品溶液的濃度； AR：對照品溶液的吸光度 b. 吸收系數(shù)法 : 100%11XX ??cmEAC CX：供試品溶液的濃度（ g/ml）； AX：供試品溶液的吸光度； ：被測成分的百分吸收系數(shù) (要求： 100）； 100：濃度換算因素，將 g/100ml換算成 g/ml。 %11cmEc. 顯色法 :當(dāng)供試品在紫外 可見光區(qū)沒有強(qiáng)吸收 ， 或雖有吸收 ， 但為了避免干擾或提高靈敏度 ， 加入適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色后進(jìn)行測定 。 利用熒光強(qiáng)度與溶液中發(fā)射熒光的物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系進(jìn)行定量分析。 ① 特點(diǎn) a. 靈敏度高（ 1010～ 1012g/ml） b. 適用與低濃度溶液（濃度太高可致 “ 自熄滅 ” ） c. 對易被光分解的樣品 ， 需使用基準(zhǔn)溶液代替對照品溶液校正儀器的靈敏度 。 d. 能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)較少 ， 常需使用熒光衍生試劑得到強(qiáng)熒光 ， 以提高靈敏度和選擇性 。 ② 干擾因素的排除 a. 溶劑： 溶劑不純會帶來較大誤差，蒸餾后再使用。 b. 溶液： 懸浮物對光有散射作用， 過濾或離心除去；溶解氧有降低熒光的作用，通入惰性氣體除氧。 c. 玻璃儀器： 玻璃儀器和測定池應(yīng)高度潔凈。 d. 溫度： 溫度對熒光強(qiáng)度有較大影響，需控制溫度。 ③ 測定法 rrbrXbXX CRRRRC ??CX：供試品溶液的濃度 Cr：對照品溶液的濃度 RX：供試品溶液的熒光強(qiáng)度 Rr：對照品溶液的熒光強(qiáng)度 RXb：供試品溶液試劑空白的熒光強(qiáng)度 Rrb：對照品溶液試劑空白的熒光強(qiáng)度 利用混合物中各組分在吸附劑上的吸附能力的不同或在兩相中的分配系數(shù)的不同 ， 先行分離后再在線對各組分逐一進(jìn)行分析 。 ① 高效液相色譜法： ? 靈敏度高 （ 1012～ 1015g/ml） ? 高選擇性 ? 高效能 ? 高速度 ? 應(yīng)用廣泛 a. 對儀器的一般要求 色譜柱填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠 、 辛基 （ 或氨基 、 氰基 ） 硅烷鍵和硅膠 、 離子交換劑 （ 離子交換色譜 ） 、 凝膠或高分子多孔微球 （ 分子排阻色譜 ） ； 十八烷基硅烷鍵合硅膠 （ C18） 固定相：甲醇 水 、 乙腈 、 緩沖液 、 反離子物質(zhì)等可為流動相 。 但流動相中有機(jī)溶劑不應(yīng) 5%， 以使 C18保持伸展?fàn)顟B(tài) 。 ? 柱溫： 室溫 ? 進(jìn)樣量： 數(shù)微升 ? 檢測器： 紫外檢測器 不同檢測器和固定相對流動相的要求不同 紫外檢測器：流動相符合紫外 可見分光光度法對溶劑的要求； 蒸發(fā)光散射檢測器和質(zhì)譜檢測器：流動相中不允許含有不揮發(fā)的鹽組分； 《 中國藥典 》 中規(guī)定的條件除固定相種類 、 流動相組成 、 檢測器類型不得任意改變 ， 其他如色譜柱內(nèi)徑 、 長度 、柱溫 、 進(jìn)樣量等可適當(dāng)改變 ， 以適應(yīng)具體體系 。 b. 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)： 色譜柱的理論板數(shù) （ n） ： n = (tR/wh/2)2 wh/2：半峰寬 tR：供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物色譜峰保留時(shí)間 分離度 （ R） ： 2121 )(2WWttR RR??tR1， tR2：兩相鄰色譜峰的保留時(shí)間 w1， w2：兩相鄰色譜峰的峰寬 重復(fù)性 ： 連續(xù)進(jìn)樣 5次 ， 峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于 2%。 拖尾因子 （ T） ： 12 dWT h?： 5%峰高處的峰寬 d1：峰頂點(diǎn)至峰前沿 5%峰高處 之間的距離 應(yīng)用峰高法定量時(shí)， T值應(yīng)在 ～ 。 c. 測定法： ① 內(nèi)標(biāo)法加校正因子法： SSRR//CACAf ?）校正因子（39。R39。RXX / CAAfC ??）含量（AR：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積； AS：對照品的峰面積 CR：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度； CS：對照品的濃度 AX：供試品的峰面積； AR?： 內(nèi)標(biāo)物質(zhì) 的峰面積 CX： 供試品 的濃度； CR?： 內(nèi)標(biāo)物質(zhì) 的濃度 ② 外標(biāo)法： RXRX AACC ??）含量（AX：供試品的峰面積； AR： 外標(biāo)物質(zhì) 的峰面積 CX： 供試品 的濃度； CR： 外標(biāo)物質(zhì) 的濃度 由于微量進(jìn)樣器不易精確控制進(jìn)樣，當(dāng)采用外標(biāo)法定量時(shí)，宜用自動進(jìn)樣器進(jìn)樣。 ② 氣相色譜法 a. 對儀器的一般要求 色譜柱： 填充柱 （ 材質(zhì)：不銹鋼或玻璃 ， 載體：硅藻土或高分子多孔小球 ） 或毛細(xì)管組柱 （ 材質(zhì)：玻璃或石英 ， 固定液：甲基聚硅氧烷等 ） . 檢測器： 氫火焰離子化檢測器 進(jìn)樣量： 數(shù)微升 檢測溫度： 250～ 350?C（ 以免水汽凝結(jié) ） 《 中國藥典 》 中規(guī)定的條件除檢測器種類 、 固定液品種 、 及特殊指定的色譜柱材料不得任意改變 ， 其他如色譜柱內(nèi)徑 、 長度 、 固體液涂布濃度 、 進(jìn)樣量等可適當(dāng)改變 ， 以適應(yīng)具體體系 。一般色譜圖約于 30min內(nèi)記錄完畢 。 b. 氣相色譜系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)同高效液相色譜。 c. 測定法： 除高效液相色譜項(xiàng)下規(guī)定的兩種方法外，亦可采用標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法。 XXSXisCCCAA ???1)/( XisXX ??AACCAX：供試品中待測組分的峰面積 Ais：加入對照品后待測組分的峰面積 CX： 供試品中待測組分 的濃度 ΔCX： 加入的已知濃度的待測組分對照品 的濃度 測定法方法的選擇 手工進(jìn)樣：采用內(nèi)標(biāo)法 自動進(jìn)樣：采用內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法 頂空進(jìn)樣：標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法 當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法與其他定量方法結(jié)果不一致時(shí) ， 應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)加入法的結(jié)果為準(zhǔn) 。 第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證 一、準(zhǔn)確度 方法測定結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度 ，一般用回收率 （ %） 表示 。 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的目的是證明采用的方法適合于相應(yīng)的檢測要求 。 驗(yàn)證的內(nèi)容包括：準(zhǔn)確度 、 精密度 、 專屬性 、 檢測限 、 定量限 、 線性 、 范圍和耐用性 。 1. 含量測定方法 ① 原料藥的含量測定： 用已知純度的對照品或供試品進(jìn)行測定 ， 計(jì)算回收率 。 100%% ?? 加入量測得量）回收率（② 制劑的含量測定： 用含已知量被測物的制劑各組分混合物進(jìn)行測定 ， 回收率按上式計(jì)算 。如不能獲得制劑的全部組分 ， 可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定 ， 回收率則應(yīng)按下式計(jì)算 。 1 0 0 %% ?? 加入量 本底量測得量）回收率（2. 雜質(zhì)定量測定方法 雜質(zhì)定量測定多采用色譜法 ， 其準(zhǔn)確度可通過向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測試 。 如不能獲得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物 ， 可將本法測試結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較 。 應(yīng)表明單個(gè)雜質(zhì)或雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比 （ %） 或面積比 （ %） 。 3. 數(shù)據(jù)要求 至少用 9個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)； 應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率 (%)， 或測定結(jié)果的平均值與真實(shí)值之差及其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信度 。 二、精密度 在規(guī)定的測試條件下 ， 同一均勻供試品 ，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度 。 精密度可用偏差 、 標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示 。 ?標(biāo)準(zhǔn) （ 偏 ） 差 （ SD） ? ?12? ?nxxSD ixxd i ??偏差（ d）：測量值與平均值之差 %1 0 0??xSDR S D?相對標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（ RSD) 1. 驗(yàn)證內(nèi)容 ① 重復(fù)性： 在較短時(shí)間間隔內(nèi) ， 在相同的操作條件下由同一分析人員所測的結(jié)果的精密度 （ 批內(nèi)精密度 ） 。 至少用 9個(gè)結(jié)果