【正文】 肽負(fù)載ＤＣ疫苗 ? 提取腫瘤細(xì)胞的裂解物或提純腫瘤抗原， 將提取物與 ＤＣ 共同培育， 在此過(guò)程中有效抗原即被 ＤＣ 攝取呈遞， 用這種已致敏的 ＤＣ 疫苗進(jìn)行接種， 可誘導(dǎo)出特異性較強(qiáng)的免疫應(yīng)答。 ? Ｙｕ 等用惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞裂解物致敏 ＤＣ， 用該疫苗免疫惡性膠質(zhì)瘤患者后， 在體內(nèi)誘導(dǎo)了特異性的細(xì)胞毒性 Ｔ 淋巴細(xì)胞反應(yīng)。 ? Ｌｉｕ等將癌胚抗原肽負(fù)載 ＤＣ， 用該疫苗治療晚期結(jié)腸癌， 在患者體內(nèi)檢測(cè)到癌胚抗原特異的 Ｔ 細(xì)胞反應(yīng)。 (3)腫瘤基因?qū)耄模靡呙? ? 通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、重組腺病毒或腫瘤 ＲＮＡ 電穿孔等基因工程技術(shù)將編碼腫瘤特異性抗原的基因?qū)? ＤＣ， 再免疫機(jī)體。 ? 該類(lèi)疫苗的特點(diǎn)是導(dǎo)入的基因在體內(nèi)能夠長(zhǎng)期表達(dá)腫瘤靶抗原， 并不斷被ＤＣ 呈遞， 能有效打破免疫耐受， 維持一個(gè)較為穩(wěn)定的免疫保護(hù)狀態(tài)， 是當(dāng)今較為推崇的一種改良 ＤＣ 疫苗。 ? Ｍｏｒｓｅ 等將編碼癌胚抗原和協(xié)同共刺激分子的基因?qū)? ＤＣ， 用該疫苗免疫機(jī)體治療結(jié)直腸癌， 誘導(dǎo)了有效的抗腫瘤免疫。 其他腫瘤疫苗 ? 顆粒性肽－ＤＮＡ 復(fù)合疫苗 ? 超抗原疫苗 ? 抗獨(dú)特型抗體疫苗 A,顆粒性肽－ＤＮＡ 復(fù)合疫苗 ? 將多肽疫苗和基因疫苗進(jìn)行綜合， 設(shè)計(jì)出新型顆粒性肽－ＤＮＡ 復(fù)合疫苗。它可有效激發(fā)抗原特異性 Ｔ 細(xì)胞反應(yīng)， 對(duì)腫瘤細(xì)胞具有特異性殺傷作用。 ? 同時(shí)， 這種肽－ＤＮＡ 的復(fù)合成分在引發(fā)抗瘤免疫反應(yīng)的過(guò)程中具有協(xié)同效應(yīng)。 B,超抗原疫苗 ? 超抗原是近年發(fā)現(xiàn)并研究證實(shí)在惡性腫瘤治療方面具有良好應(yīng)用前景的免疫分子。它無(wú)需ＡＰＣ加工即可與ＭＨＣ分子結(jié)合，激活所有攜帶特殊Ｔ細(xì)胞受體片段的Ｔ細(xì)胞， 激活Ｔ細(xì)胞的克隆數(shù)大約是普通抗原的 1000 倍 ,對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)烈的殺傷作用。 ? 目前研究較多的超抗原主要是金黃色葡萄球菌腸毒素 ａ C,抗獨(dú)特型抗體疫苗 ? 腫瘤抗原的抗獨(dú)特型抗體具有模擬腫瘤抗原及免疫調(diào)節(jié)的雙重作用， 稱(chēng)為抗原的內(nèi)影像型， 能有效克服腫瘤的免疫逃避。 ? 抗抗獨(dú)特型抗體在不用任何載體蛋白及佐劑的協(xié)助下就能引發(fā)特異性的抗瘤免疫應(yīng)答， 若將其與 ＧＭ－ＣＳＦ 等細(xì)胞因子或 ＤＣ 耦聯(lián)， 則誘發(fā)的免疫效應(yīng)更強(qiáng)。 腫瘤疫苗前景 ? 由于腫瘤發(fā)生發(fā)展的復(fù)雜性和多樣性， 腫瘤疫苗的理論研究與實(shí)際應(yīng)用目前仍存在一定差距。但不管如何， 其設(shè)計(jì)理念與研究成果已顯示出強(qiáng)大的生命力， 有望在抑制腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)等方面取得突破。 ? 在提高腫瘤疫苗效能的研究中，增強(qiáng)疫苗的免疫原性、克服腫瘤的免疫逃避、誘導(dǎo)靶向的細(xì)胞免疫將成為核心問(wèn)題。 五、 DNA疫苗 DNA疫苗的概念 ? 又稱(chēng)基因疫苗或核酸疫苗 ? 是一種細(xì)菌的質(zhì)粒，在克隆了特異性的基因以后，能在真核細(xì)胞中表達(dá)蛋白質(zhì)抗原， 刺激機(jī)體產(chǎn)生特異的體液 和細(xì)胞免疫反應(yīng)，尤其是 能誘導(dǎo)產(chǎn)生具細(xì)胞毒殺傷性功能的 T淋巴細(xì)胞 ，對(duì)病毒、細(xì)胞內(nèi)寄生的細(xì)菌和寄生蟲(chóng)所引起的傳染病可能具有治療性效果和重要的預(yù)防作用。 DNA疫苗的發(fā)現(xiàn) ? 追溯到 20世紀(jì) 90年代的初期，當(dāng)時(shí)有一些從事基因治療的科學(xué)家們用可在體內(nèi)表達(dá)基因產(chǎn)物的核酸來(lái)做基因治療的試驗(yàn) ? 兩個(gè)令人欣喜的結(jié)果 : ? 流感 DNA疫苗在小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示的對(duì)不同型別毒株攻擊的交叉免疫保護(hù)作用使得有希望解決流感疫苗長(zhǎng)期以來(lái)面臨的因?yàn)榱餍兄瓯砻婵乖儺惗挂呙鐭o(wú)效的被動(dòng)局面。 ? 乙型肝炎 DNA疫苗可以刺激動(dòng)物的免疫系統(tǒng)而產(chǎn)生抗乙型肝炎表面抗原的特異性抗體，但更重要的是 DNA疫苗能夠消除轉(zhuǎn)基因動(dòng)物體內(nèi)的乙型肝炎表面抗原門(mén)。 DNA疫苗的作用機(jī)理 DNA疫苗能像病毒的活疫苗一樣，進(jìn)入宿主細(xì)胞的細(xì)胞核中轉(zhuǎn)錄為信使 RNA，再在細(xì)胞漿中翻譯成蛋白質(zhì)。其中一部分蛋白質(zhì)在降解后與 MHC的 Ⅰ 類(lèi)分子結(jié)合；而另一部分蛋白質(zhì)也可以分泌出去，再像外源蛋白質(zhì)一樣被 APC攝取后，在吞噬溶酶體中降解成的多肽和 MHC的 Ⅱ 類(lèi)分子結(jié)合 (圖 )。所以 DNA疫苗既能誘導(dǎo)細(xì)胞免疫，又能刺激產(chǎn)生體液免疫。 DNA疫苗誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的原理 (1)肌細(xì)胞的直接參與 ? 攝取了 DNA的肌細(xì)胞可直接對(duì)表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原進(jìn)行加工、處理和呈遞。 DNA疫苗在肌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)蛋白質(zhì)抗原，然后被細(xì)胞內(nèi)的水解酶降解成 812個(gè)氨基酸的短肽，它們和 MHC的 Ⅰ 類(lèi)分子結(jié)合，并呈遞到細(xì)胞表面被 CD8 T細(xì)胞的受體識(shí)別而誘發(fā)免疫反應(yīng)。 ? 以樹(shù)突狀細(xì)胞為主的抗原呈遞細(xì)胞，即采源于骨髓的 APC也可被DNA轉(zhuǎn)染。 DNA疫苗在 APC中表達(dá)抗原，蛋白質(zhì)被水解酶降解成多肽后與 MHC的 Ⅰ 類(lèi)分子結(jié)合，再呈遞給 CD8 T細(xì)胞而導(dǎo)致體內(nèi)CTL的免疫應(yīng)答。 ? 另外，肌細(xì)胞在攝取 DNA以后， DNA疫苗的基因在質(zhì)粒所攜帶的強(qiáng)啟動(dòng)子的作用下，在肌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)相應(yīng)的蛋白質(zhì)抗原。此時(shí)的肌細(xì)胞不能自己加工處理抗原，而是將蛋白質(zhì)抗原釋放出去，然后被來(lái)源于骨髓的 APC捕捉和攝取。 DNA疫苗誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的原理 (2)以樹(shù)突狀細(xì)胞為主的抗原呈遞細(xì)胞 ? 都能攝取 DNA ，并能對(duì)表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原進(jìn)行加工和處理，降解后的多肽與 MHC的 Ⅰ 類(lèi)分子結(jié)合，并呈遞給 CD8 T細(xì)胞而產(chǎn)生 CTL的免疫應(yīng)答。 DNA疫苗誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的原理 (3)肌細(xì)胞和 APC共同參與 DNA疫苗在 APC內(nèi)表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原可以有 3種形式： ? 分泌型、細(xì)胞膜結(jié)合型和胞內(nèi)型。 ? 表達(dá)分泌型蛋白質(zhì)抗原的 DNA疫苗誘導(dǎo)體液免疫反應(yīng)的能力最強(qiáng)；而表達(dá)胞內(nèi)型蛋白質(zhì)抗原的 DNA疫苗誘導(dǎo) CTL反應(yīng)的能力最強(qiáng)。 ? 最近的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，在初次接種 DNA疫苗的基礎(chǔ)上，如果加強(qiáng)接種的仍然是在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的特異性抗原，那么 CTL的反應(yīng)強(qiáng)度可提高 10～ 30倍；但是如果加強(qiáng)接種的是完整的可溶性蛋白質(zhì)抗原，那么產(chǎn)生的免疫反應(yīng)將是以抗體為主的體液免疫反應(yīng)。 DNA疫苗的載體 ? 本質(zhì)上是一種細(xì)菌的質(zhì)粒，含有多重限制性?xún)?nèi)切酶的位點(diǎn) ? 真核細(xì)胞啟動(dòng)子 ? CpG核苷酸基序 ? 用于選擇的標(biāo)記 ? 載體的復(fù)制基因 基因槍轟擊 ? 即將 DNA分子包裹在金顆粒外面，然后在高壓槍的作用下對(duì)皮膚進(jìn)行轟擊，金顆?？蓪NA分子帶人真皮層組織而誘導(dǎo)出和肌肉注射相當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)。 ? 優(yōu)點(diǎn)是 DNA的劑量很小，只需要 lμg的 DNA，即肌肉注射劑量的 1％。 ? 體液免疫反應(yīng)。 DNA疫苗的安全性考慮 ? DNA分子會(huì)不會(huì)整合到染色體中引起基因突變而誘發(fā)腫瘤； ? DNA疫苗會(huì)不會(huì)導(dǎo)致新生機(jī)體的免疫耐受性 ? 由 DNA引發(fā)的自身免疫病。 DNA疫苗的研究發(fā)展方向 ? DNA疫苗本身的構(gòu)建 :基因的密碼子 ,加速抗原的降解 ? 免疫調(diào)節(jié)因子 ? DNA疫苗的接種方案和途徑 ? 初次免疫和加強(qiáng)免疫的有效匹配