生物制品的制備ppt課件-wenkub.com
2025-05-09 12:35 本頁面
【正文】 工作代工程菌種用于生產(chǎn)。 主代工程菌種： 自原始工程菌種經(jīng)傳代擴種獲得，又稱 主代種子批 。一般是指在構(gòu)建了工程菌后，進行大規(guī)模的工程菌培養(yǎng)（發(fā)酵）、分離純化、制劑及質(zhì)量控制（檢定）等一系列工藝技術(shù)。 真核表達系統(tǒng)： 酵母 、 昆蟲細胞、哺乳類細胞、轉(zhuǎn) 基因動物、轉(zhuǎn)基因植物等 。在 Apr基因中有一個 PstⅠ 切點， Tcr基因中有一個 BamHⅠ 和一個SalⅠ 切點。是一類雙鏈、閉環(huán)的 DNA分子，分子量約 1200kb。此法一般只能合成較短的多肽激素基因。 破碎細胞 → 分離染色體 → 限制性內(nèi)切酶作用 → 目的基因 限制性內(nèi)切酶切取目的基因 用來分離真核基因的方法。通過這種方法生產(chǎn)的新型生物制品稱為 基因工程生物制品 。 ?牛紅細胞 SOD為 CuZnSOD，由兩個亞基組成，每個亞基含 1個 Cu和 1個 Zn。 一、動物來源生物制品制備的實例 胰島素的制備 （ production of insulin） （ 1）胰島素的性質(zhì)： pI=，由 A鏈、 B鏈通過兩個二硫鍵連接； A鏈含 21個氨基酸， B鏈含 30個氨基酸；是所有蛋白質(zhì)中研究得最多，也是研究得最清楚的蛋白。 孕婦尿 [粗制 ]尿：苯甲酸：乙醇 /1： ： 5） 用 HCl調(diào) pH 45 HCG(粗品） 提取 NaAC 提取液 透析 水， 5℃ 以下 透析內(nèi)液 吸附（ CM SepharoseCI6B） 羧甲基瓊脂糖凝膠 吸附后交換劑 洗滌 Ⅰ ， Ⅱ 峰 NaAC, 洗滌后交換劑 洗脫 NaAC, 洗脫液 冷凍干燥 — 30℃ HCG精品 溶解 蒸餾水， 10℃ 以下 HCG溶液 透析 , 5℃ 以下 透析內(nèi)液 吸附 羥基磷灰石， 吸附物 解吸 ,（ PBS), 解吸液 干燥 — 30℃ HCG純品 三、絨膜促性激素 （ HCG,懷孕 45－ 70天含量高） 的制備 治療女性不育癥，神經(jīng)性皮炎 ,子宮出血和習慣性流產(chǎn) 四、人體來源藥物的研究前景 （ prospect） 人體來源的原料雖只限于血液、胎盤、尿液、毛發(fā)等有限幾種，但利用前景很廣闊 。 ?白蛋白為單鏈分子，由 584個氨基酸殘基組成， N端為天門冬氨酸， C端為亮氨酸，分子量為 104，在離子強度為 ，pI為 ，易溶于水，在 60%硫酸銨飽和度以上沉淀。用適當?shù)目鼓齽┏テ渲械挠行纬煞郑ㄈ缂t血球）而得到淡黃色、半透明的液體叫 血漿 。 苯丙氨酸 、 酪氨酸 、 色氨酸的分離就是利用活性炭對其吸附的原理 。 （ 2）氨基酸的分離方法（ isolation of Aa） 有 沉淀法（ percipitation）、吸附法（ adsorption）和離子交換法（ ionexchange ) 。 ② 堿水解法 易產(chǎn)生消旋作用，較少應用 。根據(jù)它們在一定 pH條件下的解離情況 ， 選擇適當?shù)?離子交換劑 可 將它們提純 。 ?吸附層析法 (adsorption chromatography)：常用吸附劑有硅膠、氧化鋁等。 非極性脂是與其他脂質(zhì)分子或蛋白質(zhì)分子的疏水區(qū)相結(jié)合的 。 粘多糖的聚陰離子能與某些陽離子表面活性劑結(jié)合成不溶于水的鹽 ， 如十六烷基三甲基銨 （ CTA） 等 。 （ 2） 分離方法 （ isolation） 常用的分離方法是沉淀法和離子交換層析法 。 （ 1）提取方法 （ extraction） 非降解法 適用于從含一種粘多糖的動物組織中提取粘多糖 ， 提取采用的溶劑是水或鹽溶液 。 提取法 生產(chǎn) DNA和 RNA，先提取核酸和蛋白質(zhì)復合物，再解離核酸與蛋白質(zhì)，然后分離 RNA與 DNA。用上樣Buffer沖洗柱體，雜質(zhì)被沖洗下來。 ?6）常用的親和層析載體 （ Vectors of Affinity Chromatography） ?纖維素（ cellulose） ?葡聚糖凝膠（ Sephadex） ?瓊脂糖凝膠（ Sepharose） ?聚丙烯酰胺凝膠（ Biogel） ?多孔玻璃珠（ BioGlass） ?其它新型載體（ Other gels） ?7） 親和層析配基的選擇 （ Selection of ligand） ?。 ?5）親和層析載體的性質(zhì)與選擇 ?親和層析載體的選擇 （ selection of vectors） ?多孔的立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，能使被親和吸附的大分子自由通過。 ?酶與其底物。 ?③ 然后改變流動相成份，將結(jié)合的親和物洗脫下來。 ?2）親和層析有如下特點（ Characteristics of Affinity Chromatography） ? 純化 過程簡單 、迅速； ? 分離 效率 高； ? 產(chǎn)物 純度 高； ? 必須針對某一分離對象制備專一的配基及尋求穩(wěn)定的層析條件。 ?親和層析 分離專一性強，操作簡便，是當前應用很廣泛的分離方法之一。 例如某蛋白質(zhì)等電點為 ， 當溶液 pH為 ， 分子則帶有正電荷 。凝膠顆粒具有多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，小分子易進入凝膠網(wǎng)孔，流程長而移動速度慢，而大分子物質(zhì)不能進入凝膠網(wǎng)孔，沿凝膠顆粒間隙流動，流程短移動快。 蛋白質(zhì) 中性鹽 中和電荷 水化層減弱 溶解度下降，沉淀 鹽析法原理 等電點沉淀法 在等電點時，蛋白質(zhì)分子以兩性離子形式存
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