基因工程原理?xiàng)罴tfinal-資料下載頁(yè)
2025-09-11 20:44本頁(yè)面
【正文】 cDNA,是以 mRNA為模板 ,逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNA的第一條鏈 ,然后用 PCR技術(shù)擴(kuò)增出從某個(gè)特定為點(diǎn)到 3‘和 5’端之間的未知核苷酸序列 ,對(duì)應(yīng)成為3‘RACE和 5’RACE. Oligo(dT)n 錨定引物 4. 不對(duì)稱(chēng) PCR (asymmetric PCR) 5. 長(zhǎng)程 PCR(long and accurated PCR, LA PCR) 6. 逆轉(zhuǎn)錄 PCR(RTPCR) 7. Alu PCR 三、利用差式分析法分離目的基因克隆 1. mRNA 差別顯示技術(shù)（ DDPCR） mRNA 差別顯示技術(shù)的原理和基本程序 ２ . 代表性差別分析技術(shù) （１） 傳統(tǒng)的減法雜交技術(shù) ——從表達(dá)目的基因的組織中提取 mRNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，與無(wú)目的基因表達(dá)的組織中提取的 mRNA雜交形成 cDNAmRNA雙鏈分子，通過(guò)層析去掉雜交分子后，留下的單鏈 cDNA中含有目的基因。 逆轉(zhuǎn)錄 無(wú)目的基因表達(dá)的組織中提取的 mRNA 表達(dá)目的基因組織中提取的 mRNA （ ２ ） 基因組 DNA的代表性差別分析技術(shù) 檢測(cè) DNA 驅(qū)趕 DNA 檢測(cè) DNA 驅(qū)趕 DNA （３） cDNA RDA ３． 抑制性減法雜交技術(shù)（ SSH） 四、 DNA插入誘變分離目的基因 1. 轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法 ２ . TDNA標(biāo)簽法 五、 應(yīng)用基因定位克隆技術(shù)分離篩選目的基因 1. 基因定位克隆的基本步驟 ２ . 染色體步查法分離目的基因（ chromosome walking） 六、 標(biāo)簽測(cè)序法分離目的基因 1. 表達(dá)序列標(biāo)簽法（ EST） 是指基因序列中一段能特異地標(biāo)記或表征基因的序列，通常它含有足夠的結(jié)構(gòu)信息以顯示出該基因與其它基因的差異，長(zhǎng)度為 100500bp。 ２ . 基因表達(dá)序列分析法（ SAGE） ：（ 1）從轉(zhuǎn)錄物某一特定位置上分離得到一段 910kb的寡核苷酸引物，該引物含有確定一個(gè)獨(dú)特轉(zhuǎn)錄物的足夠信息，可以代表此轉(zhuǎn)錄物的特異性；（ 2）多個(gè)序列標(biāo)簽?zāi)芤藻^定酶識(shí)別為點(diǎn)序列相隔連成雙標(biāo)簽序列的多聯(lián)體。 生物素 oligo(dT) 七、基因的酶法合成 第四節(jié)基因的突變與修飾 一、隨機(jī)誘變 1. 盒式誘變（ cassette mutagenesis） 2. 化學(xué)誘變 ３ . 易錯(cuò) PCR誘變（ errorprone PCR） Taq DNA聚合酶 提高 MgCl2濃度 化學(xué)誘變劑：亞硝酸、羥氨、肼、甲酸、亞硫酸氫鹽 ４ . 嵌套缺失誘變 二、定位誘變 １ . PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)誘變 （１） 重疊延伸 PCR法（ overlap extension PCR, OE PCR） （ 2） 大引物 PCR法（ mega primer PCR） （ 3） 快速定點(diǎn)突變法 ２ . 寡核苷酸介導(dǎo)的誘變 三、 DNA改組技術(shù) １． DNA改組技術(shù)（ DNA shuffling）的基本原理 2． DNA改組技術(shù)的發(fā)展
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