【正文】 度及毛細(xì)遷移速度177。20％）、尺寸（與標(biāo)識吻合）⑵ 試劑瓶和干燥劑由生產(chǎn)廠家提供質(zhì)量保證，達(dá)到規(guī)定要求。⑶ 其他：說明書、包裝外盒等應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如數(shù)量、規(guī)格等。三、試劑盒各組分的生產(chǎn)生物芯片主要包括DNA芯片、蛋白芯片、組織芯片和細(xì)胞芯片等。生物芯片診斷試劑產(chǎn)品基本可分成二個部分，一部分是芯片，另一部分檢測用工作液。如果有配套的檢測儀器，還需對儀器及處理軟件的應(yīng)用加以說明。（一）芯片的生產(chǎn)芯片生產(chǎn)的基本過程包括探針的獲取方法，純化，點(diǎn)樣，固定。1．探針獲取不同芯片，主要是探針不同，生物芯片的探針主要包括以下幾類，其它探針可參考制定相應(yīng)的技術(shù)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（1）DNA探針的獲取探針的形式包括PCR產(chǎn)物、克隆DNA、人工合成DNA片段等；要求有生產(chǎn)程序和質(zhì)量指標(biāo)及檢測方法，要進(jìn)行純化，有固定的純化程序。（2）抗原的生產(chǎn)抗原獲得方法包括細(xì)胞培養(yǎng)、從生物材料中分離提取、基因工程表達(dá)以及合成肽等?；蚬こ瘫磉_(dá)產(chǎn)物又分為純抗原蛋白、融合蛋白等。（3）抗體抗體分單克隆抗體和多克隆抗體?？贵w制備包括細(xì)胞培養(yǎng)，動物腹水，基因工程表達(dá)等方式。（4）細(xì)胞和組織包括細(xì)胞或組織類型，固定方法。組織材料包括固定，包埋，切片等。2．陣列的排列設(shè)計陣列的排列可以是依次排列、隨機(jī)排列、對角線排列以及其它排列方式，但設(shè)計時需考慮重復(fù)次數(shù)和對照等因素。3．點(diǎn)陣的制作使用儀器的需要確定型號，程序；手工制作的也應(yīng)有標(biāo)準(zhǔn)操作程序。4．固定：包括固定方式，固定條件等。應(yīng)對芯片生產(chǎn)的過程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量控制，如點(diǎn)樣和固定過程的監(jiān)控、點(diǎn)樣均一性檢驗(yàn)等。（二）工作液配制1．芯片生產(chǎn)所需試劑，包括細(xì)胞培養(yǎng)基，探針制備試劑，陣列制作和固定試劑等。2．樣品處理試劑，芯片檢測靶分子分為核酸和蛋白質(zhì)。檢測核酸的樣品處理試劑包括臨床取樣，DNA提取或RNA提取試劑，逆轉(zhuǎn)錄試劑，PCR擴(kuò)增試劑，核酸標(biāo)記試劑等；檢測蛋白的處理試劑包括取樣試劑，蛋白稀釋液以及特殊試劑等。3．反應(yīng)液：檢測核酸時的反應(yīng)液包括預(yù)雜交液，雜交液，洗脫液等；檢測蛋白時，包括封閉液，抗原/抗體反應(yīng)液，洗脫液，顯色液，顯色終止液等。（三）數(shù)據(jù)判讀1．判斷標(biāo)準(zhǔn)及依據(jù)，包括Cut off值的確定依據(jù)。2．?dāng)?shù)據(jù)判讀方式：人工還是軟件判讀。3．如果是軟件判讀，應(yīng)提供軟件判斷的科學(xué)依據(jù)（包括生物學(xué)原理、數(shù)據(jù)獲取原理和判斷實(shí)驗(yàn)是否成立的依據(jù)）以及實(shí)驗(yàn)測試的原始報告（或數(shù)據(jù)），并需要說明：⑴ 軟件的來源：購買或自己編制，是否獲得注冊等。⑵ 軟件的用途：包括對數(shù)據(jù)的分析、存儲、解讀、含義等。⑶ 軟件的使用：基本的使用程序。四、半成品質(zhì)量控制（一）抽樣檢驗(yàn)人員按批號抽取檢驗(yàn)需要數(shù)量的半成品，作好標(biāo)記，待檢。（二）半成品檢驗(yàn)利用上一批檢驗(yàn)合格的試劑盒的相應(yīng)組分，對本批生產(chǎn)出的各種試劑盒組分分別進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果達(dá)到產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。半成品檢驗(yàn)，一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品進(jìn)行。若某類試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。檢測所抽樣的半成品試劑盒的性能，包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。精密性用比最低檢測限高一個數(shù)量級的質(zhì)控品，重復(fù)檢測10次，判定結(jié)果一致。對定量檢測試劑，同時應(yīng)分析其線性相關(guān)系數(shù)和校準(zhǔn)品檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。企業(yè)應(yīng)該對每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性測試。穩(wěn)定性試驗(yàn)可在在特定溫度或特定條件下完成。對蛋白芯片，應(yīng)完成37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。五、成品質(zhì)量控制產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號、實(shí)際包裝量、抽樣申請單的要求進(jìn)行抽樣，同時填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數(shù)量應(yīng)包括檢驗(yàn)用數(shù)量和留樣數(shù)量。質(zhì)檢人員同時應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。每一批生物芯片類診斷試劑報批批量不少于2000人份。（1）成品檢驗(yàn)一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品進(jìn)行。若某類試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)試劑批放行前，應(yīng)完成穩(wěn)定性試驗(yàn)。穩(wěn)定性試驗(yàn)可在特定溫度或特定條件下完成。對蛋白芯片，每批試劑批放行前，應(yīng)完成37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。第五篇：體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則核酸擴(kuò)增體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則——核酸擴(kuò)增法試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（報批稿）20090515 09:00核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)泛指以擴(kuò)增DNA或RNA為手段，從而檢測特定核酸序列或篩查特定基因的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增反應(yīng)（TMA）等。核酸擴(kuò)增法檢測試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。本指導(dǎo)原則僅適用于核酸擴(kuò)增法檢測試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制，其他類核酸檢測試劑可參照相關(guān)內(nèi)容。國家藥品監(jiān)督管理部門依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時組織修訂。一、基本要求（一）核酸擴(kuò)增類檢測試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》。研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。（二）試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具有與其技術(shù)要求相適應(yīng)的人員、廠房、設(shè)施和儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴(kuò)增檢測以及操作人員防護(hù)所需的設(shè)備。建立專用實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格分區(qū)，人員和物品應(yīng)當(dāng)單向流動，以最大限度地防止實(shí)驗(yàn)過程中樣品之間的污染和避免擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立符合生物安全要求的設(shè)施和措施。（三）試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求，建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，并應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。（四）核酸擴(kuò)增類檢測試劑的引物設(shè)計應(yīng)當(dāng)符合核酸檢測設(shè)計的要求，擴(kuò)增體系應(yīng)設(shè)定合理的內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)，試劑需設(shè)置抗污染的特定措施，擴(kuò)增產(chǎn)物須進(jìn)行確證研究。（五）企業(yè)使用新型原材料時，應(yīng)提供與通行原材料比對研究結(jié)果及相關(guān)資料。使用未列入上述標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑，應(yīng)不低于分析純。二、原材料應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標(biāo)準(zhǔn)品等的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料來自市場（從其他單位購買），應(yīng)提供的資料包括：對物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。主要原材料（包括生產(chǎn)工藝）或其供應(yīng)商發(fā)生變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無DNase和RNase污染。（一）脫氧三磷酸核苷（dNTP）核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP。應(yīng)為HPLC純、PCR級，無DNase和RNase污染?！?0℃保存。（二）引物由一定數(shù)量的dNTP構(gòu)成的特定序列，通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。凍干粉，序列正確，合成量應(yīng)達(dá)到試劑生產(chǎn)要求。純度應(yīng)達(dá)到電泳級（PAGE）或HPLC級，不含雜帶。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或HPLC分析圖譜。應(yīng)作HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計測定OD260nm/—，可視為合格引物。—20℃保存。（三）探針是指特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測。通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在539。+39。端(和/或339。+39。端)進(jìn)行標(biāo)記，如熒光素報告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在339。+39。端標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán)，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化。凍干粉，純度應(yīng)達(dá)到HPLC純。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如HPLC分析圖譜；應(yīng)對探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實(shí)，并作HPLC分析。應(yīng)以可見—紫外分光光度計進(jìn)行200—800nm掃描，在260nm處應(yīng)有吸收峰。另外，根據(jù)標(biāo)記熒光素的不同，還應(yīng)該在熒光素的激發(fā)波長處有吸收峰，如FAM熒光素在494nm、TET熒光素在521nm、TAMRA熒光素在560nm處有特異的吸收峰，雜交探針在493nm、625nm、685nm處有特異的吸收峰，檢定合格后入庫。避光、—20℃保存。（四）DNA聚合酶如Taq DNA聚合酶。應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94℃保溫1小時后仍保持50%活性?！?0℃保存。（五）尿嘧啶糖基化酶（UNG）具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IU UNG在 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模版應(yīng)完全降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物?！?0℃保存。（六）逆轉(zhuǎn)錄酶具逆轉(zhuǎn)錄酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性?！?0℃保存。三、生產(chǎn)工藝核酸擴(kuò)增類檢測試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對pH、電導(dǎo)率等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。工藝研究的資料應(yīng)能對反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。四、質(zhì)量控制（一）半成品質(zhì)量控制1．按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品。2．以參考品 / 對照品進(jìn)行半成品質(zhì)量控制。如果產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)以其進(jìn)行檢定。如果產(chǎn)品不具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)根據(jù)規(guī)定制備相應(yīng)的企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。3．半成品檢定內(nèi)容包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。檢測結(jié)果應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。4．半成品檢定合格后，按試劑盒組成及時進(jìn)行分裝和包裝。（二）成品質(zhì)量控制1．每一批核酸擴(kuò)增類檢測試劑報批批量應(yīng)不低于3000人份。2．產(chǎn)品完成包裝后，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)量進(jìn)行抽樣和生產(chǎn)記錄審核。3．以參考品 / 對照品或參考品，進(jìn)行成品質(zhì)量檢驗(yàn)。結(jié)果應(yīng)符合要求。4。成品檢驗(yàn)的內(nèi)容應(yīng)包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性和穩(wěn)定性。5．試劑批放行前，應(yīng)對需要進(jìn)行穩(wěn)定性考核的試劑成分，在特定溫度或條件下進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。穩(wěn)定性試驗(yàn)可采用加速破壞試驗(yàn)。