【正文】 。 4. 可連續(xù)傳代，試驗周期短，條件易于控制。 2. 接種成活率近 100%。 （三）人肝癌原位移植動物模型（ 異種移植 ） 注意事項 （ 3）原位移植瘤潛伏期短，生長快，發(fā)生轉(zhuǎn)移、浸潤和腹水比例高，在研究肝癌形態(tài)學(xué)及轉(zhuǎn)移潛能方面優(yōu)于皮下途徑，尤其是腫瘤的生長部位與人肝癌相似，其微觀環(huán)境對再現(xiàn)腫瘤細(xì)胞原有的特性有明顯的影響。 （三）人肝癌原位移植動物模型（ 異種移植 ） 注意事項 人肝癌原位移植于裸鼠的 不同部位其腫瘤學(xué)特性有明顯差異 。 （五）人肝癌原位移植動物模型（ 異種移植 ） （三）人肝癌原位移植動物模型（ 異種移植 ）模型特點 移植瘤 保留了人體原發(fā)腫瘤的形態(tài)學(xué)特點和功能 ，其細(xì)胞形狀、組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞類型和分化程度均保持一致，具有 分泌甲胎蛋白和癌胚抗原的功能 。 用硫噴妥鈉 30 mg/kg 腹腔注射麻醉，常規(guī)方法暴露肝臟，將切小的組織塊用穿刺針植入肝實質(zhì)內(nèi)，無菌棉簽壓迫止血，無繼續(xù)出血時將肝臟返回腹腔，關(guān)閉腹腔。 （三）人肝癌原位移植動物模型（ 異種移植 ） 造模方法 選取 35周齡，體重 1820 g的裸鼠。 （二）肝癌原位肝移植動物模型 造模機(jī)制 裸鼠 先天性 T淋巴細(xì)胞缺陷，可用于人體腫瘤的體內(nèi)移植。 （ 二）肝癌原位肝移植動物模型 模型特點 飲水給藥比腹腔內(nèi)給藥更為簡便 ， 誘癌時間短 ，誘癌效果確切 ， 成瘤病程較長 ， 有充足的時間觀察 。 術(shù)中要注意止血 。 （一）兔 VX2肝癌模型 造模機(jī)制 通過誘癌劑對正常大鼠誘發(fā)肝癌，且出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移如肝門淋巴結(jié)、肺轉(zhuǎn)移，應(yīng)用肝癌的原位肝移植法，可進(jìn)一步研究移植后復(fù)發(fā)的機(jī)制，為肝癌原位肝移植的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 （一）兔 VX2肝癌模型 造模方法 （ 3） 瘤細(xì)胞懸液經(jīng)肝包膜注入法 模型評價：模型損傷小，易造成彌漫性肝臟腫瘤和 腹腔種植 。拔針后立即用生理鹽水棉球輕壓針眼表面至徹底止血，逐層縫合腹壁傷口。挑開肝包膜，將 l mL VX2腫瘤細(xì)胞懸液用 16號針頭緩慢注人肝實質(zhì)內(nèi)，壓迫止血。 （一）兔 VX2肝癌模型 造模方法 （ 3）瘤細(xì)胞懸液經(jīng)肝包膜注入法 實驗兔術(shù)前 12h內(nèi)禁食不禁飲。術(shù)后預(yù)防感染。 用穿刺針芯穿刺針沿設(shè)定的穿刺角度、方向穿入預(yù)定肝位置。 (3)塞入瘤株碎塊后，應(yīng)以明膠海綿填塞竇口，一來可避免瘤塊溢出造成腹腔種植；二則可使瘤株盡可能種植在肝左葉深部，可使瘤灶靠近較大血管支易于獲得血。 （一）兔 VX2肝癌模型 術(shù)中還應(yīng)注意： (1)瘤株制備時要將壞死組織及纖維組織剔除干凈，以免影響成功率。 二、移植性動物模型 造模方法 （ 1）腫瘤組織塊直接接種法 將兔子全麻后無菌條件下逐層開腹，暴露肝臟，以眼科鑷于肝左中央葉較厚處刺破肝組織并形成口小(3～ 5mm)底大 (5～ 8mm)的“ 燒瓶 ”樣竇道，將 2～ 3塊剪碎的瘤株植入其中，并以明膠海綿碎塊埋塞竇口。另取少量腹水，置于加有肝素的試管內(nèi)，用于細(xì)胞計數(shù)；用生理鹽水將腹水稀釋至適當(dāng)濃度，每只鼠腹腔注射 mL（含 1 106～ 1 107個細(xì)胞 )。 二、移植性動物模型 ? 培養(yǎng)細(xì)胞接種法： 將對數(shù)生長期細(xì)胞用 %胰蛋白酶消化脫壁后，用 PBS以 1000 r/min 離心 10 min，洗滌 2次；用胎盤藍(lán)染色計數(shù)，生理鹽水稀釋，用 1mL注射器注射到接種部位，每點接種 （含1 106～ 1 107個細(xì)胞），每只動物可有多個接種點。 二、移植性動物模型 （ 2）接種操作 ? 接種的基本過程 凍存的瘤株 移入宿主體內(nèi) 獲得瘤塊 （瘤源動物） 制備瘤塊 給動物接種 710d 二、移植性動物模型 A、實體瘤 ? 瘤塊接種法： 腫瘤細(xì)胞皮下接種 ——710d處死荷瘤動物 ——選擇生長良好、無壞死液化的瘤組織 ——23 mm3 + 生理鹽水或其它營養(yǎng)液 ——無菌套管針抽吸 ——接種同種受體動物 右前腋窩皮下 。 瘤株的選擇應(yīng)盡量考慮與臨床擬研究的腫瘤性質(zhì)、部位 相近 。 瘤株在 組織形態(tài) 和 生長特性 方面趨于 穩(wěn)定 ，并能在同系、同種或異種動物體內(nèi)移植并連續(xù)傳代。 動物選擇 大、小鼠、地鼠 腫瘤細(xì)胞選擇 腫瘤細(xì)胞株是指通過選擇法或克隆法從 原代培養(yǎng)物 或 細(xì)胞系中獲得的具有 特殊遺傳、生化性質(zhì)的細(xì)胞群 。 一、誘發(fā)性腫瘤動物模型 二、移植性動物模型 第四章 腫瘤疾病動物模型 移植性腫瘤動物模型的概念 是指將動物或人腫瘤移植到同種或異種動物體內(nèi)連續(xù)傳代而形成的腫瘤。 一、誘發(fā)性腫瘤動物模型 ? 誘發(fā)性 腫瘤動物模型的評價 : 1. 約 80%的人類癌癥是由環(huán)境引起，實驗動物誘發(fā)性腫瘤的病因與人類癌癥的情況相近。 2. 早期應(yīng)預(yù)防動物感染，特別是肺部感染。于實驗 1213個月處死動物，誘發(fā)的結(jié)腸癌主要發(fā)生在腸壁粘膜面，多為腺癌和混合癌。 操作方法和結(jié)果 二甲基芐肼（ DMH）誘發(fā)大鼠結(jié)腸癌：選 6周雄性 Wistar大鼠。 操作方法和結(jié)果 甲基硝基亞硝基胍（ MNNG）誘發(fā)大鼠胃癌：體重 100g作用的雄性 Wistar大鼠，自由飲用 30100μg/mL的 MNNG水溶液，不給予其他飲水，持續(xù) 6個月以上 ，其發(fā)生率在 80%左右，以高分化腺癌為主。 操作方法和結(jié)果 二乙基亞硝胺（ DENA）誘發(fā)小鼠肺癌：小鼠每周注射 1% DENA水溶液 56mg/kg 1次，實驗 161d肺癌發(fā)生率為 81%，其中支氣管鱗癌站 41%。 （ 3） 黃曲霉素誘發(fā) 大鼠肝癌 在大鼠飼料中加入黃曲霉素 ， 含 ， 喂養(yǎng)6個月 ， 誘發(fā)率達(dá) 80％ 。 （ 2） 亞胺基偶氮甲苯 (OAAT)誘發(fā) 小鼠肝癌 用 l％ OAAT溶液涂于動物兩肩胛間皮膚上 ， 隔日 1次 ， 每次 2— 3滴 、 一般涂 100次 。 二乙基亞硝胺（ DEN）、二甲基偶氮苯（ DBA）、亞胺基偶氮甲苯（ OAAT）、黃曲霉素。 一、 誘發(fā)性腫瘤動物模型 ? 誘發(fā)性腫瘤動物模型的 基本方法 ： （ 1） 經(jīng)口給藥 ；（ 2） 注射法 ；（ 3） 涂抹法 ；（ 4） 氣管注入法 ；（ 5） 埋藏法 等。 2. 誘發(fā)性腫瘤（ induced tumor）動物模型： 是使用致癌因素在實驗條件下誘發(fā)動物發(fā)生腫瘤的動物模型。 作業(yè)：制作一個自己感興趣的循環(huán)系統(tǒng)疾病的動物模型。 第三章 循環(huán)系統(tǒng)疾病動物模型 小結(jié) : （ 1）心肌梗死動物模型；（ 2）高血脂動物模型 （ 3）高血壓動物模型；（ 4）動脈硬化動物模型； （ 5）心力衰竭動物模型；（ 6）心律失常動物模型 （ 7）休克動物模型。 最易致敏、最常用的動物為豚鼠 。參考劑量：大鼠 1025 mg/kg，兔、貓 5 mg/kg，犬 25 mg/kg。 方法：將內(nèi)毒素按一定濃度緩慢靜脈注射。 可用于觀察急性心肌梗死的病程轉(zhuǎn)化和治療措施的的效果。 可用于休克的教學(xué)實驗，也可應(yīng)用于抗休克藥物的篩選實驗。 犬，總血量為體重的 8%。 可分為：心源性休克、感染性休克、低血容量性休克、過敏性休克、神經(jīng)源性休克等。 六、心率失常動物模型 評價：模型損傷小，動物交易耐受，成功率高。 方法： 15kg左右的犬，呼吸麻醉機(jī)麻醉，仰臥固定，安裝心電圖裝置。模型較穩(wěn)定，重復(fù)性好，可用于藥物篩選。常規(guī)打開胸腔，暴露心臟，用少量 40%甲醛 前腔靜脈根部 與 右心房交界處 ， 1 min即出現(xiàn)心電圖改變，可持續(xù) 5h。 六、心率失常動物模型 造模方法： 竇性心律不齊 模型 機(jī)制：竇房結(jié)部位淺表，當(dāng)其表面接觸甲醛后，對組織造成損害，都竇房結(jié)功能起到抑制作用。 機(jī)制：烏頭堿能加速心肌細(xì)胞鈉離子內(nèi)流，促進(jìn)細(xì)胞膜除極，誘發(fā)心在 異位節(jié)律 ，導(dǎo)致心律失常。 六、心率失常動物模型 分類： 過速型；緩慢型；傳導(dǎo)型等 六、心率失常動物模型 六、心率失常動物模型 心臟的傳導(dǎo) ? P wave Atrial Depolarisation ? QRS ? PR interval ? ST segment ? T wave PR Interval Q R S ST Segment P T 六、心率失常動物模型 造模方法： （ 1）藥物誘發(fā)（ 烏頭堿、毒毛花苷 G、氯仿、強(qiáng)心苷、氯化鋇等 ）； （ 2）電刺激誘發(fā)； （ 3）結(jié)扎冠狀動脈 六、心率失常動物模型 造模方法： 體重 200g大鼠，用 3%戊巴比妥鈉（ 30mg/kg）腹腔注射麻醉，仰臥，安裝心電導(dǎo)聯(lián)，記錄正常心電圖。 原因： 生理性 ：竇房結(jié)性心律失常和期前收縮，一般無明顯的血流動力學(xué)改變。 五、心力衰竭動物模型 左心室 (LV) 右心室 (RV) 左心房（ LA） 右心房（ RA） Pulmonary artery/vein Pulmonary circulation Systemic circulation 五、心力衰竭動物模型 左心室 (LV) 右心室 (RV) 左心房（ LA） 右心房（ RA） Pulmonary artery/vein Pulmonary circulation Systemic circulation 五、心力衰竭動物模型 ? 造模方法 : (1)手術(shù)方法造成主動脈狹窄； (2)手術(shù)方法造成肺動脈狹窄； (3)手術(shù)方法造成房間隔缺損 、主動脈與前腔靜脈相通等 五、心力衰竭動物模型 27 gauge Before After mm 產(chǎn)生心臟負(fù)荷增加 ? 評價 : 手術(shù)方法在 3周左右即能形成穩(wěn)定的心衰 ， 與臨床心衰十分相似 ， 便于研究藥物干預(yù)的病理模型 。 四、動脈硬化動物模型 動脈硬化動物模型 誘食（小型豬、猴、兔、雞、大鼠） 非飼喂法（免疫法、兒茶酚胺法、半胱氨酸法） 四、動脈硬化動物模