12基因工程的基本操作程序1-資料下載頁
2025-03-08 12:11本頁面
【正文】 植物 動物 微生物 受體細(xì)胞 導(dǎo)入方法 受精卵 體細(xì)胞 受精卵 細(xì)胞 /個體 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 顯微注 射技術(shù) 用 Ca2+處理成感受態(tài)細(xì)胞 歸納： 四、目的基因的檢測與鑒定 ? 分子檢測 : ? 是否插入目的基因 ? 是否轉(zhuǎn)錄 ? 是否翻譯 ? 鑒定 : ? 個體生物學(xué)水平鑒定 檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA上是否插入了目的基因 ① 首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組 DNA； （ 1）方法 : DNA分子雜交 （ DNADNA) （ 2）過程 : ② 將含目的基因的 DNA片段用放射性同位素等作標(biāo)記 ,以此做 探針 ； ③ 使探針和 基因組 DNA雜交 ,若顯示出雜交帶 ,表明目的基因已插入染色體 DNA中。 （一）檢測 檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) ①方法 : 分 子 雜 交 (mRNADNA) ① 方法 : 抗原 抗體雜交 ②過程 : 用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的 mRNA雜交 ,若出現(xiàn)雜交帶 ,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了 mRNA。 ②過程 : 從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用 相應(yīng)的抗體 進(jìn)行 抗原 抗體雜交，若出現(xiàn)雜交帶 ,表明目的基因已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品。 若不能表達(dá)，要對抗蟲基因再進(jìn)行 修飾 。 怎樣檢驗(yàn)抗蟲基因在棉細(xì)胞內(nèi)是否表達(dá)呢？ 沒有抗蟲基因 的棉植株 有抗蟲基因的棉植株 棉鈴蟲 蟲沒有死 蟲被殺死 沒有表達(dá) 目的基因表達(dá) （二）鑒定（個體生物學(xué)水平） 抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等 類型 步驟 檢測內(nèi)容 方法 結(jié)果顯示 分子檢測 第一步 是否成功顯示出雜交帶 第二步 是否成功顯示出雜交帶 第三步 是否成功顯示出雜交帶 個體水平鑒定 包括抗蟲、抗病的 接種實(shí)驗(yàn) ，以確定是否有抗性以及抗性的程度； 基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的活性比較，以確定功能是否相同等。 ?目的基因的表達(dá)和檢測 轉(zhuǎn)基因生物的 DNA上是否插入目的基因 DNA分子雜交 （ DNA和 DNA之間） 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出 mRNA 分子雜交技術(shù) （ DNA和 mRNA之間） 目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì) 抗原 — 抗體雜交 歸納 : 基因工程的基本操作程序 1. 獲取目的基因 ? 從基因文庫 ? 利用 PCR ? 化學(xué)方法人工合成 2. 構(gòu)建基因表達(dá)載體 ? 目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因 3. 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ? Ca2+處理 （微生物）、 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 （植物）、 顯微注射法 （動物） 4. 目的基因的檢測與鑒定 ? 檢測：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯 ? 個體生物學(xué)水平的鑒定 演講完畢，謝謝觀看！
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