【導讀】1．原理酶聯(lián)免疫吸附試驗。責任人輸血全套相應崗位上當班工作人員。按標本的保存和安全處置程序妥善保存。1）樣品類型為受見檢者血清或血漿。2）用真空采樣管采集受檢者血液標本4～5ml。3）保證樣品管的密閉狀態(tài)，離心分離血清/漿備用。4）儲存樣品，保持樣品管完全密閉，在室溫條件下不超過8小時。5）如果8小時內(nèi)不能完成檢測即應將標本放入2到8°C冰箱冷藏。37℃水浴箱中孵育30分鐘。6)每孔加顯色劑A、B各50ul（或1滴），混勻，密封，37℃避光顯色15分鐘。8)終止后在10分鐘內(nèi)完成判讀，用酶標儀在450nm波長處測定。單項陽性樣本必須復查；“灰區(qū)”結果必須復查；罕見模式必須復。10)核對結果，打印、簽發(fā)報告。12)保養(yǎng)儀器，關機。使用試劑科華生物工程公司乙肝兩對半ELISA試劑盒?；蚵圆《拘愿窝祝L期的潛伏感染可造成肝硬化甚至導致肝癌的發(fā)生。乙肝兩對半檢測試劑盒說明書。而其它指標如HbcAb有可能為陽性。輸血科預防措施程序。洗板機標準操作程序。

　　

【正文】 項目名稱 XX大學 XX 醫(yī)院輸血科 文件編號 ZNYXXXX/MYXM309 版次 /修改 第 2版 /第 0次修改 抗 HIV 抗體 檢測標準 操作規(guī)程 編制 /時間 陳 明 / 審核 /時間 XXX/ 審批 /時間 XXX/ 1．目的 規(guī)范 ELISA 法檢測“ 抗 HIV”的過程。 2．原理 微孔條已預包被高純度的 HIV 特異性抗原 gp160 和 gp36 等，檢測時若受檢者血樣中含有抗－ HIV 抗體，與之結合形成特異性復合物，再加入 HRP 標記的 gp3 gp41，采用雙抗原夾心法捕獲人血清或血漿中的 HIV(1+2)抗體，再用 TMB 底物顯色，顯色深淺與抗－ HIV 抗體的含量成正比。 用于獻血員 及高危人群中抗 HIV 抗體的篩查。 3．樣本 血清或血漿 樣品類型為受見檢者血清或血漿。 用真空采樣管采集受檢者血液標本 4～ 5ml。 保證樣品管的密閉狀態(tài)，離心分離血清 /漿備用。 儲存樣品，保持樣品管完全密閉，在室溫 (15到 30176。C)條件下不超過 8小時。 如果 8小時內(nèi)不能完成檢測即應將標本放入 2到 8176。C冰箱冷藏。 4．設備試劑 檢測儀器： Biocell Int 酶標儀， DEMIII 自動酶標洗板機。 試劑： 科華公司 抗 HIV 診斷試劑盒 (ELISA) 。濃縮洗滌液按 1/20 比例以蒸餾水稀釋備用。 5．操作步驟： 1． 將試劑盒平衡至室溫，取出所需的條板，剩余的及時封存。 2． 用去離子水或蒸餾水 20 倍稀釋濃縮洗滌液。 3． 將所需數(shù)量的條板固定于支架，按順序編號，設置空白對照孔、陽性和陰性對照孔。 4． 在樣品孔中加入 100ul（ 2 滴）待測樣品，陰性、陽性對照孔分別入 100ul（ 2滴）陰性或陽性對照 品 ， 空白孔不加， 充分混勻。 5． 密封， 置 37℃水浴溫育 60 分鐘。 76 6． 將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液充分洗滌 6 遍，拍干。 （注：洗滌時每孔要加滿洗液，勿使用孔間交叉污染。采用洗板機時應設定每遍有 30～ 60 秒的浸泡時間。） 7． 每孔加入 100ul（ 2 滴）酶標記物 ，空白對照不加 。 8． 密封， 置 37℃水浴溫育 30 分鐘。 9． 將孔內(nèi)液體甩干， 用洗滌液充分洗滌 6 遍，拍干。（注：洗滌時個孔要加滿洗液，勿使孔間交叉污染。采用洗機時應設定每遍有 30～ 60 秒的浸泡時間。） 10． 每孔加入 1 滴底物緩沖和 1 滴底物液，充分混勻，置 37℃溫育 10 分鐘。 11． 每孔加入 1 滴終止液終止顯色反應。 12． 用酶標儀單波長 450nm（ 用 空白對照 調 0）或雙波長 450nm/630nm 測定各孔OD 值 ， 15 分鐘內(nèi)完成讀數(shù) 。 6．質量控制： 每次檢測均要設空白、陰性及陽性對照，用單波 450nm 測定時，以空白對照調零。 正常時，陰性對照 OD 值應≤ ，陽性對照 OD 值應≥ ， 陰性對照值若小于 以 計算。 若陰性對照 OD 值、陽性對照 OD 值超出正常范圍或其孔間之差大于 30%，應重復試驗。 7．結果計算： 臨界值（ Cutoff）的計算： 臨界值（ Cutoff） =+陰性對照平均 OD 值 8．結果判斷： 1． 樣品的 OD 值≥ Cutoff 值者為 HCV 抗體反應陽性。 2． 樣品的 OD 值 Cutoff 值者為 HCV 抗體反應陰性。 9．注意事項： 1． 檢測過程必須符合 HIV 實驗室管理規(guī)范和生物安全規(guī)定，嚴防交叉感染。 2． HIV 抗體測定結果必須以酶標儀讀數(shù)為準。 3． 陽性樣本必須雙管復查，復查陽性者送 HIV 確認實驗室確認。 4． 為保證樣品稀釋的準確性，樣品液須用加樣器加樣。 5． 滴加試劑前應輕搖滴瓶，使之混勻，并棄去開始 1～ 2 滴。 6． 不同批號的試劑不可混用。 77 項目名稱 XX大學 XX醫(yī)院輸血科 文件編號 ZNYXXXX/MYXM310 版次 /修改 第 2版 /第 0次修改 ELISA 梅毒螺旋體抗體 (TPAb)操作規(guī)程 編制 /時間 陳 明 / 審核 /時間 XXX/ 審批 /時間 XXX/ 1．目的 規(guī)范檢測“ TPAb”過程。 2．原理 TPAb 的檢測采用雙抗原夾心 ELISA 法，即用梅毒螺旋體（ TP）基因工程混合抗原（ 17KDa、 47KDa）包被聚苯乙烯微孔反應板，樣本中的 TPAb 與之交連后再與酶標記的基因工程抗原（ 17KDa、 47KDa）結合，經(jīng)顯色劑作用后呈現(xiàn)有色反應。 3．樣本 血清或血漿 樣品類型為受見檢者血清或血漿。 用真空 采樣管采集受檢者血液標本 4～ 5ml。 保證樣品管的密閉狀態(tài)，離心分離血清 /漿備用。 儲存樣品，保持樣品管完全密閉，在室溫 (15到 30176。C)條件下不超過 8小時。 如果 8小時內(nèi)不能完成檢測即應將標本放入 2到 8176。C冰箱冷藏。 4．設備試劑 檢測儀器： Biocell Int 酶標儀， DEMIII 自動酶標洗板機。 試劑： 科華公司 TPAb 診斷試劑盒 (ELISA) 。濃縮洗滌液按 1/20 比例以蒸餾水稀釋備用。 5．標準和質控 質控 參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心質控。 CUTOFF 值計算公式： 樣本 OD 值 /陰性對照 OD 值 判斷標準 陽性： 樣本 OD 值 /陰性對照 OD 值 陰性： 樣本 OD 值 /陰性對照 OD 值 測定波長 450nm。 參考波長 630nm。 6．操作步驟： 樣本編號→樣本分離、檢測儀器準備、試劑準備→樣本測定、錄入資料→分析質控 /結果→打印檢驗結果→簽發(fā)報告單。 樣本編號 按順序將申請單和樣本一一對應編號。認真檢查檢驗目的、病人姓名、 78 性別、科室、床號，血液量 3ml。 樣本分離 將已編 號的樣本配平離心， 3000r/min 5min。 儀器和試劑準備 根據(jù)樣本多少準備試劑，增加 3 孔，分別設置空白對照、陰性對照和臨界質控；檢測儀器按《酶標 儀作業(yè)指導書 》和《 自動酶標洗板機作業(yè)指導書 》操作。 樣本檢測 用微量加樣器取 50ul 相應樣品及質控品、陰陽性對照品加入對應各孔，空白對照不加。 每孔再加酶標結合物 50ul（或 1 滴）（空白對照除外），輕微振蕩 5 分鐘后，置 37℃水浴箱中孵育 30 分鐘。 用洗板機洗滌 6 次，拍干。 每孔加顯色劑 A、 B 各 50ul（或 1 滴），混勻，密封， 37℃避光顯色 15分鐘。顯色時間從開始加第一滴顯色液 B 開始計時。 每反應孔加終止液 50ul（或 1 滴），混勻。 終止后在 10 分鐘內(nèi)完成判讀，用酶標儀在 450nm 波長處測定。 先觀察室內(nèi)質控是否在控，判斷結果的可信性，將數(shù)據(jù)處理、計算、并儲存，導入數(shù)據(jù)庫。單項陽性樣本必須復查；“灰區(qū)”結果必須復查；罕見模式必須復查。 核對結果，打印、簽發(fā)報告。 檢驗完畢后，清理其桌面，血清樣本放入專用樣本貯存冰箱內(nèi)，質控血清盤放入冰箱；填寫操作記錄使用記錄本。 保 養(yǎng)儀器，關機。 7． 控制品使用水平和頻率 質控水平：衛(wèi)生部臨界值血清 , 每板一次 。 8．參考范圍 陰性， 樣本 OD 值 /陰性對照 OD 值 。 9. 臨床意義 TPAb 是 TP 感染后所產(chǎn)生的抗體 ,用以反應 TP 的感染情況 。 輸血科 室內(nèi)質控程序。 輸血科 預防措施程序。 TPAb 試劑盒說明書。 標本采集、接收、保存操作程序。 BIOCELL 酶標儀標準操作程序。 79 洗板機標準操作程序。