【正文】 ? 菌絲體液體保藏法 將保藏的菌種在無(wú)菌條件下，取菌塊放入馬鈴薯培養(yǎng)液中，在常溫下靜置培養(yǎng)，其成活率達(dá) 33個(gè)月為 ％， 42個(gè)月為％。 ? （ 2）、孢子收集 將滅過(guò)菌的濾紙片培養(yǎng)皿移入接種箱孢子采集罩內(nèi)，接受孢子。 ? 第四、將接種后的沙土管置于盛有干燥劑（生石灰、氯化鈣或硅膠）的容器內(nèi)，接上 8小時(shí)，使沙土基本干燥。如采用干熱滅菌在165℃ 下保持 2～ 3小時(shí)， 1次即可。具體方法如下： ? 第一、取河沙過(guò)篩（ 60～ 80目篩子），除去大沙粒，用10％的鹽酸浸泡以除去有機(jī)質(zhì)。此法適用香菇、黑木耳、黃背木耳菌絲保藏。此法保藏菌絲，經(jīng) 1～ 2年后，再接到培養(yǎng)基上，菌絲生長(zhǎng)仍然良好。 ? 活化培養(yǎng) 在啟用液氮超低溫保藏菌種時(shí)，應(yīng)先將安瓿管置于 35℃ ～ 40℃ 的溫水中，使管中的冰塊迅速溶解，然后再開(kāi)啟安瓿管，取懸浮的菌絲塊移植于適宜的培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)。由于超低溫能使代謝水平降到最低限度，用此法保藏的菌種基本上不發(fā)生變異。 ? 保藏和啟用 置 4℃ ～ 6℃ 冰箱內(nèi)或常溫下遮光保藏。也可將安瓿管置 1:1的干冰和 95％的乙醇組成的凍結(jié)劑內(nèi)，預(yù)凍 3～ 4分鐘。 ? 冷凍管準(zhǔn)備 選用中性玻璃吹制的 10毫米 100毫米，底端突出球狀的安瓿管，用 /升鹽酸浸泡 8～ 10小時(shí)，沖洗至中性，烘干，在管壁貼上標(biāo)簽，標(biāo)明菌名、日期等，加棉塞，干熱滅菌。然后將棉塞齊口剪平，再用蠟密封管口。用此法保藏，不需要太多的設(shè)備，操作簡(jiǎn)便，只需在菌苔上灌注一層無(wú)菌的液體石蠟，即可使菌種與外界空氣隔絕，達(dá)到防止培養(yǎng)基水分散失，抑制菌種新陳代謝，延長(zhǎng)保存時(shí)間的目的。 ? 加酸度中和劑 為防止菌種在保藏過(guò)程中產(chǎn)生的酸積累過(guò)多在配制保藏培養(yǎng)基時(shí)還需加入 ％～ ％的磷酸二氫鉀或碳酸鈣等緩沖劑，以中和菌種在保藏過(guò)程中產(chǎn)生的有機(jī)酸。草菇是高溫性菌種，在 5℃ 以下菌絲體容易死亡，需要提高到 10℃ ～ 13℃ 保藏。 ? 菌種保藏的基本原理是采用干燥、低溫、冷凍、減少氧氣供給等方法，以終止其繁殖，降低代謝速度，使菌絲處于休眠假死狀態(tài)，并保證原種的純度。 ? 菌種老化退化原因 （ 1）多次移接； （ 2）水質(zhì)的影響； （ 3）溫度； （ 4）長(zhǎng)期處于逆境； （ 5）自然變異； （ 6）感染病毒。菌絲雖為白色，但不呈絨毛狀，無(wú)彈性，捏碎成小塊或粉狀，培養(yǎng)基呈黃褐色或暗褐色，為菌齡過(guò)小的菌種，要繼續(xù)培養(yǎng)；瓶底有黃白色或褐色液體，為老化菌種，不宜使用。 ? （ 2）、原種、栽培種 菌絲潔白粗壯，長(zhǎng)勢(shì)旺盛，全瓶均勻一致；培養(yǎng)后期（ 40天左右）瓶壁自上而下可見(jiàn)少量菊花或梅花狀的膠質(zhì)原基，顏色是黃褐至黑褐色。 ? 香菇 ? （ 1）母種 菌絲潔白、粗壯，呈絨毛狀，平鋪生長(zhǎng)。 ? 出菇試驗(yàn) 對(duì)分離或引進(jìn)菌種，在用于生產(chǎn)前必須做出菇試驗(yàn)，根據(jù)條件采用瓶栽、壓塊栽培出菇，觀察出菇能力，做好生物學(xué)記錄，通過(guò)產(chǎn)量和質(zhì)量分析，才能推廣應(yīng)用于生產(chǎn)。再打開(kāi)瓶塞，從菌種瓶中部取出小塊菌絲體，觀看顏色，聞其氣味，手捏料塊檢查其含水量，看是否符合上述標(biāo)準(zhǔn)要求。接到新的培養(yǎng)基上吃料快、長(zhǎng)勢(shì)好、不萎蔫、不衰老、不死亡。 ? 正：菌絲色澤要純正，多數(shù)種類(lèi)的菌絲應(yīng)潔白、有光澤。 第五章 菌種質(zhì)量鑒定 ? 優(yōu)良菌種是食用菌栽培達(dá)到優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的前提，因此在生產(chǎn)中，必須把好菌種質(zhì)量關(guān)。 ? （ 2）、用無(wú)菌水反復(fù)沖洗菌絲束，然后用無(wú)菌棉花吸干水分。主要用于土中菇類(lèi)。 三、基內(nèi)菌絲分離法 ? 在進(jìn)行食用菌資源調(diào)查中，常會(huì)遇到某些希望得到的子實(shí)體，但卻已經(jīng)腐爛了，或有些子實(shí)體個(gè)體小而薄，或采用組織分離和孢子分離均困難，就可以采用基內(nèi)菌絲分離法。分離時(shí)先把菌核表面洗凈，吸干帶入無(wú)菌箱內(nèi)，以 75％乙醇進(jìn)行表面消毒后，用無(wú)菌解剖刀把菌核切開(kāi)，取中間組織一小塊（黃豆大小），移入 PDA斜面上，于 25℃下培養(yǎng)。分離時(shí)無(wú)菌操作剖取尚未展開(kāi)的耳片膠質(zhì)團(tuán)內(nèi)部的組織塊，直接置于 PDA斜面上進(jìn)行培養(yǎng)。 ? 對(duì)一些個(gè)體細(xì)小的傘菌子實(shí)體，如金針菇，可采用子實(shí)層作組織分離材料。只是對(duì)于子實(shí)體小、薄及膠質(zhì)種類(lèi)不太適用。 二、組織分離法 ? 組織分離法是利用子實(shí)體組織來(lái)分離獲得純種的方法。 第四節(jié) 菌種分離 ? 通常采用的菌種分離方法有：孢子分離法、組織分離法和基內(nèi)菌絲分離法三種。 ? （ 6）每次接種的時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免空氣中雜菌的基數(shù)不斷地積累，影響轉(zhuǎn)管、接種效果。 ? （ 2）菌種所暴露或通過(guò)的空間必須是無(wú)菌區(qū)。一般用量為 ％～ ％，對(duì)人畜無(wú)害。一般 1％～ 3％的石灰水溶液就可起到良好的殺菌作用。起殺菌作用的是熟石灰中的氫氧離子，它能水解蛋白質(zhì)和核酸，使微生物體的酶系和結(jié)構(gòu)受到損害，并能分解菌體中的糖類(lèi)。菌種分離時(shí)，常用乙醇作為表面消毒劑。高濃度乙醇?xì)⒕芰Ψ炊陆凳且驗(yàn)楦邼舛纫掖加龅轿⑸锛?xì)胞時(shí)，很快使細(xì)胞表面脫水，形成一層保護(hù)膜，乙醇不能滲透到細(xì)胞內(nèi)，也不能使蛋白質(zhì)凝固，所以高濃度乙醇反而殺菌效果差。常用甲醛來(lái)消毒無(wú)菌室或箱等，每立方米空間用 10～ 15毫升甲醛熏蒸就可達(dá)到消毒的目的。石炭酸殺菌原理：它能使細(xì)胞膜損害，使蛋白質(zhì)變性或沉淀。 二、化學(xué)滅菌 ? 酚類(lèi) ? 常用的石炭酸，又名苯酚。一般紫外線燈為 2537197。其次，應(yīng)注意上升至要求壓力后，要保持一定時(shí)間，然后斷電或撤下熱源 ,待溫度降至零時(shí)再放汽開(kāi)鍋 ,如果不這樣會(huì)造成滅菌不徹底或者容器內(nèi)液體噴出。食用菌生產(chǎn)中往往用這種方法滅菌制備一、二級(jí)菌種用的培養(yǎng)基。如用此法超過(guò) 180℃ ，所滅紙張或棉花就會(huì)焦化，影響滅菌質(zhì)量。這個(gè)方法適用于玻璃器皿、金屬工具等固體器皿的滅菌。就必須在一定范圍內(nèi)徹底殺滅空氣及物料、容器、工具等中的一切微生物。拌料加水后，各種微生物就開(kāi)始活動(dòng)，生長(zhǎng)繁殖，因此，要求從加水拌料到分裝上鍋滅菌，時(shí)間不要超過(guò) 6小時(shí)，常壓滅菌上鍋后火力要猛，爭(zhēng)取在 4～ 6小時(shí)內(nèi)使鍋溫達(dá)到 100℃ ，時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基酸敗。 ? 第二、米糠系指細(xì)米糠，不能用稻殼代替。滅菌時(shí)間根據(jù)滅菌方法和培養(yǎng)基材料的種類(lèi)來(lái)決定，一般高壓滅菌壓力 ， 120分鐘；常壓滅菌在 98℃ ～ 100℃ 保持 6～ 8小時(shí)。 ? 生產(chǎn)栽培種時(shí)，多采用塑料袋作為容器，高壓滅菌用聚丙烯塑料袋，常壓滅菌用聚乙烯塑料袋。稻草、玉米芯、花生殼、谷粒等用前應(yīng)進(jìn)行處理，稻草應(yīng)切成 2～ 3厘米小段浸于水中 1天，使其吸足水分后撈出瀝至不滴水（含水量約 65％）；玉米芯、花生殼先碾碎，然后放于 pH值為 10～ 11的石灰水中浸泡12小時(shí)，撈出用清水沖洗并瀝至不滴水；谷粒先放入水中浸泡，使其吸足水分，浸水時(shí)間因氣溫而定，一般天熱浸16小時(shí)，天冷浸 24小時(shí)，撈出用清水沖洗后，置沸水鍋中煮沸 15～ 20分鐘，至谷粒吸足水分但又不過(guò)分膨脹和開(kāi)口為度，然后用清水冷至常溫，瀝去多余水分，剔除“破肚”。 ? ③ 花生殼 78％，麩皮或米糠 20％，蔗糖 1％，石膏粉 1％，料水比 1:。 ? （ 3）稻草培養(yǎng)基 ? 以稻草為主料，主要適于制作草菇、平菇和鳳尾菇等菌種。 ? ①闊葉樹(shù)木屑 78％，麩皮或米糠 20％，蔗糖 1％，石膏粉1％，料水比 1:～ ； ? ②闊葉樹(shù)木屑 77％，麩皮或米糠 20％，蔗糖 ％，石膏粉 1％，尿素 ％ , 料水比 1:。斜面長(zhǎng)度一般為試管長(zhǎng)度的 1/2。 第四步：加棉塞、滅菌 ? 棉塞要用普通棉花制作，不能用脫脂棉，棉塞的大小、松緊要適度，過(guò)松達(dá)不到濾菌的目的，過(guò)緊妨礙空氣流通，松緊度以手抓棉塞整個(gè)試管能提起為宜。 ? 將稱好的瓊脂剪成小塊，加入配好的液體培養(yǎng)基中，文火煮沸，邊加熱邊攪拌，待瓊脂完全溶化后，用