【正文】 結(jié)果判定： 驗(yàn)證 人： 日期： 復(fù)核人： 日期： 備注：采用以上供試液制備方法，分別對(duì)需氧菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)和控制菌檢查法進(jìn)行方法驗(yàn)證時(shí)，若結(jié)果不能達(dá)到各標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)繼續(xù)采用其他方法（如培養(yǎng)基稀釋法、薄膜過(guò)濾法等）消除供試品的抑菌活性，重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。 結(jié)果： 第三次試驗(yàn)結(jié)果： 供試品批號(hào) 序號(hào) 步 驟 實(shí)驗(yàn)組 陽(yáng)性對(duì)照 組 陰性對(duì)照 組 1 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基， 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時(shí) 2 麥康凱液體培養(yǎng)基， 42～ 44℃ 培養(yǎng) 24～ 48 小時(shí) 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗(yàn)證方案 Page 30 of 31 序號(hào) 步 驟 實(shí)驗(yàn)組 陽(yáng)性對(duì)照 組 陰性對(duì)照 組 3 取 麥康凱液體培養(yǎng) 物劃線接種于 麥康凱瓊脂平板上 ， 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 72 小時(shí) 。 4 分離純化、染色鏡檢、生化試驗(yàn)等 。 取上述培養(yǎng)物 1ml，接種至含 100ml 麥康凱液體 培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)， 42～ 44℃ 培養(yǎng) 24～48 小時(shí)。 試驗(yàn)結(jié)果 供試品批號(hào) 、 、 。 — 取 的供試液 1ml，注入平皿中，分別立即傾注 15～ 20 ml 溫度不超過(guò) 45℃胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 30～ 35℃ 倒置培養(yǎng) 3 天點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 20～ 25℃ 倒置培養(yǎng) 5 天點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。 — 取 小于 100cfu 的銅綠假單胞菌 菌懸液、金黃色葡萄球菌菌懸液、枯草芽孢桿菌菌懸液 、白色念珠菌菌懸液、黑曲霉菌懸液 各 1ml，注入平皿中，立即傾注 胰酪大豆胨瓊脂 培養(yǎng)基約 15～ 20ml，混勻，凝固，于 30～ 35℃ 倒置培養(yǎng) 3 天 點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。 — 取 的供試液 和 小于 10000cfu 的白色念珠菌菌 懸液 混勻后 ， 吸取 1ml 注入平皿中，立即傾注 沙氏葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基 15～ 20ml，混勻，凝固，于 20～ 25℃ 倒置培養(yǎng) 5 天 點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。 — 取 的供試液 和 小于 10000cfu 的白色念珠菌菌 懸液 混勻后 ， 吸取 1ml 注入平皿中，立即傾注 胰酪大豆胨瓊脂 培養(yǎng)基 15～ 20ml，混勻，凝固，于 30～ 35℃ 倒置培養(yǎng) 3 天 點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。 — 取 的供試液 小于 10000cfu的金黃色葡萄球菌菌 懸液 ，吸取 1ml 注入平皿中，立即傾注 胰酪大豆胨瓊脂 培養(yǎng)基 15～ 20ml，混勻，凝固，于 30～ 35℃ 倒置培養(yǎng) 3 天 點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。為確認(rèn)供試品中的微生物能被充分 檢出，首先應(yīng)選擇最低稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行計(jì)數(shù)方法適用性檢查。然后，采 用適宜方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含 %（ ml/ml）聚 山 梨酯 80的 %無(wú)菌氯化鈉溶液或 無(wú)菌氯化鈉 蛋白胨緩沖液 依次稀釋至 ，制成每 1ml 含孢子數(shù)小于 100cfu 的孢子懸液。 、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng) 物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中， 30? 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時(shí)；分別取上述培養(yǎng)物用 %無(wú)菌氯化鈉溶液或 無(wú)菌氯化鈉 蛋白胨緩沖液 ，依次稀釋至 、 、 、 制成每 1ml含菌數(shù)為小于 100cfu 的菌懸液。 1:10 供試品 10ml，加 無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液至 100ml，充分振搖使混勻，作為 1:100 的供試液。 編號(hào) 項(xiàng)目 /功能 RPN （ SOD） 風(fēng)險(xiǎn)等級(jí) 01 控制菌檢驗(yàn)結(jié)果不符合 20 （ 1021） 中 02 實(shí)驗(yàn)組菌種回收率不達(dá)標(biāo) 20 （ 1021） 中 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗(yàn)證方案 Page 21 of 31 五、驗(yàn)證準(zhǔn)備 (2020 年版 ) 四部：（ 1105）非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法； （ 1106）非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法。 7 1 1 7 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗(yàn)證方案 Page 20 of 31 . 阿戈美拉汀片（ 25mg）微生物限度 檢查方法驗(yàn)證的不可接受風(fēng)險(xiǎn)匯總： 注：當(dāng) 1≤RPN＜ 27，但嚴(yán)重性 S發(fā)生可能性 O 為 102 或 92 時(shí)，仍需按中等以上風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行后續(xù)控制。 行清潔和消毒。 7 1 1 7 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗(yàn)證方案 Page 19 of 31 序號(hào) 項(xiàng)目 潛在 的失效模式 潛在 的失效后果 嚴(yán)重性S 潛在 失效造成 原因 發(fā)生可能性O(shè) 現(xiàn)有控制措施 可檢測(cè)性D RPN 責(zé)任及目標(biāo)完成日期 措施結(jié)果 采取措施 S O D RPN 15 潔凈區(qū)環(huán)境（供試品溶液檢查環(huán)境） 、壓差異常。 培養(yǎng)計(jì)數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確，導(dǎo)致驗(yàn)證失敗。 導(dǎo)致樣品被污染或失效。 2 采用薄膜過(guò)濾法或者培養(yǎng)基稀釋法消除產(chǎn)品抑菌性 1 20 方案批準(zhǔn)后15 個(gè)工作日 膜過(guò)濾法或者培養(yǎng)基稀釋法消除產(chǎn)品抑菌性。 10 1 1 10 12 實(shí)驗(yàn)組菌種回收率不達(dá)標(biāo) 各實(shí)驗(yàn)組菌落回收率高于或低于標(biāo)準(zhǔn)范圍。 10 菌存在抑制作用。 1 對(duì)驗(yàn)證方案進(jìn)行審核 1 8 準(zhǔn)后方可開(kāi)展確驗(yàn)證工作。 7 1 1 7 10 驗(yàn)證方法不正確 正確。 8 1 1 8 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗(yàn)證方案 Page 14 of 31 序 項(xiàng)目 潛在 的失效模式 潛在 的失 嚴(yán) 潛在 失效造成 原因 發(fā) 現(xiàn)有控制措施 可 RP 責(zé)任及目標(biāo) 措施結(jié)果 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗(yàn)證方案 Page 15 of 31 號(hào) 效后果 重性S 生可能性O(shè) 檢測(cè)性D N 完成日期 采取措施 S O D RPN 09 培養(yǎng)基、緩沖液、無(wú)菌器具、無(wú)菌衣服 /手套、消毒劑的制備方法 試驗(yàn)人員未按 “ 20102205《質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室消毒劑、無(wú)菌器具管理規(guī)程》”、“ 20100007《質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程》”和“ 20101211《培養(yǎng)基的制備和保管管理規(guī)程》”制備相關(guān)檢驗(yàn)用物料。無(wú)誤后方可投入使用 6 1 1 6 08 驗(yàn)證依據(jù)所用檢驗(yàn)操作規(guī)程 驗(yàn)證方案依據(jù)的檢驗(yàn)操作規(guī)程不正確。 無(wú)菌器具、無(wú)菌手套 /衣服進(jìn)行效期、包裝確認(rèn)。 2 對(duì)實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行驗(yàn)證方案培訓(xùn) 1 12 對(duì) 緩沖液、消毒劑、純化水 的管理人員進(jìn)行培訓(xùn)，抽查期間核查效果。 8 1 1 8 06 緩沖液、消毒劑、純化水 緩沖液、消毒劑、純化水 配制不正確或過(guò)有效期或性狀明顯異常。 2 對(duì)照培養(yǎng)基、檢查用培養(yǎng)基、檢定菌、干熱 /濕熱滅菌指示條進(jìn)行期間核查。 8 1 1 8 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗(yàn)證方案 Page 11 of 31 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司 Yangtze River Pharmaceutical Group Sichuan Hairong Pharmaceutical Co.,Ltd 阿戈美拉汀片（ 25mg） 微生物限度方法驗(yàn)證方案 Page 12 of 31