【正文】 術后動物出現(xiàn)不同程序的截癱癥狀 ， 脊髓血流量下降 ， 病理檢查 ，病變主要累及前角及中央管周圍 ， 表現(xiàn)為：神經(jīng)細胞稀少 ， 核固縮 。 切口分層縫合 。 用 %戊巴比妥鈉靜脈麻醉（ ） 。 1982年 Zivin首次利用兔制作脊髓缺血性損傷模型 ， 以了解脊髓缺血時間與損傷程度的關系 。 研究發(fā)現(xiàn) ， 輕度損傷引起血流改變的類型有所不同 ， 而重度損傷均引起缺血 。 不論創(chuàng)傷程度如何 ， 脊髓損傷后灰質在 1~2h內迅速出現(xiàn)缺血和梗死 。本模型可用于脊髓損傷的病理生理機制和實驗性治療研究。 動物出現(xiàn)明顯的截癱癥狀 ， 脊髓誘發(fā)電位潛伏期延長 ， 波形消失或寬大畸形 。 用一定重量砝碼 ， 從預定高度沿玻璃管自由落下 ， 撞擊撞桿 ， 造成脊髓分級損傷 ， 傷力以勢能 （ ） 表示 。 無菌條件下 ， 于動物背側正中切開皮膚 ，皮下組織 。 選擇不同重量的砝碼用作打擊物 。 ? 1． 實驗方法 選用成年健康狗 、 兔或大鼠 。 因而 ， 一些學者對WD法進行了改進 。 但 Allen氏打擊法尚存在一些技術問題 ， 如在挫傷脊髓的瞬間 ， 脊柱和脊髓的不穩(wěn)定及脊髓的側向偏移 ， 導致脊髓損傷的不對稱 ， 損傷區(qū)大小亦不恒定 。 目前 ， 較為成熟的脊髓損傷模型有脊髓背側損傷模型 ， 脊髓腹側損傷模型 ，脊髓縱向壓縮損傷模型 ， 脊髓缺血性損傷模型以及脊髓火器傷損傷模型 。 ? （ 2） 有無骨折 ， 硬膜外血腫 ， 腦挫裂傷等 。 ? 3． 評價指標 ? （ 1） 動物受到打擊后可出現(xiàn)意識障礙和行為功能異常 。 ? （ 5） 消毒 ， 縫合皮膚 。 ? （ 4） 用一定重量砝碼 ， 從預定高度沿玻璃管自由落下 ， 撞擊撞桿 ， 造成顱骨及腦組織損傷 ， 傷力以勢能克厘米 （ g ? ? （ 3） 根據(jù)實驗要求 ， 選擇合適管徑和長度的玻璃管 ， 合適的砝碼 。 也可根據(jù)實驗要求 ， 用骨鉆去除顱骨 ， 暴露硬腦膜 ， 注意勿損傷硬腦膜和腦組織 。 2． 實驗方法 ? （ 1） 用 10%水合氯醛 （ 300mg/kg） 腹腔注射麻醉動物 ， 固定于腦立體定位儀上 。 ? （ 2） 重力打擊裝置：金屬臺架 ， 不同管徑和長度的玻璃管 ， 金屬砝碼 、 撞桿 。適用于各種實驗動物 ， 現(xiàn)以大鼠為例進行介紹 。 可根據(jù)實驗的要求 ， 人為地控制損傷的部位 、 損傷區(qū)域的大小 ，并通過更換不同重量的物體控制損傷的程度 。 目前 ， 有關顱腦外傷模型很多 ， 缺乏統(tǒng)一的分型 ，此處只介紹本實驗室開展的顱腦背側外傷模型 。 ? 一 、 顱腦外傷模型 ? 顱腦外傷可因外力的大小 、 方向 、 速度 、著力點 、 武器的性質 （ 銳性或鈍性 ） 等因素造成不同程度的閉合性或開放性顱腦損傷 ， 病情的嚴重程度受傷時病人的體位 、精神狀態(tài)和身體素質等因素也有重要的關系 。 因此 ， 該領域的實驗研究顯得特別重要 。 該模型可以通過對電流的調節(jié) ， 根據(jù)腦內放電狀況進行相關生理學和藥理學研究 ， 特別是在抗痙攣藥物療效觀察 ， 多使用這一方法 。 另一方面 ， 用60Hz、 ， 刺激誘發(fā)最大發(fā)作 。 再稍稍提高刺激電壓 ，會引起間歇性發(fā)作 ， 這種狀態(tài)僅持續(xù) 5秒左右 ， 將其作為最小電刺激 （ EST） 。 為了引起閾值發(fā)作 ， 要給小鼠或大鼠比較強的刺激 。 ? 五 、 電刺激誘發(fā)痙攣模型 ? 在實驗動物頭部通電可引起痙攣發(fā)作 。 4去氧吡哆醇和異煙肼類物質如磷酸吡哆醛等則依賴酶系抑制劑誘發(fā)痙攣 ， 但多為疾走痙攣 。 印防己毒素和荷花牡丹堿作用于突觸后受體阻斷 γ氨基酪酸作用 ， 以此誘發(fā)痙攣 ， 臨床表現(xiàn)與戊四氮引起的痙攣非常相似 ， 但潛伏期較長 。 ? 5． 點燃標準 在連續(xù)注射馬桑內酯 3~5次期間 ，出現(xiàn) 3次 Ⅳ ~Ⅴ 級發(fā)作即被認為達到點燃標準 。V， 比基波高 3~4倍 。 多數(shù)動物在注射藥物 9~11次后點燃 ， 表現(xiàn)為注射藥物后動物出現(xiàn)全身陣攣 強直性發(fā)作 ，以陣攣發(fā)作為主 。 ? （ 1） 癲癇行為：急性癲癇模型于注射藥物后1h左右 ， 動物即出現(xiàn)流涎 、 胡須抖動 、 動作不協(xié)調以及發(fā)生全身抽搐 。 每 一次 ， 直至達到點燃標準 。 ? 2． 實驗方法 ? （ 1） 急性癲癇模型：將大鼠麻醉后固定于腦立體定位儀上 ， 根據(jù)鼠腦立體定位圖譜確定側腦室的位置 ， 將微量注射器垂直進針直至側腦室 ， 緩慢注射馬桑內酯 2ul， 留針5min后撤出 ， 小心處理針孔 ， 將大鼠放回籠養(yǎng) 、 觀察 。 ? 1． 動物和試劑 成年健康雄性 SD或Wistar大鼠 ， 體重 150g。 ? 三 、 藥物誘發(fā)癲癇模型 ? 馬桑內酯可誘發(fā)癲癇模型 ， 根據(jù)出現(xiàn)癥狀的遲緩可分為急性癲癇模型和慢性癲癇模型 。 ? 2． 結果評價 1978年 Racine將其分為五級： Ⅰ級：面部陣攣 ， Ⅱ 級： Ⅰ 級加節(jié)律性點頭 ， Ⅲ 級：Ⅱ 級加前肢陣攣 ， Ⅳ 級： Ⅲ 級加后肢站立 ， Ⅴ 級為 Ⅳ 級加跌倒 。麻醉后固定于立體定位儀上，根據(jù)大鼠海馬 CA1區(qū)坐標，冠狀縫后 ， 中中線旁 ， 雙側顱骨鉆孔，用立體定位儀將尖端剝露的直徑 漆包線所制的電極制露雙側海馬 CA1區(qū)，并用牙科水泥妥善固定，也可選擇雙側杏仁核團?，F(xiàn)以大鼠為例進行介紹 。 ? 二 、 部分復雜性癲癇模型 ? 目前認為 ， 研究腦興奮性 、 可塑性及長時程增強最實用的模型為點燃效應 （ kindling effect） 模型 。 ? 2．結果評價 急性期 EEG癇樣放電率為 75%，電泳后 ，逐漸加劇，電泳后 1h癇波波及對側，約在 ， 2h左右癇波趨于停止。 該法制作的模型相當于急性或慢性部分簡單性發(fā)作 ， 與外傷性癲癇的發(fā)病及病理改變類似 ， 之后人們將此法不斷改進 。由于癲癇的遺傳及后天因素十分復雜，遠非任何一種動物模型所能代表，故在評價實驗結果時，務必謹慎。由于實驗技術方法及倫理學等因素的限制，迄今研究人類癲癇的發(fā)病機理仍主要依靠動物實驗。 第九節(jié) 癲癇模型 ? 癲癇（ eplepsy） 是指能反復引起意識變化和痙攣發(fā)作的綜合癥，由中樞神經(jīng)系統(tǒng)突發(fā)性過度放電所致。損毀多巴胺能神經(jīng)纖維后所引起的行為改變具有特征性，而且容易進行定量測定。黑質 紋狀體神經(jīng)元中最主要的神經(jīng)遞質是多巴胺，其含量及代謝產物濃度在活體動物中也易于測出，其特異的多巴胺能神經(jīng)元也可采用組織熒光方法進行檢查。 每兩周測一次 ， 連續(xù)測試 3~5次 ， 每次測試 60min，篩選轉速 300r/h的大鼠作為標準模型 （ PD大鼠 ） 用于實驗 。 ? 三 、 評價指標 ? 動物自術后兩周開始 ， 在特制的四道自動旋轉儀中測試由 APO（ ，.） 誘發(fā)的旋轉行為 。 清理腦膜后 ， 參照 Earl法在三維推動器的 引導下行 MFB 兩點注 射 6 OH DA（ ） ， 坐標如下： （ 1） TB： ，AP： ， ML： ， V： ； （ 2）TB： +， AP： ， ML： ， V： 。 ? 將大鼠頭部固定在立體定位儀上 。而且 6OH DA不易透過血腦屏障，在注入動物腦室或腦實質后，能永久或半永久產生作用。 ? 以后 ， Ungerstedt詳細研究了大鼠中黑質 紋狀體多巴胺通路的位置后 ， 用更特異損傷多巴胺（ DA） 神經(jīng)元的神經(jīng)毒素 6羥基多巴胺 （ 6OH DA） ， 定位損傷此通路而建立 PD模型 ， 將 6OH DA注入鼠的一側黑質 ， 使黑質細胞變性 、 消失 ，損毀黑質到紋狀體的多巴胺投射系統(tǒng) ， 導致腦干腹側背蓋區(qū) A9和 A10區(qū)域內 DA神經(jīng)元喪失 ， 在其投射系統(tǒng)的終端和黑質內 DA濃度減少 ， 使動物自發(fā)性地出現(xiàn)不對稱性感覺運動行為失調 ， 產生強烈的向損傷側的旋轉活動；或注射 DA釋放劑安非他明（ Amphetamine） ， 或 DA受體激活劑阿樸嗎啡（ Apomorphine） 后 ， 誘發(fā)其旋轉 ， 這即稱為經(jīng)典的帕金森氏病動物模型 。將此模型與其他模型相結合，適合于其他治療方法的治療 AD的研究。 ? 5．自然衰老認知障礙模型 自然衰老認知障礙模型是基于不同的個體對衰老的易感性不同，通過行為篩選的方式將衰老并具有明顯認知障礙的個體選出。 ? 4． 化學物質聯(lián)合作用模型 本模型從多個角度 、 采用多種手段 、 多種化學物質聯(lián)合作用 ， 誘導大鼠出現(xiàn)學習記憶障礙和行為改變 ， 腦組織免疫組織化學染色可出現(xiàn) APP/βA4陽性細胞 ， 出現(xiàn)似 AD樣的改變 。 ? 2． OA損害模型 由于 OA對蛋白磷酸酯酶 1A和2A的抑制作用和提高磷酸激酶 C（ PKC） 的活性 ，并能同時復制出 AD的兩種大分子標志物老年斑和神經(jīng)原纖維纏結 ， 該模型具有明顯的優(yōu)勢 ， 主要適用于：研究 AD發(fā)病的比例和機制 ， Aβ和 tau蛋白代謝異常與 AD病理的關系 ， 以及 Aβ和 tau蛋白在 AD病變中的相互作用；從另一角度驗證現(xiàn)有 AD治療方法和藥物的療效 。 ? 9．轉基因動物模型 簡單程序如下：引物設計β淀粉樣蛋白前體（ APP） 或 β淀粉樣蛋白（ Aβ） 區(qū)段的靶基因制備；重組靶基因顯微注射小鼠受精卵；轉基因桑胚胎移植入假孕受體；轉基因鼠的組織檢測。 2~3周后進行行為實驗 ， 動物出現(xiàn)記憶的損害 。 OA 平均投遞速度177。 大鼠出現(xiàn)行為 、腦組織病理似 AD樣的改變 。 用微量注射器取IBA 1μl（ 120nmol/L） 緩慢注入 Meynert 核 ，5~10min后拔出注射針 ， 封閉顱骨 。 ? 5． 鋁誘導模型 給大鼠口服檸檬酸鋁 /氯化鋁導致在相對短的時間內鋁超載 ， 6個月后大鼠出現(xiàn)行為和腦組織的病理改變 ， 似 AD病變 。 注射時間持續(xù) 2min， 留針 5min。l。 ? 3． 免疫毒素 192IgGSAP所致模型 免疫毒素 192IgGSAP能夠選擇性地破壞基底前腦的膽堿能細胞 ， 而留下其他化學屬性的細胞成份 。l（ 120nmol/L） 緩慢注入 Meynert核 （ 2~3min） ，5~10min后拔出注射針 ， 封閉顱骨 。 ? 2． 鵝膏蕈氨酸 （ Ibotenic acid， IBA） 損傷模型 應用腦立體定位儀固定大鼠 ， 腦基底Meynert核定位坐標為前囟后 ， 中線旁開， 顱骨下 。用雙刃刀，將大鼠置于腦立體定位儀上，先置雙刃刀于前囟后， 中線外 1mm的腦表面，接著降刀 ，并向外移動 1mm， 然后再降刀 1mm， 并向外移動， 最后上下抽動刀數(shù)次（ 20次）。任何一個環(huán)節(jié)阻斷和損害這一投射系統(tǒng)都可導致動物認知障礙和學習記憶能力的損害及相應的病理改變。但由于 AD的病理學機制相當復雜，要研究其發(fā)病機制和試驗新的治療方法，首先要建立 AD動物模型，在動物上模擬 AD的病理改變和臨床癥狀。隨著人口老年化趨勢的加重， AD困擾著許多老年人，帶來了嚴重的社會和家庭問題。 第 1次注入全血 ， 第 2次注入OxyHb、 自體動脈血和凝血酶的混合液 ， 成功地制作出狗癥狀性 CVS模型 ， 成功率 %， 其中死亡率為 %， 存活率為 %。 以往的狗 CVS模型制作最常用的方案是枕大池 “ 二次 ” 注血法 ， 但這只能建立無癥狀性CVS模型 。 ? 鑒于 OxyHb被認為是在 SAH后 CVS發(fā)生中起主要作用 ， 可在第二次枕大池注血時改用OxyHb替代全血注入枕大池 ， 結果模型出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損較重 。血管平均收縮 23%，大部分家兔出現(xiàn)了程度不等的神經(jīng)功能障礙，尤以注血后4~5天為重。通過結扎兔雙側頸總動脈，以降低由于 SAH后 CVS所致基底動脈血流量減少而產生側支循環(huán)的代償作用。 部分恒河猴未出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損。它適合于介入治療 CVS的研究，如血管內球囊擴張治療 CVS的研究。顱外動脈血管痙攣模型操作簡單，動物存活率高。 Oshiro等制作包繞大鼠股動脈的橡膠袋，注入部分凝集的自體血，觀察了急性期及慢性期 CVS變化及藥物治療反應。這種方法建立的 CVS模型感染程度無法控制，但效果較為肯定。 ? （ 五 ） 感染法 ? 根據(jù) CVS是動脈壁炎性反應的結果、動脈周圍凝血塊的存在是始動因素的感染學說和CVS發(fā)生關鍵是在實驗動脈周圍出現(xiàn)持續(xù)凝血塊的理論。 應用新鮮的動脈血滴注于實驗動脈表面 ，持續(xù)觀察 4～ 6h， 則可模仿急性期 CVS的表現(xiàn) ， 應用腦脊液與新鮮動脈血混合 ， 37℃ 孵育 7d，