12基因工程的基本操作程序_2-資料下載頁
2025-01-04 02:48本頁面
【正文】 用 Ca2+處理成感受態(tài)細(xì)胞 采用基因工程的方法培育抗蟲棉，下列導(dǎo)入目的基因的作法正確的是（ ） DNA序列，與質(zhì)粒重組，導(dǎo)入細(xì)菌，用該細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng) DNA序列，與質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精卵 DNA序列，注射到棉受精卵中 四、目的基因的檢測與鑒定 ? 檢測 : ? 是否插入目的基因 ? 是否轉(zhuǎn)錄 ? 是否翻譯 ? 鑒定 : ? 分子水平鑒定 ? 個體生物學(xué)水平鑒定 檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA上是否插入了目的基因 ① 首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組 DNA； （ 1）方法 : DNA分子雜交 （ 2）過程 : ② 將含目的基因的 DNA片段用放射性同位素等作標(biāo)記 ,以此做 探針 ； ③ 使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交 ,若顯示出雜交帶 ,表明染色體已插入染色體 DNA中。 （一）檢測 基因探針 ： 是一段帶有檢測標(biāo)記，且序列已知的，與目的基因互補的核酸序列。 基因探針通過分子雜交與目的基因結(jié)合，產(chǎn)生雜交信號，能從浩翰的基因組中把目的基因顯示出來。 DNA分子雜交示意圖 采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的 DNA分子的單鏈放在一起，如果這兩個單鏈具有互補的堿基序列，那么，互補的堿基序列就會結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。 （二）鑒定（個體生物學(xué)水平） 檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等 ① 方法 : 分 子 雜 交 方法 : 抗原 抗體雜交 ②過程 :用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的 mRNA雜交 ,若出現(xiàn)雜交帶 ,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了 mRNA。 ?目的基因的表達(dá)和檢測 基因工程的操作步驟 歸納總結(jié) 1. 獲取目的基因 q 從基因文庫 q 利用 PCR q 化學(xué)方法人工合成 2. 構(gòu)建基因表達(dá)載體 q 目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因 3. 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 q 轉(zhuǎn)化法（微生物）、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（植物）、顯微注射法（動物） 4. 目的基因的檢測與鑒定 q 檢測：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯 利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？ 有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。 尋根問底：
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