蛋白質(zhì)制備資料-資料下載頁
2024-11-04 05:29本頁面
【正文】 需要快速，但不需要十分 精確的測定。,較靈敏，適合測定20～40μg/mL 的蛋白質(zhì)溶液．,雖精確度不高，但操作簡便， 樣品可回收。,快速、靈敏度高，重復性好。,第二十六頁，共三十二頁。,第七節(jié) 蛋白質(zhì)的純度(chnd249。)標準,一、電泳(di224。n yǒnɡ)法,常用(ch225。nɡ y242。nɡ)于蛋白質(zhì)純度鑒定。,二、層析性質(zhì)的考查,如果制劑是純的，那么各分級局部的比活力應當恒定。 如果所有局部的比活力都相同，認為該樣品是均一的。,三、免疫化學法,靈敏度高，應用廣泛。,四、蛋白質(zhì)化學結構分析法,一個純蛋白質(zhì)，所有氨基酸都成整數(shù)比。,純度鑒 定方法,色譜純,電泳純,結晶純,第二十七頁，共三十二頁。,五、超速離心沉降(ch233。nji224。ng)分析法,此法優(yōu)點是時間(sh237。jiān)短、用量少。缺點是靈敏度較差。,第二十八頁，共三十二頁。,總結,蛋白質(zhì)別離純 化的一般(yībān)程序,前處理(chǔlǐ),粗分級別離,細分級別離,蛋 白 質(zhì) 的 層 析 分 離,離子交換(l237。 zǐ jiāo hu224。n)層析(IEX),柱層析技術,凝膠過濾層析,疏水相互作用層析〔HIC〕,親和層析,免疫親和層析,共價層析,固定化金屬離子親和層析,染料配體親和層析,吸附層析,聚焦層析,高效液相層析〔HPLC〕,第二十九頁，共三十二頁。,聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAG〕,盤狀電泳(di224。n yǒnɡ),SDSPAG電泳(di224。n yǒnɡ),交叉(jiāochā)免疫電泳,凝膠免疫電泳,雙向電泳,高效毛細管電泳,印漬轉移法,火箭免疫電泳,凝膠等電聚焦,蛋白質(zhì)結晶,蛋白質(zhì)純度測定,毛細管區(qū)帶電泳〔CZE〕,毛細管電動力學層析〔MECC〕,毛細管等電聚焦〔CIEF〕,毛細管凝膠電泳〔CGE〕,蛋白質(zhì)的電泳別離,第三十頁，共三十二頁。,課 外 作 業(yè),1.蛋白質(zhì)純化(chn hu224。)方法有幾種類型？,2.層析方法有幾種(jǐ zhǒnɡ)？各種層析方法的 根本原理是什么？,3.A、B、C3種蛋白質(zhì)的等電點分別為9.0、 8.0、4.0，將這3種蛋白質(zhì)混合(h249。nh233。)在一起，上 到CMSepharose Fast Flow 陽離子交換 柱上，采用0.05mol/L檸檬酸緩沖液〔pH 5.0〕平衡吸附，請問：在此條件下，哪種 蛋白質(zhì)不被吸附，被吸附的蛋白質(zhì)哪種先 被鹽溶液〔1mol/LNaCl梯度〕洗下來， 為什么？,第三十一頁，共三十二頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結,第二章蛋白質(zhì)制備。制備凝膠用TrisHCl緩沖液，電極緩沖液為TrisGly。由于Cl和Gly離子(l237。zǐ)的泳動速度不同，造成電壓梯度不連續(xù)。使用脂肪族多氨基多羧基物質(zhì)作介質(zhì)，在電場中可獲得理想的平滑pH梯度。熒光胺與伯胺專一結合后得到熒光加成產(chǎn)物，可用于PAG。免疫擴散與免疫電泳相結合，測定混合蛋白質(zhì)中某一蛋白質(zhì)的量。此法可測量微量抗原物質(zhì)，也可測量微量抗體物質(zhì)。所有組分都向負極移動，移動速度為：。為什么,第三十二頁，共三十二頁。,
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