【正文】 膽石病模型 2022/6/23 任立群 198 用一定量大腸桿菌注入膽總管引起感染時 ， 大腸桿菌產(chǎn)生 β葡萄糖醛酸酶 ， 可使水溶性膽紅素水解為游離膽紅素 ， 后者與鈣結(jié)合形成不溶性膽紅素鈣 ， 在粘液物質(zhì)的凝聚下形成膽色素結(jié)。 一、食餌性膽色素結(jié)石模型 膽石病模型 注意事項 2022/6/23 任立群 197 二、感染性膽色素結(jié)石模型 感染性膽色素結(jié)石的發(fā)病與膽道感染及膽汁瘀積有明顯關(guān)系。 ? 用體重 350~450 g雄性豚鼠，用含 50%淀粉、 15%葡萄糖、35%標準飼料喂養(yǎng) 20 d，造模成功率達 94%。 膽石呈褐黃色或淡黃色 ， 膽汁混濁且色深 。 膽石病模型 發(fā)病機制 2022/6/23 任立群 195 豚鼠每日喂飼含 2%酪蛋白 、 2%豬油 、 2%纖維素 、3%蔗糖 、 %膽酸及 %膽固醇飼料 。 膽石病模型 2022/6/23 任立群 194 一、食餌性膽色素結(jié)石模型 膽色素結(jié)石易發(fā)生于高碳水化合物膳食的人群 ， 與正常人相比患者膽汁的磷脂明顯增高 。大小數(shù)目不等。常為單個，體積較大，歐美多見。 模型評價與注意事項 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 183 急性胰腺炎模型 (一 ) ?；悄懰徕c膽胰管逆行注射法 （三）大劑量 L精氨酸分次腹腔注射法 （二）牛磺膽酸鈉胰腺被膜下均勻注射法 （四） 超大劑量雨蛙素大鼠、小鼠模型 （五） 乙硫氨酸飲食法 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 184 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 187 第十節(jié) 膽石病動物模型 2022/6/23 任立群 188 復(fù)習(xí) : 概念 結(jié)石 膽結(jié)石 膽管結(jié)石 膽囊結(jié)石 2022/6/23 任立群 189 膽紅素 + 葡萄糖醛酸 正常情況下 酯類 (非游離狀態(tài) ) 分解 游離膽紅素 鈣 + 析出形成結(jié)石 異常情況下 (在膽道系統(tǒng) ) 發(fā)病機制 細菌含有葡萄糖醛酸酶 2022/6/23 任立群 190 色素性膽石 膽固醇性結(jié)石 2022/6/23 任立群 191 混合性膽石 2022/6/23 任立群 192 復(fù)習(xí) : 概念 結(jié)石 基本類型 ： 色素性膽石 呈泥沙樣及砂粒狀；成分以膽紅素為 主，含少量膽固醇。當單次注射劑量大于 400mg/100g體重時，動物多在數(shù)小時內(nèi)死亡，而劑量小于 400mg/100g體重時，胰腺病變不明顯。 ? 腹腔注射后，胰腺病變逐漸加重，其特點是胰腺組織的壞死十分明顯，而出血少見。 ? 光鏡檢查 ：注射后 12h，胰腺輕度充血水腫， 24h明顯充血， 48h胰腺實質(zhì)大片凝固性壞死，間質(zhì)炎細胞浸潤，72h 胰腺組織模糊。 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 181 ? 血尿淀粉酶、血清脂肪酶、淀粉同工酶等 ? 形態(tài)學(xué) ? 生化 ：注射后 12h，血清淀粉酶、脂肪酶明顯升高， 24h升高最明顯， 48h開始下降， 72h接近正常。 模型評價 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 178 急性胰腺炎模型 (一 ) ?；悄懰徕c膽胰管逆行注射法 （二）牛磺膽酸鈉胰腺被膜下均勻注射法 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 179 急性胰腺炎模型 (一 ) ?；悄懰徕c膽胰管逆行注射法 （三）大劑量 L精氨酸分次腹腔注射法 （二）?；悄懰徕c胰腺被膜下均勻注射法 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 180 造模原理 ? 大劑量 L精氨酸能減少多胺的合成，抑制核酸和蛋白質(zhì)的合成，而胰腺細胞的蛋白質(zhì)合成最為活躍，故極易受損。 ? 胰腺病變程度及動物死亡率與所用牛磺膽酸鈉的濃度呈正相關(guān)，隨著所用?；悄懰徕c濃度的提高，胰腺損害逐漸加重。 結(jié) 果 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 177 ? 本模型在病因、發(fā)病機制及胰腺病變等方面與人類急性胰腺炎相似，是目前被公認的、比較常用的復(fù)制急性胰腺炎的方法。胃腸道明顯水腫，腎臟明顯增大，顏色晦暗。 操作方法 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 176 1. 術(shù)后 15 h血清淀粉酶水平明顯升高。取胰腺等組織， 10%中性緩沖甲醛液固定，常規(guī)制備石蠟切片，在光鏡下觀察胰腺等臟器的改變。 。 1min。 3. 用 4號鈍針頭朝胰腺方向穿刺十二指腸前壁，在其漿膜下潛行通過十二指腸乳頭穿入膽胰管，用手指固定針頭，緩慢（約 2min）注入 %或 5%?；悄懰徕c溶液 1ml/kg體重。 生理解剖特點 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 174 1. 大鼠實驗前禁食不禁水 12h， 3%戊巴比妥鈉（ 40mg/kg）腹腔注射麻醉。但當膽總管阻塞時，膽道內(nèi)的膽汁可被壓入主胰管，引起急性胰腺炎。 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 171 急性胰腺炎模型 (一 )牛磺膽酸鈉膽胰管逆行注射法 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 172 ? 早期?；悄懰徕c可直接導(dǎo)致胰腺腺泡細胞或小導(dǎo)管壁的細胞溶解，進一步的損害可能是膽鹽激活胰酶，如胰蛋白酶、磷脂酶等，產(chǎn)生腺泡自身消化。 膽汁和腸液 中的腸激酶 激活 發(fā)病機制 胰蛋白酶原 胰蛋白酶 2022/6/23 任立群 170 急性胰腺炎模型 急性胰腺炎的主要表現(xiàn)為胰腺呈炎 癥水腫、出血和壞死。 模型評價 動物死亡率較高。 實驗動物 操作步驟 苯巴比妥加速 CCl4模型 2022/6/23 任立群 162 給予 CCl4后 8~10周形成小結(jié)節(jié)型肝硬化，死亡率在 40%左右； 16~20周可復(fù)制肝硬化腹水模型，腹水成功率高達 % ，但動物死亡率較高，有時達 %。 檢測指標 CCl4復(fù)合因素 模型 2022/6/23 任立群 159 三、苯巴比妥加速形成肝纖維化 2022/6/23 任立群 161 體重 100~150g Wistar大鼠。 2．如果動物體重較前一次下降 30%以上，可停止注 射 CCl4 1次，以減少動物死亡率。 結(jié) 果 CCl4復(fù)合因素 模型 2022/6/23 任立群 156 1． CCl4加高膽固醇和酒精飲食所致大鼠肝纖維化， 是目前國內(nèi)外常采用的動物模型。 ? 第 4周為纖維增生改變，除肝細胞變性壞死外，肝內(nèi)開 始有纖維間隔形成。 ? 第 2周時肝細胞變性、壞死，表現(xiàn)為小葉中心出現(xiàn)小片 狀肝細胞氣球樣變、脂肪變性、壞死和間質(zhì)輕微炎癥反應(yīng)， 鏡下 未見明顯纖維增生。 復(fù)合因素造成大量肝細胞壞死，肝網(wǎng)狀支架塌陷，纖維組織增生，最后發(fā)展為肝硬化。 高脂 高脂食物有利于形成肝細胞脂肪變性，脂肪變性的肝細胞對 CCl4損傷作用敏感。 CCl4復(fù)合因素 模型 2022/6/23 任立群 154 玉米面 蛋白質(zhì) 含量只 能滿足 大 鼠正常蛋白質(zhì)需要量的一半，且缺乏色氨酸和蛋氨酸，這些氨基酸均屬于趨脂物質(zhì)，它們的缺乏會導(dǎo)致肝脂肪變，以致纖維化。 高脂 高脂食物有利于形成肝細胞脂肪變性，脂肪變性的肝細胞對 CCl4損傷作用敏感。 造模機制 CCl4復(fù)合因素 模型 2022/6/23 任立群 153 玉米面 蛋白質(zhì) 含量只 能滿足 大 鼠正常蛋白質(zhì)需要量的一半，且缺乏色氨酸和蛋氨酸，這些氨基酸均屬于趨脂物質(zhì)，它們的缺乏會導(dǎo)致肝脂肪變，以致纖維化。 ? 實驗中大鼠成活率在 60%左右。 ? 第 6周 ： 肝臟纖維間隔進一步增厚，有假小葉形成。 模型評價 CCl4肝纖維化肝硬化 模型 2022/6/23 任立群 150 ? 第 2周 ： 肝小葉中央?yún)^(qū)出現(xiàn)片狀肝細胞變性壞死，未見明顯纖維組織增生。 2．制備肝臟組織石蠟切片， HE和膠原纖維染色，進行病理學(xué)檢查。 造模機制 CCl4肝纖維化肝硬化 模型 2022/6/23 任立群 148 1． 皮下注射 40%~50% CCl4植物油溶液，首次 5 ml/kg體重，以后 2 ml/kg體重，每周 2次，共 10周。 肝纖維化的形成，主要是由于肝星狀細胞激活，ECM成分生成過多，降解相對不足，膠原等 ECM在肝內(nèi)大量沉積所致。 2．采用頸背部皮下注射 CCl4，個別動物可出現(xiàn) 局部炎癥和硬結(jié)，因此應(yīng)每日更換注射部位。陽性對照藥可用聯(lián)苯雙酯 g/kg體重。取出大鼠肝臟，稱重，計算肝臟系數(shù)（ g/100 g），并對肝臟進行組織病理學(xué)檢查。 造模機制 CCl4慢性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 139 ? 每周皮下注射遞增濃度的 CCl4（劑量為 ml/kg） 1次，濃度由低向高逐漸增加，依次為 5%、 10%、 20%和 30%，每 2~3周遞增一個濃度，連續(xù) 3個月。 ? 病變具有肝臟特異性， Con A靜脈注射后 8 h，組織病理學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)肺、腎、脾、心等肝外器官損傷。 ? Con A致肝損害具有劑量依賴性，選用劑量 ~30 mg/kg體重時，肝損害程度隨藥物劑量加大而加重。 結(jié) 果 Con A急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 136 ? 本模型是由淋巴細胞介導(dǎo)的肝損害模型，很好地模擬了人類病毒性肝炎、自身免疫性肝病等疾病，是研究這些肝病發(fā)病機制和治療藥物的較理想模型。 ? 光鏡下可見肝內(nèi)大量 T淋巴細胞浸潤，在門管區(qū)尤為明顯，部分門管區(qū)淋巴細胞浸潤呈“套袖”樣改變，肝竇內(nèi)紅細胞淤積。 造模機制 Con A急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 135 ? 小鼠尾靜脈注射 Con A(10或 29mg/kg體重， ) 3 h后，即見血漿 ALT、 AST開始升高， 8 h后升高明顯，升高的趨勢和速度與 Con A劑量呈正相關(guān)。如TNFα 、 IL IFNγ 等與早期肝細胞損害關(guān)系密切。 ? Con A進入小鼠體內(nèi)后可引起與人類自身免疫性肝炎相似的肝損害。 ? 長時間喂飼小劑量硫代乙酰胺可造成慢性肝損傷模型，也可在食物和飲水中加入一定量硫代乙酰胺， 2周后出現(xiàn)肝細胞變性，甚至出現(xiàn)肝硬化或肝癌。 硫代乙酰胺急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 132 ? 該模型可作為抗肝損傷藥物的常規(guī)篩選模型，但不如 CCl4和 D半乳糖胺模型普遍。 操作方法 成年雄性 Wistar大鼠或小鼠 硫代乙酰胺急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 131 ? 小鼠腹腔注射 16 h 后， 血清 ALT、 AST活性顯著升高，肝細胞中細胞色素 P450和糖原含量明顯降低。 ? 取一塊肝組織測定細胞色素 P450和糖原含量。 造模機制 硫代乙酰胺急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 130 ? 硫代乙酰胺，劑量一般按 50~200 mg/kg體重，腹腔注射。因此， D半乳糖胺肝損傷模型是目前公認的研究病毒性肝炎發(fā)病機制和藥物治療效果的較好模型。CCl4損傷主要表現(xiàn)在肝小葉中央靜脈周圍區(qū)大量肝細胞壞死和出血，脂肪變性十分明顯；而 D半乳糖胺引起的損傷則呈彌漫性、多發(fā)性片狀壞死，脂肪變性不如 CCl4明顯，細胞內(nèi)有大量 PAS染色陽性顆粒，嗜酸性小體較多見，與人類病毒性肝炎的肝損傷類似。 造模機制 D半乳糖胺急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 125 一次性腹腔注射 ? 500~850 mg/kg體重 200~400 mg/kg體重 操作方法 170~250gWisar大鼠 D半乳糖胺急性肝損傷 模型 2~24 h出現(xiàn)不同程度的肝損傷 ? 劑量超過 1000 mg/kg體重 常造成廣泛性肝壞死或動物中毒死亡 2022/6/23 任立群 126 ? 一般于注射 D半乳糖胺后 24~36 h血清 ALT、AST活性升高，血清膽紅素總量增加，血清總蛋白和清蛋白含量明顯降低，鏡檢可見肝細胞變性、壞死，組織化學(xué)顯示肝細胞糖原和 RNA減少，脂肪堆積。 模型評價與注意事項 CCl4急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 123 二、 D半乳糖胺急性肝損傷模型 2022/6/23 任立群 124 ? D半乳糖胺是肝細胞磷酸尿嘧啶核苷的干擾劑，進入體內(nèi)后與磷酸尿苷結(jié)合，形成磷酸尿苷 半乳糖胺復(fù)合物，致使磷酸尿苷耗竭，