微生物工程第2章發(fā)酵菌種選育-資料下載頁(yè)
2024-12-28 15:41本頁(yè)面
【正文】 基因組，可以建立起若干富集技術(shù)。富集可以促進(jìn)抗性的產(chǎn)生并維持下來(lái)。 ? 土樣中細(xì)菌的富集：適度稀釋后，取 添加及未添加富集底物 (如幾丁質(zhì)、纖維素等 )的土浸出汁平板。 ? 植物體上細(xì)菌的分離：無(wú)菌富集，加植物浸出液適度培養(yǎng)取樣，洗滌，取 1ml經(jīng)適度稀釋后涂布平板。 ? 水中細(xì)菌的分離：水樣通過(guò) 無(wú)菌濾膜，取出濾膜用 1ml無(wú)菌稀釋液將濾膜上的沉積洗下。用樣本稀釋液適度稀釋 ,涂布平板倒臵培養(yǎng)或?yàn)V紙壓印分離法。 水中細(xì)菌分離的簡(jiǎn)易富集技術(shù) ? 在無(wú)菌的 、 用棉團(tuán)塞好的廣口三角燒瓶中連續(xù)培養(yǎng) ， 定期取樣涂布適宜分離瓊脂平板上； ? 在不同水體的水樣中加入一定的底物如蔗糖 、 多糖及蛋白質(zhì)等 ， 同樣可以促進(jìn)水中微生物的增殖 。 ? 培養(yǎng)過(guò)程中可加入低濃度的抗真菌劑以抑制真菌的生長(zhǎng) 。 ? 另一富集方法是在培養(yǎng)燒瓶中添加細(xì)菌 “ 附著材料 ” ， 如無(wú)菌的植物組織或土壤浸出液 。 ? 通過(guò)改變培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)周期可選擇性富集嗜冷性細(xì)菌 、 中溫菌和嗜高溫菌 。 次代培養(yǎng)及純化步驟 涂布的平板經(jīng)培養(yǎng)后 ， 如生長(zhǎng)出菌落 ， 則按涂布不同稀釋度的稀釋液所得的單菌菌落和多菌菌落對(duì)瓊脂平板進(jìn)行分類 。 用無(wú)菌牙簽將菌落轉(zhuǎn)接到篩選平板上及轉(zhuǎn)接至添加有少量天然浸出液的適宜保藏瓊脂斜面上 。 篩選平板經(jīng)培養(yǎng)后 ， 按生長(zhǎng)出菌落的形態(tài)學(xué)特征如色素 、 菌落形態(tài)等進(jìn)行最初分組 。 將認(rèn)為有希望的菌落用牙簽轉(zhuǎn)接到另一模擬分離瓊脂平板上進(jìn)行篩選 。 二、放線菌的分離 ? (一 )采樣及采集方法 ? 應(yīng)盡可能實(shí)行無(wú)菌操作。 ? 所采集的樣本應(yīng)具有一定的代表性 。 ? 樣本采集完后 ， 應(yīng)及時(shí)處理或在 4℃ 下貯存 ，貯存試樣處應(yīng)與劃線 ， 篩選平板分開(kāi) ， 貯存時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng) 。 放線菌的分離 (實(shí)驗(yàn)已經(jīng)進(jìn)行 ) ? 土樣中放線菌的非選擇性分離：土樣風(fēng)干，磨碎，無(wú)菌海綿壓印土樣后壓印平板后培養(yǎng)。 ? 植物體上放線菌的分離：無(wú)菌取植物組織，干燥以減少細(xì)菌數(shù)量，剪碎植物材料后植入平板表層后培養(yǎng)。也可洗下微生物后振蕩培養(yǎng)。 ? 水中放線菌的分離： 為使所要分離的放線菌的數(shù)量種類增多，一般將水樣離心或?yàn)V紙過(guò)濾，取離心沉積或?yàn)V紙表面沉積進(jìn)行系列稀釋和涂布。 次代培養(yǎng)及純化 ? 菌落形成后可根據(jù)肉眼可見(jiàn)的菌落形態(tài)上的差異 ，作初步的鑒定和區(qū)分 。 ? 通過(guò)高倍放大進(jìn)行鏡檢 ， 可了解氣生和營(yíng)養(yǎng)孢子形成情況 。 ? 成功地分離出各種不同的放線菌屬及種的關(guān)鍵是所采集樣本的本身及其分離用的瓊脂培養(yǎng)基；而肉眼識(shí)別不同的生長(zhǎng)形態(tài) 、 從而初步地加以鑒定 ，在分離放線菌時(shí)顯得尤為重要 。 ? 將分離平板上所形成的菌落用經(jīng)火焰灼燒滅菌的鉤形針或無(wú)菌牙簽挑取 ， 點(diǎn)接到瓊脂平板上進(jìn)行影印培養(yǎng) ， 以進(jìn)一步篩選和分離 。 三 、真菌分離 利用低碳／氮比的培養(yǎng)基可使真菌生長(zhǎng)菌落分散 ， 利于計(jì)數(shù) ， 分離和鑒定 。 這里主要是利用營(yíng)養(yǎng)成分的減少而使生長(zhǎng)減慢 ， 并由此限制真菌的遷涉生長(zhǎng) 。 改變培養(yǎng)溫度將有利于不同嗜溫區(qū)真菌的分離 。 有時(shí) ， 真菌子實(shí)體形成必須有光線 ， 這在分離培養(yǎng)時(shí)應(yīng)加以考慮 。 選擇性富集：是通過(guò)一定的方式使樣本中一種或一群微生物數(shù)量上的增加而利于分離的一種技術(shù)。 富集可以是種水平的，如通過(guò)營(yíng)養(yǎng)要求的改變來(lái)富集分離鐮刀菌；也可以是組成群水平的，如以纖維素為唯一碳源的選擇性培養(yǎng)基可選擇性富集所有能降解纖維素的纖維素裂解微生物。 選擇性抑制培養(yǎng)基可使非目標(biāo)微生物消除或減少到一定程度。在分離培養(yǎng)基中加入一定的抗生素即可有效地抑制細(xì)菌生長(zhǎng)及菌落形成。 真菌的分離方法 ? 土中真菌的分離 ：稀釋法 ， 混入法 ， 壓貼法 ，粘附法 ， 浮選法 ， 注射器采集法 ， 土過(guò)篩法 ，庶糖密度梯度離心法 。 ? 植物材料中真菌的分離 ：植入法 ， 壓貼法 ， 洗滌法 ， 浸泡法 ,組織分離 。 ? 水中真菌的分離 ：水樣稀釋后涂布分離 。 餌誘技術(shù)常用于水中真菌的富集 。 ? 子 實(shí)體直接分離培養(yǎng)擔(dān)子菌 ：新采集的子實(shí)體組織植入平板內(nèi)或在放于液體培養(yǎng)基表面放一小塊無(wú)菌濾紙上培養(yǎng) 。 四、生產(chǎn)選種 ? 是在長(zhǎng)年累月的生產(chǎn)實(shí)踐中 ， 在培養(yǎng)工藝條件沒(méi)有任何可見(jiàn)變更情況下 ， 突然發(fā)現(xiàn)某些批次生產(chǎn)水平提高較大 ， 這就有可能是個(gè)別自然變異朝更好的方向變的細(xì)胞 ， 在這種條件下很適應(yīng)于培養(yǎng)條件 ， 并逐漸顯示出它的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì) ， 這種優(yōu)勢(shì)的發(fā)展 ， 促使它優(yōu)良的生產(chǎn)性能表露 。 進(jìn)行類似新種篩選分離 ， 達(dá)到獲得新的優(yōu)良生產(chǎn)菌種的目的 。 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH
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