毛細(xì)管電泳ppt課件(2)-資料下載頁
2025-05-05 01:12本頁面
【正文】 Capillary electrochromatography 2022/6/2 46 幾種主要類型 開管毛細(xì)管電色譜柱 OTCEC 填充毛細(xì)管電色譜柱 PCEC 整體毛細(xì)管電色譜柱 MLCEC 2022/6/2 47 填充毛細(xì)管電色譜柱 ? PCEC是最早研究的，其填料巨大的比表面使其對污染不敏感，分析結(jié)果的重現(xiàn)性較好，但因其填充及制備柱兩端塞子的困難，以及由此帶來的氣泡效應(yīng)和塞子效應(yīng)等阻礙了它的進(jìn)一步發(fā)展。但人們至今仍在努力并取得可喜進(jìn)展 。 2022/6/2 48 開管毛細(xì)管電色譜柱 ? OTCEC柱中無塞子和填料，氣泡效應(yīng)和渦流擴(kuò)散的影響小，分析中可獲得較高柱效，適用于混合物的快速分析，但其相比小，柱容量低，壽命短，使其應(yīng)用亦受到一定限制。 2022/6/2 49 化學(xué)鍵合 物理吸附 2022/6/2 50 整體毛細(xì)管電色譜柱 ? MLCEC通過在毛細(xì)管內(nèi)原位聚合或固化的方法制成具有均一多孔結(jié)構(gòu)的整體式柱床，使毛細(xì)管柱的制備比較簡單，且無塞子效應(yīng) . 制備反應(yīng) 1cm 1cm 2022/6/2 52 SEM表征 2022/6/2 53 1. 根據(jù)等電點差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)； 2. 毛細(xì)管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)（合成的具有不同等電點范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物），當(dāng)施加直流電壓（ 6～ 8V）時，管內(nèi)將建立一個由陽極到陰極逐步升高的 pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液 pH有關(guān)，在酸性溶液中帶正電荷，反之帶負(fù)電荷。在其等電點時，呈電中性，淌度為零； 五、毛細(xì)管等電聚焦 Capillary isoelectric focusing， CIEF 2022/6/2 54 4. 聚焦：具有不同等電點的生物試樣在電場力的作用下遷移，分別到達(dá)滿足其等電點 pH的位置時，呈電中性，停止移動，形成窄溶質(zhì)帶而相互分離； 5. 陽極端裝稀磷酸溶液，陰極端裝稀 NaOH溶液； 6. 加壓將毛細(xì)管內(nèi)分離后的溶液推出經(jīng)過檢測器檢測； 7. 電滲流在 CIEF中不利，應(yīng)消除或減小。 2022/6/2 55 一、離子分析 analysis of ion 陽離子分析 遷移方向和電滲流方向一致； 24種金屬離子； 陽極進(jìn)樣，陰極檢測； 具有很高的靈敏度； 第五節(jié) 應(yīng)用與進(jìn)展 2022/6/2 56 陰離子分析 陰離子電泳方向和電滲流方向相反、速度接近，分析時間長、效率低； 質(zhì)量小、電荷密度大的離子如： SO4 Cl、 F等，電泳速率大于電滲流，陽極端流出，在陰極端無法檢測； 加入電滲流改性劑，十六烷基三甲基溴化胺等，使電泳方向和電滲流方向一致，可在 36種陰離子；陰極進(jìn)樣，陽極檢測； 離子價態(tài)及存在形態(tài)分析； 2022/6/2 57 二、藥物分析 Analysis of pharmaceutics 檢測體液或細(xì)胞中某些代謝產(chǎn)物的分析； 尿液中的氨基酸含量作為臨床診斷糖尿病的輔助手段； 采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳方式，在 11min內(nèi)分離17種藥物； 2022/6/2 58 采用 MEKC模式，鑒定違禁藥物 . 2022/6/2 59 三、手性化合物分析 Analysis of chiral pounds 合成獲得單一手性化合物相當(dāng)困難； 528種手性合成藥物， 61種以單一對映體形式銷售，其他為外消旋體；檢測分析也相當(dāng)困難；研究熱點； R反應(yīng)停是安眠藥， S式致胎兒畸形； HPCE分離分析手性化合物的方法：加入手性選擇劑； 形成配合物的穩(wěn)定常數(shù)有差異，結(jié)合 HPCE的高效率； 常用手性選擇劑：環(huán)糊精及其衍生物；手性冠醚；手性表面活性劑（氨基酸衍生物、膽酸鈉、?；敲撗跄懰峒捌溻c鹽、低聚糖等天然手性表面活性劑） 2022/6/2 60 四、氨基酸與蛋白質(zhì)分析 Analysis of amino acids 采用 MEKC模式，在 25分鐘內(nèi)分離了 23種丹?；被?； HPCE可取代傳統(tǒng)的氨基酸分析儀； 問題：吸附和檢測； 2022/6/2 61 蛋白質(zhì)分析 2022/6/2 62 五、核酸分析及 DNA排序 Analysis of nucleic acids and sequence of DNA 重要分析手段； 圖，酶解的雙螺旋DNA限制性片段的分離； 2022/6/2 63 六、新進(jìn)展 advances and special topics 整體化學(xué)分析系統(tǒng)（ TAS）及 TAS微型化（ μ TAS） 在硅片上光刻出矩形槽作為毛細(xì)管，理論塔板數(shù) 105/m； CEMS； 應(yīng)用于人類基因 DNA測序； 5～ 10萬個基因， 30億個堿基對，目前最有效的 DNA序列分析儀， 10小時 /次；可同時電泳 24個樣品；速度 1200堿基對 /小時，提高速度！ 100支毛細(xì)管陣列電泳；速度 280堿基對 /小時 /支
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