【正文】 。我公司在制備含有天然多糖的中藥注射劑，其多糖的純化除選用聚酰胺樹脂外，也選用葡萄糖凝膠，如牛膝多糖、當(dāng)歸多糖、淫羊霍多糖、天花粉多糖等選用葡聚糖凝膠 SephadexG150 ， SephadexG75 柱層析，水洗脫，乙醇沉淀分離純化，多糖純度大大提高。 凝膠柱層析分離是被分離物質(zhì)的溶液流經(jīng)凝膠柱時，因分子量的大小不同而被分離的一種純化技術(shù)，其原理是可逆的分子篩作用，大分子物質(zhì)由于直徑較大，不易進入凝膠顆粒的微孔中，只能分布于凝膠顆粒間隙中，向下移動的速度快，小分子則相反，在向下移動的過程中，要等待它們從凝膠內(nèi)擴散至顆粒間隙后才能進入另一凝膠顆粒內(nèi)，如此不斷地進入和擴散的結(jié)果，使小分子物質(zhì)下移速度落后于大分子物質(zhì)，從而達到分離目的，在中藥分離純化中最常用的是葡聚糖凝 中國最龐大的下載資料庫 (整理 . 版權(quán)歸原作者所有 ) 第 24 頁 共 24 頁 膠，其次為聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠。大孔樹脂型號不同，其極性不同，不同型號適用于不同有效成分或有效部位的分離純化。大孔樹脂的優(yōu)點是品種多 , 比表面積大，吸附力強，選擇性高，可用于多種有效成分或有效部位的分離純化，其缺點是可帶進毒性大的甲苯、二甲苯等殘留物。我公司在研制銀杏葉注射劑中，銀杏葉粗提物采用聚酰胺吸附，分別用 35% 和 65% 乙醇洗脫，不但可除去銀杏葉粗提物中的烷基酚酸類等多種有害雜質(zhì)，而且可將銀杏黃酮和內(nèi)酯洗下來，從而達到十分理想的分離純化目的。聚酰胺分子中存在眾多酰胺鍵，可與酚類、酸類、醌類、黃酮類等多種化合物形成氫鍵而吸附，在水中 形成氫鍵的能力強，吸附強，在有機溶劑中則較弱，在酸性溶劑中強，堿性溶劑中最弱。在研制銀杏內(nèi)酯注射劑中，采用活性炭、硅膠柱層析工藝，可將內(nèi)酯進一步純化，純化后的萜類內(nèi)酯純度可達 85% 以上，符合 SFDA 有效部位投料其純度必須達到 80% 中國最龐大的下載資料庫 (整理 . 版權(quán)歸原作者所有 ) 第 23 頁 共 24 頁 以上的要求。 4 、吸附劑類輔料的選用 欲研制成功一種中藥注射劑，需要最大限度地保留有效成分，盡可能除去蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂等無效成分，即達到良好的分離純化，提高提取物（中間體）的純度，在中藥粗提物的分離純化工藝中，選用適宜適量的吸 附劑進行分離純化往往可達到預(yù)想的效果。 3 、絮凝澄清劑類輔料的選用 絮凝澄清劑在中藥提取液的分離純化工藝中得到廣泛的應(yīng)用，當(dāng)中藥提取液十分混濁，難用醇沉工藝、離心工藝或冷藏工藝澄清時，或者為了節(jié)省資源，可選用 ZTC1+1 、科陽 1+1 、 101 果汁澄清劑、甲殼糖等天然澄清劑，這類澄清劑屬于天然多糖類，無毒安全，在中藥注射劑研制中，用于澄清藥液，除去淀粉、蛋白質(zhì)、樹脂、鞣質(zhì)等雜質(zhì)非常有效，對有效成分或有效部位幾乎無影響，節(jié)省醇沉或減少醇沉次數(shù)。如果是由于在提取過程 中國最龐大的下載資料庫 (整理 . 版權(quán)歸原作者所有 ) 第 22 頁 共 24 頁 中，有效成分或有效部位不穩(wěn)定，可根據(jù)情況使用穩(wěn)定劑，如使用適宜適量的抗氧劑和抗氧增效劑或水解阻止劑。 在中藥有效成分或有效部位的提取中，當(dāng)使用水或乙醇作溶劑均難以將其提出時，應(yīng)分析原因，如果是由于藥材富含蠟質(zhì)、脂肪、樹脂，影響水或乙醇的浸潤滲透，可采用石蠟、石油醚、乙醚脫脂后再用水或乙醇提取，或直接用乙酸乙酯或丙酮提?。蝗绻承┯行С煞只蛴行Р课怀甥}后可增加溶解性，可加入適宜適量的酸或堿，使其成鹽，增加其提取轉(zhuǎn)移率。這種葡聚糖凝膠或聚酰胺吸附除雜質(zhì)的工藝，所得多糖中間體純度比多次醇沉法高，可將蛋白質(zhì)、脂類等雜質(zhì)除盡，含量高 5 ～ 8 個百分點，顏色淺，為白色或類白色，易于過濾澄明。人參多糖、麥冬多糖、淫羊藿多糖的分子量相對較低，醇沉?xí)r的乙醇濃度應(yīng)高到 85 ～ 90% 。 多糖的純化，一般采用多次醇沉法，常采用 3 次醇沉法即可達到純化目的，第一次醇沉后一定要干燥，使同時被沉淀的蛋白質(zhì)、膠質(zhì)等雜質(zhì)變性固化，再用 中國最龐大的下載資料庫 (整理 . 版權(quán)歸原作者所有 ) 第 21 頁 共 24 頁 水溶解后冷藏或離心，除去水不溶性雜質(zhì)，濃縮后再用乙醇反復(fù)沉淀。黃芪、淫羊藿除含多糖外，還含苷類和黃酮，但黃芪苷類和黃酮以及淫羊藿苷類和黃酮均可溶于熱水，因此，這兩種藥材可用水作溶劑煎煮提取，提取液濃縮后采用醇沉法即可將多糖沉淀分離。例如人參含有人參皂苷，也含有多糖，但人參總皂苷更易溶于乙醇，故首先用 75% 乙醇回流提取人參總皂苷，藥渣再用水煎煮提取人參多糖。 含多糖類中藥材提取、分離純化輔料的選擇 一般來說，含多糖（ Polysaccharides ）中藥材的提取溶劑只能用水或 30% 以下濃度的稀醇提取。 又如從千金藤（ Slophania sinica Diels ）根提取生物堿 1 四氫巴馬丁（ Telrahyro palamatine ），使用 2% 硫酸作浸出輔助劑，經(jīng)滲漉工藝制得含生物堿硫酸鹽的水溶液，經(jīng)濃氨水調(diào)節(jié) pH 值至 10 左右，讓生物堿沉淀，收集沉淀干燥后得粗生物堿，粗生物用乙醇回流，濃縮，冷藏即可得到較純的四氫巴馬丁。附子和甘草合煎可達到減毒增效作用，烏頭堿轉(zhuǎn)為次烏頭堿，毒性大大降低，而藥效增強；與甘草合并煎煮，甘草酸類有利于與附子生物堿成鹽，增加水中溶解度，有利于附子生物堿的提出。傳統(tǒng)的四逆湯，是將附子、甘草水煎煮提取，干姜采用水蒸氣蒸餾芳香油，姜渣用水煎煮提取后與芳香油合并，再與附甘提取液合并。一般講，游離存在的生物常用乙醇等有機溶劑回流提取；必要時加入一定的有機酸或無機酸作浸出輔助劑，使生物堿轉(zhuǎn)成鹽，用水作溶劑提取；以鹽的形式存在或以苷的形式存在的生物既可用水提取亦可用稀醇提取，應(yīng)根據(jù)提取轉(zhuǎn)移率、與隨之提出雜質(zhì)的多少以及后續(xù)分離純化的難易選擇適宜的溶劑和工藝進行提取。因此，藥材中生物堿的提取，涉及到溶劑、浸出輔助劑等藥劑輔料。 含生物堿藥材提取、分離純化輔料的選用 生物堿（ alkaloids ）是一類含氮的天然有機化合物，具廣泛的生理活性。黃芩苷類可溶于水，黃芩苷接有葡萄糖醛酸，顯弱酸性，溶于堿，遇較強的無機酸易析出。如果采用乙醇回流提取，提取率與水基本一致，但水沉分離困難，即使冷藏，亦難以澄清，不但操作麻煩、費時費工，而所提取物（中間體）純度低 ，僅為 15% 左右，中間體制備的注射液，放置數(shù)周即產(chǎn)生混濁、沉淀；只用乙醇提取則不能將多糖提出，浪費資源。因此，可設(shè)計用水煎煮提取。 銀杏葉使用的藥用部位是葉，淫羊霍為全草，黃芩為根莖；銀杏葉除含黃酮有效成分外，還含有難溶于水的萜類內(nèi)酯有效成分，銀杏葉既含有游離黃酮也含有黃酮苷，因此，不宜用水提取，經(jīng)試驗，用水煎煮提取 3 次， 黃酮的提取率僅為 45% 左右，而萜類內(nèi)酯僅為 30% ；用 70% 乙醇回流提取 3 次，黃酮提取率和內(nèi)酯提取率均可達 90% ，然后采用水沉、乙酸乙酯和丁醇萃取、聚酰胺吸附層析等分離純化，提得的銀杏葉提取物（中間體），質(zhì)量可達國際標(biāo)準(zhǔn)，含黃酮醇苷大于 24% ，一般在 28% 左右，含總內(nèi)酯大于 6% ，一般在 8% 左右，雜質(zhì)（包括銀杏酚酸類）均符合規(guī)定，烷基酚酸類限量，以氫化白果酸計，一般均在 1ppm 以下。上述是一般情況，對某一含黃酮的具體藥材而言，應(yīng)根據(jù)所含黃酮的水溶性及其含量的多少，除黃酮外的其有效部分及其性質(zhì)、所含蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂等雜質(zhì) 的情況以及藥材所屬植物部位不同（全草、根、莖、葉）等具體情況設(shè)計出不同的溶劑提取和不同的分離純化工藝，經(jīng)篩選試驗，最終才能獲得適宜的溶劑提取工藝和分離純化工藝。 含黃酮類有效成分藥材、提取、分離純化輔料的選用 中國最龐大的下載資料庫 (整理 . 版權(quán)歸原作者所有 ) 第 17 頁 共 24 頁 黃酮類化合物（ Flavonoides ）的基本母核可認(rèn)為是無苯基色原酮，有的具有良好的心腦血管藥理活性，有的具有抗菌消炎作用，有的具有保肝作用。經(jīng)篩選，采用石油醚脫脂，用 50% 乙醇滲漉，提取率可達 90% 以上，滲漉液回收乙醇后，再經(jīng)水沉、仲丁醇萃取以及酸堿處理等分離純化工藝，可將紅景天苷提取物（中間體）的純度大大提高，紅景天苷等有效成分的含量可達 25% 以上，制成的注射液久置不會變色或沉淀。 又如開發(fā)含紅景天藥材的注射劑，紅景天的主要有效成分為紅景天苷和紅景天黃酮，提取工藝與人參和黃芪的工藝則完全不同。黃芪用水提取，比用乙醇提取為佳。 如研制含人參藥材的注射劑和含黃芪藥材的注射劑，盡管兩種藥材均含苷類，人參含人參皂苷類，黃芪含黃芪皂苷類，經(jīng)篩選試驗，人參采用 75% 乙醇回流提取 3 次，不但提取率在 90% 以上，為下一步水沉結(jié)合仲丁醇萃取分離純化提供了方便，使得到的人參皂苷提取物（中間體）含量高，藥渣再用水提取人參多糖，經(jīng)濃縮后醇沉并結(jié)合聚酰胺柱分離純化，人參多糖不但收得率高，為藥材量的 5 ～ 6% ，而且純度高，含量可達 70% 以上，外觀性狀為白色或類白色。 含苷類有效成分藥材提取、分離純化輔料的選用 苷類（ Glycosides ）有效成分按苷元的化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為香豆素苷、木脂素苷、蒽醌苷、黃酮苷、吲哚苷等多種，其親水性隨苷元化學(xué)結(jié)構(gòu)、所接糖的種類和數(shù)目有較顯著的區(qū)別，但大多數(shù)苷類親水性強，可用水提取，也可用不同濃度的乙醇提取。如中藥材或粗提取有必要進行脫脂處理