13-基因表達調控與重組dna技術-資料下載頁
2025-01-14 04:12本頁面
【正文】 的基因又稱外源 DNA 65 攜帶外源 DNA，實現外源 DNA無性繁殖或表達有意義的 蛋白質所采用的一些 DNA分子。 常用載體： 質粒 噬菌體 DNA 病毒 DNA 質粒 （ 1）雙鏈環(huán)狀 DNA，細菌染色體外 （ 2） 2 3kb 或 數百 kb （ 3）獨立自主復制，穩(wěn)定遺傳 （ 4）遺傳標志 (五 ) 基因載體 （克隆載體） 66 三、重組 DNA技術 的原理 與基本過程 * 1. 獲取目的基因 2. 選擇、構建基因載體 3. 目的基因與載體連接，形成重組分子 4. 重組分子導入受體細胞 5. 篩選、擴增 6. 表達目的基因 67 + 載體 目的基因 重組 DNA分子 細菌 轉化或轉染 擴增 篩選 68 （ 1） 化學合成 （ 4） PCR （ 2） 基因組 DNA文庫 （ 3） cDNA文庫 1. 獲取目的基因 69 組織或細胞染色體 限制性內切酶 多個 DNA片段 載體 多種轉化子 （基因文庫） 重組 DNA 導入宿主細胞 mRNA 逆轉錄 cDNA cDNA文庫 70 聚合酶鏈式反應 （ PCR） 在有特定模板、特異 DNA引物及合成 DNA所需要的dNTP存在時，向 DNA合成體系內加入耐熱的 DNA聚合酶（ 如 Taq DNA聚合酶 * ），經反復變性、退火及延伸的多個循環(huán)反應，生成特異 DNA產物的過程。 71 變性： 解開模板雙鏈 DNA 95 ℃ 退火： 使引物與單鏈模板 DNA結合 55 ℃ 延伸： DNA鏈的合成 72 ℃ 72 2. 克隆載體的選擇與構建 目的基因不能自我復制 3. 目的基因與載體連接（ DNA連接酶 * ） 重組 DNA 4. 重組 DNA導入受體菌 安全菌 感受態(tài) 導入方式：轉化 轉染 感染 73 5. 重組體的篩選 （ 1）直接選擇法 抗藥性標志選擇 ampr tetr kanr 標志補救 α互補 分子雜交 （ 2）非直接選擇法 常用免疫學方法 特異性強、靈敏度高 74 6. 克隆基因的表達 常見表達體系： （ 1）原核 —— 大腸桿菌（簡單、迅速、經濟） 缺點：無轉錄后加工 —— 適于表達 cDNA 無翻譯后加工 —— 無糖基化修飾 包涵體 （ 2）真核 —— 酵母、昆蟲細胞、哺乳類動物細胞 表達有生物活性的蛋白質 75 四、 重組 DNA技術 的應用 1. 疾病基因的發(fā)現 鐮刀形紅細胞貧血 脆性 X綜合征 (FMRI基因沉默 ) 2. 生物制藥 利用 基因工程 技術生產有 藥用價值 的蛋白質、多肽產品已成為當今世界上的一項 重大產業(yè) 。如生產干擾素、胰島素、細胞因子等。 76 3. DNA診斷 DNA診斷 又稱 基因診斷 ， 是利用分子生物學及分子遺傳學的技術和原理，在 DNA水平上 分析、鑒定 遺傳性疾病所涉及的基因置換、缺失或插入等突變。 4. 基因治療 所謂 基因治療 就是向功能缺陷的細胞 補充相應功能的基因 ， 以糾正或補償其基因缺陷，從而達到治療的目的。對于基因治療，人們擔心的潛在 危險之一 是可能會引起未知的遺傳效應，如腫瘤等，此外還涉及社會倫理方面的爭論。 5. 遺傳病的預防 77 本章重點 ? 基本概念 基因表達、操縱子、 DNA元件、順式作用元件、 反式作用因子（轉錄因子）、啟動子、增強子、 基因工程、限制性核酸內切酶、管家基因 ? 原核基因表達調控特點 ? 乳糖操縱子結構及作用機制 ? 基因表達調控的規(guī)律、方式、要素 78 ? PCR原理及基本過程 ? 重組 DNA技術 基本原理 ? 真核基因轉錄特點 ? 真核基因轉錄激活調節(jié) ? 真核基因結構特點 79 演講完畢，謝謝觀看！
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