【正文】 池。 ? 毛細(xì)管的選擇：核心部件是毛細(xì)管電泳柱。理想的材料是具備化學(xué)惰性和電惰性，紫外可見光透性，柔韌性，強(qiáng)度高，耐用且便宜。 ? 目前有熔融石英、聚四氟乙烯（ Teflon)，玻璃等。石英管的外表涂上一層聚酰亞胺保護(hù)層，外壁保護(hù)層去掉一小段作為檢測(cè)窗；聚四氟乙烯可以透過紫外線，不需要特殊檢測(cè)窗。 ? 細(xì)內(nèi)徑的應(yīng)用有助于高電場(chǎng)下減少電流，降低焦耳熱，增大散熱面積，加快散熱速度，使在電泳過程中大大降低管心和管壁溫差，減少粘度和速度徑向分布差異，保持電滲流流型扁平性（柱塞流），實(shí)現(xiàn)毛細(xì)管電泳高效分離。 ? 內(nèi)徑過小造成進(jìn)樣、檢測(cè)、清洗等技術(shù)困難。 毛細(xì)管的理論塔板數(shù)和長(zhǎng)度 ? 內(nèi)徑一般 25— 100微米。 ? 毛細(xì)管的理論塔板數(shù)隨著長(zhǎng)度增加而增加。為了恒定場(chǎng)強(qiáng)，增加柱長(zhǎng)必須增加操作電壓，同時(shí)還會(huì)延長(zhǎng)分析時(shí)間，實(shí)際上限制了毛細(xì)管的無限加長(zhǎng)。 ? 有效長(zhǎng)度從 10cm 的凝膠柱到 80— 100cm用于分離復(fù)雜樣品的熔融石英毛細(xì)管空柱，常用 30— 75cm。 ? 一般用堿性溶液沖洗毛細(xì)管內(nèi)壁吸附層，使表面的硅醇去質(zhì)子化。為使用過的為涂漬的毛細(xì)管柱，一般用 1N的氫氧化鈉（ 5— 15倍柱體積）洗，再用 （ 5— 15倍柱體積）洗，然后用 3— 5倍緩沖溶液洗。一系列清洗過后，用緩沖溶液運(yùn)行 1— 2小時(shí)。 ? 每次分析樣品之前宜用 。也可以用強(qiáng)酸（ 1N鹽酸）和有機(jī)溶劑（甲醇、乙醇）清洗。涂漬柱不可用堿性溶液洗，使用一段是后重現(xiàn)性變差，可以用 、有機(jī)溶劑、和（ ）清洗。 毛細(xì)管恒溫系統(tǒng)和高壓電源 ? 溫度有效控制很重要，溫度變化 1度。緩沖溶液粘度變化 2— 3%。粘度對(duì)進(jìn)樣和遷移時(shí)間影響很大。因此毛細(xì)管的溫度控制在正負(fù)。河南高溫系統(tǒng)采用告訴氣流或液體浴恒溫。 ? 高壓電源： ? 常用 0— 30kV，電流 200— 300μ A，為了獲得遷移時(shí)間的高度重現(xiàn)性，一般控制電壓穩(wěn)定在正負(fù) %。 ? 高壓電源應(yīng)該可以切換極性，正常毛細(xì)管電泳分離，電滲流總是從正到負(fù)，酒藥正極端進(jìn)樣，負(fù)極端檢測(cè)；但是電滲流被減弱，反轉(zhuǎn)或用了凝膠柱，則要把電極極性反轉(zhuǎn)，負(fù)極進(jìn)樣正極檢測(cè)。由于進(jìn)口端和出口端受到監(jiān)測(cè)器結(jié)構(gòu)限制，只能由電源切換轉(zhuǎn)換極性。使用雙極性電極可以由軟件控制直接切換電極。 電極和緩沖溶液池 ? 毛細(xì)管電泳系統(tǒng)中，由正負(fù)鉑電極，進(jìn)樣緩沖溶液池，檢測(cè)端緩沖溶液池和充滿運(yùn)行的緩沖溶液管組成一個(gè)導(dǎo)電回路。 ? 電極；化學(xué)惰性的鉑電極； ? 緩沖溶液池：特制的玻璃瓶和聚四氟乙烯小離心管； ? 緩沖溶液池的液面高度控制保證毛細(xì)管分離效率和遷移時(shí)間重現(xiàn)性的重要因素。 ? 由于緩沖溶液池 本身存在著容積的系統(tǒng)誤差， 50μ L緩沖溶液必然造成兩池液面無法持平。試驗(yàn)結(jié)果表明 50μ m內(nèi)徑的毛細(xì)管有 2mm的高度差可以帶來遷移時(shí)間 2— 3%誤差。 100μ m內(nèi)徑的毛細(xì)管有 2mm的高度差可以帶來遷移時(shí)間 10%的誤差。 ? 更新緩沖溶液可以提高電泳分離重現(xiàn)性。溶液電解會(huì)改變緩沖溶液 PH值，電滲流也隨之改變。水溶液中電解會(huì)在正極產(chǎn)生氫離子，負(fù)極產(chǎn)生氫氧根離子。伴隨著離子遷移，稱為緩沖損耗。電解程度取決于電流大??；PH值變化取決于緩沖溶液的緩沖容量。 檢測(cè)方法 ? 毛細(xì)管內(nèi)徑小，檢測(cè)信號(hào)是突出問題。分析只需要 nL級(jí)樣品量，但是不是痕量分析技術(shù)，它需要相對(duì)較濃的樣品組分，或是采用預(yù)濃縮方法，以提高檢測(cè)區(qū)帶濃度。紫外 — 可見光是毛細(xì)管電泳中最廣泛的檢測(cè)方法。 ? 紫外 — 可見光檢測(cè)：可以使熔融石英管可以在 200nm以上到可見光范圍內(nèi)檢測(cè)。柱上檢測(cè)沒有死體積和組分混合而產(chǎn)生的餓譜帶展寬，因?yàn)闄z測(cè)窗口開在毛細(xì)管上。檢測(cè)區(qū)的寬度小于區(qū)帶寬度。毛細(xì)管的電泳峰寬一般 2— 5mm寬，專門設(shè)計(jì)的檢測(cè)窗狹縫就為此寬度。 ? 靈敏度： A= ε bc ,取決于光程 b，濃度 c和吸收系數(shù) ε 。 ? 泡狀池可以增大光程而不減少分離效率和分離度。 ? 較低的紫外波長(zhǎng)可以獲得較高的靈敏度，如多肽和糖，完全可以在 200nm 或 200nm以下檢測(cè)，需用背景吸收小的磷酸鹽或硼酸鹽緩沖溶液。 ? 線性檢測(cè)范圍 ? 朗伯 — 比爾定律中儀器偏差是定量分析的根本限制。分析物濃度較高時(shí)表現(xiàn)為校正曲線斜率較小。線性檢測(cè)范圍主要決定于到達(dá)監(jiān)測(cè)器的雜散光。理想的情況是所有光都經(jīng)過毛細(xì)管軸而不經(jīng)過管壁。由于毛細(xì)管體積小及曲率原因，毛細(xì)管檢測(cè)線性范圍比液相色譜的要小。 ? 增大狹縫可以增加二極管受光量，提高檢測(cè)限，降低噪音；狹縫使雜散光通過管壁會(huì)損失新星檢測(cè)范圍，增大狹縫會(huì)減少分離度。在具體分析條件下選擇狹縫大小使得靈敏度、分離度和線性范圍達(dá)到最佳。 檢測(cè)器數(shù)據(jù)采集速率和信號(hào)響應(yīng)時(shí)間 ? 毛細(xì)管的高效使溶質(zhì)區(qū)帶很窄， 5s甚至更小的峰很常見。數(shù)據(jù)采集速率必須足夠快才能描述一個(gè)峰。一個(gè)完整的電泳峰至少需要20個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，數(shù)據(jù)采集速率應(yīng)該是 5— 10HZ。 ? 儀器相應(yīng)時(shí)間太快會(huì)增大噪音，太慢會(huì)使峰變寬和峰形畸變。一般時(shí)間偽 .1— 。 ? 二極管陣列檢測(cè)（ DAD） ? DAD檢測(cè)是多波長(zhǎng)和單波長(zhǎng)檢測(cè)的替代方法。一個(gè)消色差透鏡把光聚集在毛細(xì)管上，接著，光束被衍射光柵色散到光電二極管陣列上。一個(gè)陣列包含幾百個(gè)二極管，每個(gè)二極管都可以用來檢測(cè)某個(gè)窄帶的光譜。二極管陣列可以同時(shí)選擇到一次電泳分離的整個(gè)波長(zhǎng)范圍。當(dāng)所有的峰都被檢測(cè)到后，二極管陣列可以用來給出每個(gè)組分的最大吸收波長(zhǎng)，電泳圖譜也可以用分析時(shí)間 — 波長(zhǎng) — 吸光值三維的形式給出。 二極管陣列的功能 ? 多波長(zhǎng)信號(hào)檢測(cè)： 二極管陣列可以在不止一個(gè)波長(zhǎng)下檢測(cè)樣品，對(duì)于個(gè)組分最大波長(zhǎng)不同的情況很有用。 未分離峰的定量： 如果兩個(gè)組分經(jīng)過電泳后未分離，即使它們?cè)谡麄€(gè)波長(zhǎng)范圍內(nèi)重疊。二極管陣列也可以定量。要用到峰消除后信號(hào)扣除方法，其中要使用一個(gè)附加參考波長(zhǎng)。 峰純度的檢驗(yàn) ：組分和雜質(zhì)光譜不同，二極管陣列可以檢測(cè)出峰的純度。在峰流出過程中作幾個(gè)光譜圖，經(jīng)過校正和重疊來比較，如果所有圖譜都重疊，這個(gè)峰是純的。 峰的定性確認(rèn) ：電泳時(shí)間和淌度的測(cè)量常常作峰的定性分析方法。二極管陣列檢測(cè)器可以自動(dòng)給出峰頂處的光譜圖，可以和庫存的譜圖比較，算出匹配因子，給出峰的定性統(tǒng)計(jì)概率。 定量分析： 采用峰高或面積定量 固相萃取技術(shù)（ solid phase extraction SPE) ? SPE的基本模式；基本原理是樣品在兩相的差異，即在固相和液相分配系數(shù)不同。保留或洗脫的機(jī)制取決于被分析物與固相表面活性基團(tuán)，以及被分析物與液相之間分子作用力。 ? 兩種洗脫模式：一種是被分析物與固相之間的親和力比其與所存在的生物介質(zhì)的親和力更強(qiáng)，因而被保留。用一種親和力更強(qiáng)的洗脫液洗脫。 ? 另一種是存在的餓生物介質(zhì)與固相親和力更強(qiáng)，用溶劑直接洗脫。 ? 現(xiàn)代 SPE方法采用長(zhǎng)約 2—— 3cm的聚丙烯小柱，內(nèi)裝各種填料，兩端裝有燒結(jié)片或多孔圓片，可以經(jīng)過加壓或抽負(fù)壓的方法使液體經(jīng)過小柱。 SPE操作步驟 ? ，活化填料，使固相表面易于和被分析物發(fā)生分子間相互作用，同時(shí)除去填料中可能存在的雜質(zhì)。 C18柱在甲醇含量大于 8%的水溶液中才能保持濕潤(rùn)有利于物質(zhì)吸附。 ? ，轉(zhuǎn)移過多甲醇，以便樣品和固體表面發(fā)生作用。清洗不宜過分，否則是甲醇含量過低，從而導(dǎo)致濕潤(rùn)度不夠。 ? ，使樣品經(jīng)過小柱。 ? ，轉(zhuǎn)移樣品中內(nèi)原性雜質(zhì)和其它相關(guān)雜質(zhì)。 ? ，收集洗脫液，揮發(fā)干溶劑后備用，或直接在線分析。 SPE填料 ? 可以用于 SPE的填料很多：活性炭、硅膠、硅藻土、硅酸鎂、氧化鎂、氧化鋁等。 ? 化學(xué)鍵合硅膠，用于正相的有：氨基、腈基、二醇基等。 ? 化學(xué)鍵合硅膠， 用于反相的有： C1 、 C2 、 C C8 、 C1環(huán)己基等。 ? 離子交換的有：季銨鹽、氨基、二氨基、苯磺酸基、羧基等。 ? 聚合物類：苯乙烯 — 二乙烯基苯共聚物