微生物工程第2章發(fā)酵菌種選育(存儲(chǔ)版)
【正文】 采用各種篩選方法 ，快速 、 準(zhǔn)確地把所需要的菌種挑選出來(lái) 。 這些特性包括形態(tài) 、 培養(yǎng)特征 、 營(yíng)養(yǎng)要求 、 生理生化特性 、 發(fā)酵周期 、 產(chǎn)品品種和產(chǎn)量 、 耐受最高溫度 、 生長(zhǎng)和發(fā)酵最適溫度 、 最適 pH值 、 提取工藝等 。 ? 3 、 為了使土樣中微生物的數(shù)量和類型盡少變化 ，宜將樣品逐步分批寄回 ， 以便及時(shí)分離 。如將涂石蠟的棒臵于培養(yǎng)基中，可分離到諾卡氏菌。純種分離的方法有劃線分離法 、 稀釋分離法 等等 。 選擇、調(diào)取單菌落，轉(zhuǎn)管保存 初篩（以出發(fā)菌種為對(duì)照） 選出高產(chǎn)突變株，并留種保存 復(fù)篩（以出發(fā)菌種為對(duì)照） 根據(jù)情況進(jìn)行第二、第三 …復(fù)篩 選出高產(chǎn)突變株，并留種保存 選出高產(chǎn)突變株，并留種保存 高產(chǎn)菌株的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 菌種特性考察 小發(fā)酵罐試驗(yàn) 放大實(shí)驗(yàn)、中試考查 高產(chǎn)菌種培養(yǎng)條件的優(yōu)化實(shí)驗(yàn) 大罐試驗(yàn) 生產(chǎn) 誘變育種應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題 （ 1）、出發(fā)菌株的選擇 （ 2）、復(fù)合誘變劑的使用 （ 3）、誘變劑的劑量 （ 4）、突變株的篩選 （ 5）、高產(chǎn)突變株培養(yǎng)條件的優(yōu)化 常用物理、化學(xué)誘變劑： （ 1）、 紫外線 （ 2）、快中子 （ 3）、高頻電子流 （ 4）、 CO60 （ 5）、亞硝酸 （ 6）、氮芥 （ 7）、亞硝基胍 （三）、合理誘變育種 根據(jù)微生物的代謝調(diào)節(jié)機(jī)理來(lái)選擇一定類型的微生物突變株，以獲得高產(chǎn)菌株。 （ 1）、選育組成型菌株 （ 2）、選育抗反饋調(diào)節(jié)的突變株 （ 3）、選育營(yíng)養(yǎng)缺陷型 （ 4）、選育負(fù)變菌株的回復(fù)突變株 ? （ 5）、選育條件抗性突變株 （ 6）、選育細(xì)胞膜透性改變的突變株 （ 7）、選育抗生素抗性突變株 （四）、原生質(zhì)體融合技術(shù) 也稱細(xì)胞融合技術(shù)，指將一個(gè)細(xì)胞與另一個(gè)細(xì)胞融合為一體，使一個(gè)細(xì)胞的遺傳物質(zhì)（包括核 DNA和核外基因）進(jìn)入另一個(gè)細(xì)胞。 ②阻斷支路代謝，增加有效組份含量 阿維菌素 B組分向 A組分的轉(zhuǎn)化是由 aveD 基因編碼的 C5O甲基化酶催化的。 ? 樣本采集時(shí)所需的工具通常有無(wú)菌刮鏟 、 土樣采集器 、 鑷子 、 解剖刀 、 手套 、 無(wú)菌小塑料袋和塑料瓶等 。 ? 采集植物根及根系時(shí) ， 方法與根際土樣采集方法相似 。 所有水樣都應(yīng)在 24h之內(nèi)迅速進(jìn)行檢測(cè) ， 或者 4℃ 下貯存 。用樣本稀釋液適度稀釋 ,涂布平板倒臵培養(yǎng)或?yàn)V紙壓印分離法。 將認(rèn)為有希望的菌落用牙簽轉(zhuǎn)接到另一模擬分離瓊脂平板上進(jìn)行篩選 。 次代培養(yǎng)及純化 ? 菌落形成后可根據(jù)肉眼可見的菌落形態(tài)上的差異 ，作初步的鑒定和區(qū)分 。 選擇性富集：是通過(guò)一定的方式使樣本中一種或一群微生物數(shù)量上的增加而利于分離的一種技術(shù)。 ? 子 實(shí)體直接分離培養(yǎng)擔(dān)子菌 ：新采集的子實(shí)體組織植入平板內(nèi)或在放于液體培養(yǎng)基表面放一小塊無(wú)菌濾紙上培養(yǎng) 。 ? 水中真菌的分離 ：水樣稀釋后涂布分離 。 改變培養(yǎng)溫度將有利于不同嗜溫區(qū)真菌的分離 。也可洗下微生物后振蕩培養(yǎng)。 用無(wú)菌牙簽將菌落轉(zhuǎn)接到篩選平板上及轉(zhuǎn)接至添加有少量天然浸出液的適宜保藏瓊脂斜面上 。 ? 植物體上細(xì)菌的分離：無(wú)菌富集，加植物浸出液適度培養(yǎng)取樣，洗滌，取 1ml經(jīng)適度稀釋后涂布平板。 采集瓶從水中取出時(shí)應(yīng)迅速并帶有較大的弧度 。 2．植物體采集方法 ? 在采集葉面時(shí) ， 一般是用滅菌的剪刀 、 打孔器 、安全刀片等 ， 由幾片新鮮葉片的同一部位切取一小塊 ， 并注意不要損傷周圍邊緣 。 三、菌種退化 （一）、退化的原因 （二）、防止退化的措施 菌種退化： 菌種的一個(gè)或多個(gè)特性，隨時(shí)間的推移逐步減退或消失的現(xiàn)象，一般常指菌株的生活力、產(chǎn)孢能力衰退和目的產(chǎn)物產(chǎn)量的下降。 人胰島素由A、 B二條鏈組成， A是 21個(gè)氨基酸，B鏈?zhǔn)?30個(gè)氨基酸，由 2個(gè) 2S鍵相連。 酶活性的調(diào)節(jié)： 對(duì)已經(jīng)存在酶的活性進(jìn)行調(diào)節(jié)，分為激活和抑制。 評(píng)價(jià) （二）、常規(guī)誘變育種 利用物理、化學(xué)等誘變劑，使微生物發(fā)生突變而進(jìn)行菌種選育的過(guò)程。 因此還必須分離 ， 純化 。 （四）、分離、篩選方案的設(shè)計(jì) 篩選模型 加選擇壓力 誘餌法、富集培養(yǎng) 反應(yīng)特性 隨機(jī)分離 篩選模型 例如 : 在抗生素的篩選過(guò)程中，為避免致病菌的感染與擴(kuò)散，一般不采用致病菌為試驗(yàn)的指示菌，盡可能選擇非致病菌而又能代表致病菌的其它微生物作為試驗(yàn)的指示菌，
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