基因工程：第十章外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化-資料下載頁
2025-09-30 17:31本頁面
【正文】 everse osmosis RO） 透析（ Dialysis DS） 分成 下列幾類： 超濾（ Uitrfiltration UF） 微濾（ Microfitration MF） 電滲析 （ Electrodialysis EI） 膜分離的基本原理 透析（ Dialysis DS） 膜分離的主要類型 透析過程 使用一種只透過溶劑而不透過溶質(zhì)的膜，一般稱為理 當(dāng)把溶劑和溶液（或把兩種不同濃度的溶液）分別置于此兩側(cè) 想的半透膜 時，純?nèi)軇⒆匀淮┻^半透膜而自發(fā)地向溶液（或從低濃度向高濃 度）一側(cè)流動，這種現(xiàn)象叫 滲透 膜分離的基本原理 反滲透 （ Reverse osmosis RO） 膜分離的主要類型 反滲透 其主要原理是在高于溶液滲透壓的作用下，使其它物質(zhì) 溶解鹽類、膠體、微生物、熱源、有機物等，因而主要用于海水、 不能透過半透膜，而將這些物質(zhì)與水分離開來，有效地去除水中的 苦咸水淡化和產(chǎn)純水制備等方面 膜分離的基本原理 超濾（ Uitrfiltration UF） 膜分離的主要類型 超濾 是一種 根據(jù)高分子溶質(zhì)之間或高分子與小分子溶質(zhì)之間相 相應(yīng)的截留分子量范圍從 500到 100萬左右。 對分子質(zhì)量的差別進(jìn)行分離的方法。篩分孔徑范圍 1 nm mm， 分離膜的基本性能 分離膜是膜分離技術(shù)的核心，分離膜的性能主要包括 分離透過 性、耐酸堿性、抗氧化性、抗微生物降解性、親水性、疏水性、電 性能和 化學(xué)物理 性能兩部分。其中，化學(xué)物理性能主要涉及到耐熱 性能、毒性、機械強度等。 膜的化學(xué)物理性能 分離膜的基本性能 微濾膜 14 mm 反滲透膜 mm 超濾膜 mm 納米過濾膜 平均孔徑 2 nm 膜的分類 按膜的孔徑大小分類： 分離膜的基本性能 對稱性膜 膜截面上的孔道結(jié)構(gòu)均勻 不對稱性膜 由表面活性層（超薄層）和惰性層（支撐層）構(gòu)成 膜的分類 按膜的結(jié)構(gòu)分類： 傳質(zhì)阻力大，透過通量低，易污染、難清洗 傳質(zhì)阻力小，透過通量高，被廣泛使用 分離膜的基本性能 天然高分子膜 醋酸纖維素、硝酸纖維素、再生纖維素 合成聚合物膜 聚砜、聚酰胺、聚烯、含氟聚合物 膜的分類 按膜的材料分類： 無機材料膜 陶瓷、微孔玻璃、不銹鋼、碳素 將膜固定在合適的支撐物上即構(gòu)成膜組件，商品化的膜組件有： 管式 、 板式 、 螺旋圈式 、 中空纖維 （毛細(xì)管） 影響膜分離的因素 影響膜分離效率的主要因素是膜的污染，其表現(xiàn)形式是： 溶質(zhì)在膜孔內(nèi)吸附 造成膜污染的主要原因是： 蛋白質(zhì)在不同 pH條件下所帶電荷對膜電荷的相互作用 無機鹽通過形成復(fù)合物、改變?nèi)芤弘x子強度等機制污染膜 溶質(zhì)在膜表面沉淀或結(jié)晶 膜分離過程中體系的粘度增大會污染膜 F 原核生物表達(dá)的重組蛋白質(zhì)量檢測 10 外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化 工業(yè)化生產(chǎn)的重組蛋白必須經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制才能成為產(chǎn)品。 重組蛋白的質(zhì)量控制指標(biāo)包括： 重組蛋白的鑒別（序列） 重組蛋白的純度（雜質(zhì)的類型） 重組蛋白的活性（檢測方法） 重組蛋白的安全性 重組蛋白的穩(wěn)定性 重組蛋白的一致性（構(gòu)象與構(gòu)型） 原核細(xì)菌表達(dá)的重組蛋白產(chǎn)物的質(zhì)量檢測項目與方法 檢測項目 檢測方法 產(chǎn)品是否含內(nèi)毒素 家兔熱原法 蛋白質(zhì)是否變異 肽譜、 HPLC、 等電聚焦、毛細(xì)管電泳 甲硫氨酸是否被甲?；? 肽譜、質(zhì)譜、 HPLC、 Edman分析 蛋白質(zhì)是否變性、聚合、脫氨基 SDSPAGE、 凝膠層析、等電聚焦、質(zhì) 配體是否脫落 SDSPAGE、 免疫分析 氨基酸是否發(fā)生取代 氨基酸分析、肽譜、質(zhì)譜、毛細(xì)管電泳 產(chǎn)品是否被細(xì)菌、病毒、支原體等污染 微生物學(xué)檢測 譜、 HPLC、 毛細(xì)管電泳、 Edman分析 D 親和層析 10 外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化 C 凝膠層析 B 離子交換層析 A 重組蛋白分離純化方法選擇的基本原則 F 原核生物表達(dá)的重組蛋白質(zhì)量檢測 E 膜分離
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