專題基因工程的基本操作程序-資料下載頁
2024-09-20 20:30本頁面
【正文】 _______、__________________三種。 (2)用上述 3種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細胞進行轉(zhuǎn)化實驗。之后將這些宿主細胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產(chǎn)物有 ________________；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產(chǎn)物有 ____________。 (3)目的基因表達時， RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點是________，其合成的產(chǎn)物是 ________。 (4)在上述實驗中，為了防止目的基因和質(zhì)粒在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應選用的酶是 ________________。 [思路點撥 ] [精講精析 ] (1)將含有目的基因的 DNA與質(zhì)粒分別用EcoRⅠ 酶切，所產(chǎn)生的黏性末端相同，用 DNA連接酶處理后，不同的片段隨機結(jié)合，可形成 3種不同的連接物：目的基因 —目的基因、目的基因 —運載體、運載體 —運載體。 (2)在上述三種產(chǎn)物中，插入目的基因的都不能在四環(huán)素培養(yǎng)基上生長，只有運載體 —運載體連接產(chǎn)物才能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長。 (3)啟動子是 RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點，可啟動轉(zhuǎn)錄過程，合成 mRNA。 (4)由圖示和題目中提供的信息可知，同時運用 EcoRⅠ 和 BamHⅠ 進行酶切可有效防止酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意 連 接。 [答案 ] (1)目的基因 —載體連接物 載體 —載體連接物 目的基因 —目的基因連接物 (2)載體 —載體連接物 目的基因 —載體連接物、載體 —載體連接物 (3)啟動子 mRNA (4)EcoRⅠ 和 BamHⅠ (1)切割目的基因和運載體時并非只能用一種酶，但無論用幾種酶，一般都用相同種類的酶切割目的基因和運載體。 (2)啟動子 ≠起始密碼，終止子 ≠終止密碼。 啟動子和終止子位于基因結(jié)構(gòu)的非編碼區(qū)，起始密碼和終止密碼位于 mRNA上。 [例 3] 農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物，能在自然條件下感染植物，因而在植物基因工程中得到了廣泛的運用。下面是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的示意圖，試回答下列問題： (4)植物基因工程中將目的基因?qū)胧荏w細胞的方法除了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法之外，還可采取的方法是 _______。 (至少寫出兩種 ) [思路點撥 ] [精講精析 ] (1)一般農(nóng)桿菌不能感染的植物是單子葉植物，可感染雙子葉植物和裸子植物，利用其感染性，可實現(xiàn)將目的基因?qū)胫参锛毎?。這里需要特別明確的是真正可轉(zhuǎn)移到受體細胞并整合到受體細胞的染色體上的是農(nóng)桿菌質(zhì)粒上的 TDNA片段，因此目的基因必須插入到該部位才能導入成功。 (2)根據(jù) TDNA這一轉(zhuǎn)移特點，可以推測出 DNA片段上能控制合成 DNA連接酶、限制酶才能實現(xiàn)與雙子葉植物細胞染色體DNA的整合。 (3)植物細胞受傷后可產(chǎn)生酚類化合物，促進農(nóng)桿菌向植物細胞轉(zhuǎn)移。 (4)植物基因工程中將目的基因?qū)胧荏w細胞的方法除了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法之外，還有基因槍法和花粉管通道法。 [答案 ] (1)單子葉植物 將目的基因?qū)氲街参锛毎? 染色體 DNA TDNA片段 (內(nèi)部 ) (2)DNA連接酶、限制酶 (3)酚 (4)基因槍法、花粉管通道法
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