【正文】 射免疫法：靈敏度高 蛋、奶、肉：GCECD 牛奶、牛組織：LC/MS 蛋：HPLC 肉：ELISA篩選，LC定量，GC/MS確認,第八十二頁，共一百零二頁。,7.3 毒素(d s249。),生物毒素〔Biotoxin)是一大類生物活性物質的總稱，包括動物毒素、植物毒素和微生物毒素。 生物毒素已經(yǐ jing)對食品平安和人類健康構成了威脅，因此，食品/飼料中生物毒素的研究也日益顯現出其必要性和迫切性。,第八十三頁，共一百零二頁。,7.3.1 真菌(zhēnjūn)毒素,真菌毒素〔Mycotoxins〕是某些絲狀真菌產生的具有生物毒性的次級(c236。 j237。)代謝產物，這些毒性真菌包括曲霉、青霉、鐮刀霉、鏈格孢酶、棒孢酶和毛殼酶等。 最先被別離純化的真菌毒素是麥角生物堿〔Ergot Alkaloid, 1875)和青霉酸〔Penicillic Acid, 1913)。然而，對真菌毒素的真正研究卻是從1962年黃曲霉毒素的發(fā)現開始的。,第八十四頁，共一百零二頁。,黃曲霉毒素(d s249。)〔Aflatoxin) 黃曲霉和寄生曲酶是產生黃曲霉毒素的主要菌種，其他曲霉、毛霉、青霉、根霉等也可以產生黃曲霉毒素。 黃曲霉毒素最常見于花生及花生制品，玉米、棉子和一些堅果類食品中，主要有黃曲霉毒素B1，B2，G1及G2等10多種。其中以黃曲霉毒素B1存在量最大且毒性最大。,第八十五頁，共一百零二頁。,黃曲霉毒素是已被證實的致癌物，其中黃曲霉毒素BM1是強致癌物。 黃曲霉毒素作用機理是影響細胞膜，抑制RNA合成并干擾某些酶的感應方式。 中毒(zh242。ng d)病癥無特異表現，臨床可表現為發(fā)育緩慢、腹瀉、肝腫大、肝出血、肝硬化、肝壞死、脂肪滲透和膽道增生等。 1993年WHO的癌癥研究機構將其劃定為1類致癌物。它是致癌力最強的生物毒素，人類原發(fā)性肝癌的主要致病因素之一。,第八十六頁，共一百零二頁。,黃曲霉毒素(d s249。)分析,食品中黃曲霉毒素(d s249。)的測定，主要有TLC, ELISA, HPLC等方法。 TLC法靈敏度和重現性較差；ELISA重現性差，易受樣品基質干擾；HPLC法靈敏度和準確度高，重現性好，因此已成為黃曲霉毒素分析的主要手段。,第八十七頁，共一百零二頁。,HPLC法測定黃曲霉毒素，一般使用靈敏度和選擇性較好的熒光檢測器。在反相色譜中，B1和G1兩種異構體熒光強度很弱，需進行(j236。nx237。ng)衍生化，提高其熒光強度，靈敏度才能滿足一般食品法規(guī)的限量。 衍生化的方法一般有柱前和柱后兩類，柱前衍生一般使用三氟乙酸，柱后衍生有碘液、過溴化吡啶溴以及電化學等方法。,第八十八頁，共一百零二頁。,樣品提取與凈化 樣品參加氯化鈉和甲醇－水〔7：3〕，均質2min，過濾。取濾液加適量水，再次過濾后，上免疫親和柱，用水洗柱，最后用甲醇洗脫黃曲霉毒素，用水定容，供HPLC測定。 HPLC條件 色譜(s232。 pǔ)柱C18； 流動相：甲醇－乙腈－水〔1：1：3〕 柱后衍生試劑：碘液 衍生化溫度和時間：70℃，55s 激發(fā)波長：360nm 發(fā)射波長：大于520nm,第八十九頁，共一百零二頁。,7.3.2 海洋(hǎiy225。ng)藻類毒素,海洋藻類毒素是由海洋中的微藻或海洋細菌產生的一類生物活性物質的總稱。由于這些(zh232。xiē)毒素通常是通過海洋貝類或魚類等生物媒介造成人類中毒的，因此這些(zh232。xiē)毒素常被稱作貝毒或魚毒。 常見的貝毒有麻痹性貝毒， 腹瀉性貝毒，記憶缺失性貝毒，神經性貝毒等。 我國浙江、福建、廣東等地曾屢次發(fā)生貝類中毒，導致中毒的貝類有蚶子、花蛤、香螺、織紋螺等常食用的貝類。,第九十頁，共一百零二頁。,麻痹性貝毒 麻痹性貝毒是分布(fēnb249。)最廣，危害最大的一類毒素。它是由甲藻產生的一類四氫嘌呤毒素的總稱。 主要病癥表現為面部、肢端麻木，嚴重的會因呼吸肌麻痹而導致死亡。 腹瀉性貝毒 腹瀉性貝毒毒素主要來自甲藻中的鰭藻屬和原甲藻屬。 主要病癥為嘔吐和腹瀉，長期毒性效應可能導致癌癥。,第九十一頁，共一百零二頁。,記憶(j236。y236。)缺失性貝毒 記憶缺失性貝毒的活性成分為軟骨藻酸。 中毒者表現出腸道病癥和神經紊亂，嚴重的有短暫的記憶喪失現象。 神經性貝毒 神經性貝毒是到目前為止危害范圍較小的一類毒素。 表現出神經中毒的病癥。,第九十二頁，共一百零二頁。,腹瀉(f249。xi232。)性貝毒檢測 腹瀉性貝毒的分析主要采用熒光化合物ADAM標記－反相高效液相色譜分析的方法。由于ADAM不穩(wěn)定，而且不易獲得，因此又有了一些改進的方法，包括采用不同的衍生劑和提取方法。但由于目前樣品前處理及色譜過程，對DSP結構類似物不能有效別離，因此HPLC法測定DSP效果不是很理想。目前HPLCMS技術已用于DSP的分析，成為DSP液相色譜法的重要補充。,第九十三頁，共一百零二頁。,麻痹性貝類毒素(d s249。)檢測 麻痹性貝毒〔PSP〕是一類四氫嘌呤化合物，這類毒素通常是非結晶、高極性、難揮發(fā)的物質，檢測方法主要采用液相色譜法。由于PSP本身生色基團很弱，不易被檢測，因此檢測前須氧化修飾，將PSP分子的環(huán)結構氧化成熒光生色基團。LC/MS和毛細管電泳/質譜〔CE/MS〕聯用技術已用于麻痹性貝毒分析。,第九十四頁，共一百零二頁。,神經性貝毒檢測 神經性貝毒〔NSP〕色譜分析包括薄層層析(c233。nɡ xī)法〔TLC〕和HPLC。TLC不夠靈敏，目前已很少應用。HPLC法由于流出物背景干擾，在檢測靈敏度和選擇性方面存在問題。近年來，HPLCMS聯用技術開始應用于神經性貝毒分析。,第九十五頁，共一百零二頁。,河豚毒素(Tetrodotoxin) 河豚(Spheroides vermicularis)又名鈍魚，它的某些臟器及組織中均含有毒素，是一種神經毒，其毒性穩(wěn)定〔220℃〕，經炒煮、鹽淹和日曬等均不能被破壞，可使神經中樞和神經末梢發(fā)生麻痹。中毒病癥始發(fā)于使用后10秒，先是口腔麻木和刺痛，繼發(fā)為虛弱、麻痹、血壓降低(ji224。ngdī)和脈搏快而弱，如不及時治療可出現死亡。,第九十六頁，共一百零二頁。,Tetrodotoxin,第九十七頁，共一百零二頁。,治療： 盡快排除毒物：催吐、洗胃、導瀉。 應用吸附劑減少毒物的吸收。 補液、利尿，可給予葡萄糖、維生素Ｃ、輔酶Ａ、ＡＴＰ等，促進毒素的排泄。 使用(shǐy242。ng)腎上腺皮質激素，如地塞米松，提高組織對毒素的耐受性。 對癥治療：防治呼吸衰竭。 河豚毒素中毒目前無特殊解毒劑，但由于毒素存在體內解毒和排泄很快，如果發(fā)病后８小時未死亡，多能恢復，因此，一旦發(fā)現中毒，應盡快給予各種排毒和對癥處理的措施，讓病人度過危急期。,第九十八頁，共一百零二頁。,河豚毒素測定方法,小鼠生物試驗法 免疫化學測定法 毛細管等速電泳電壓檢測法 熒光法 TLC/火焰(huǒy224。n)離子檢測法 TLC/快原子轟擊質譜法 HPLC HPLC/MS,第九十九頁，共一百零二頁。,HPLCMS測定河豚魚中河豚魚毒素 1.前處理 將河豚魚肉或皮中的河豚魚毒素用乙醇－乙酸－水〔75：1：14〕提取，過濾后，提取液經旋轉蒸發(fā)濃縮，用離子交換樹脂凈化，用10％乙酸溶液(r243。ngy232。)洗脫。洗脫液經濃縮后用活性炭凈化，用乙醇－乙酸－水〔20：1：79〕洗脫。洗脫液經濃縮后用水定容后供HPLCMS測定。,第一百頁，共一百零二頁。,2.測定(c232。d236。ng) HPLC－MS條件： 色譜柱：Shimpack CLCODS柱 流動相：0.06M七氟丁酸－0.001M乙酸銨〔pH5.0〕 流速：0.5mL/min 樣品不經柱前衍生 加速電壓：20kV,第一百零一頁，共一百零二頁。,內容(n232。ir243。ng)總結,第七章 食品中有害有毒物質。采用TMS作衍生化試劑、EI電離方式(fāngsh236。)電離某些β興奮劑的碎片如下：。瘦肉精——克倫特羅。目前國外已有很多RIA試劑盒投放市場，這些試劑盒可檢測一種或多種β興奮劑。金標免疫分析技術采用膠體金標記，實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒外表的包被過程。HPLCMS測定河豚魚中河豚魚毒素。流動相：0.06M七氟丁酸－0.001M乙酸銨〔pH5.0〕。加速電壓：20kV,第一百零二頁，共一百零二頁。