【正文】 (Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白 )能與 PS高親和力特異性結(jié)合。將 AnnexinV進行熒光素（ FITC、 RPE）或 biotin標記，以標記了的 AnnexinV作為熒光探針，利用流式細胞儀、熒光顯微鏡以及共聚焦激光掃描顯微鏡檢測細胞凋亡的發(fā)生。l 細胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)改變的檢測：l CLONTECH公司的 ApoAlertTMGlutathioneDetectionKit通過熒光染料 monochlorobimane（ MCB）體外檢測凋亡細胞 細胞質(zhì)中谷光苷肽的減少 來檢測凋亡早期細胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)的變化。87l 細胞色素 C的定位檢測： 通過 Western雜交用細胞色素 C抗體和 COX4抗體標示細胞色素 C和COX4的存在位置，從而判斷凋亡的發(fā)生。l 線粒體膜電位變化的檢測：l 端粒酶檢測： l mRNA水平的檢測：l 蛋白印跡法 :檢測細胞凋亡的相關蛋白分析 :如caspase、 Fas家族蛋白等 .l :88p 細胞凋亡檢測技術存在的問題細胞凋亡檢測技術存在的問題l （ 1）細胞凋亡的判斷標準 :目前 ,檢測細胞凋亡的許多方法的結(jié)果判斷標準不一。形態(tài)學檢查是其他各種檢測方法的基礎 ,任何方法的檢查結(jié)果必須結(jié)合形態(tài)學檢查來判斷。梯帶狀圖像并不必然與細胞凋亡相關 。TUNEL法在壞死細胞群中也可出現(xiàn)陽性細胞。89l （ 2）細胞凋亡檢測結(jié)果分析 :在一個檢測體系中檢出了發(fā)生凋亡的細胞,生理性還是病理性，需進行致病因素的相關性分析 .p 細胞凋亡檢測技術存在的問題細胞凋亡檢測技術存在的問題90p 細胞凋亡檢測技術存在的問題細胞凋亡檢測技術存在的問題l （ 3）細胞凋亡的定量分析：定量分析包括 2個方面 ,一是群體細胞凋亡的定量 ,二是細胞凋亡程度的定量。目前 ,流式細胞儀常用作群體細胞凋亡的定量分析 ,但在檢測中的漏檢率和錯檢率都很高。 TUNEL法雖可進行群體定量 ,但工作量大 ,同時易出現(xiàn)壞死細胞的假陽性。91展 望92☆☆ 現(xiàn)代生命科學的發(fā)展動態(tài)現(xiàn)代生命科學的發(fā)展動態(tài) 細胞生物學細胞生物學 與與 分子生物學分子生物學 (包括分子遺傳學與生包括分子遺傳學與生物化學物化學 ) 相互滲透與交融是總的發(fā)展趨勢。相互滲透與交融是總的發(fā)展趨勢。 　 （細胞凋亡研究所處的地位）（細胞凋亡研究所處的地位）93生命科學的研究從宏觀上可以分為生命科學的研究從宏觀上可以分為 三個層次三個層次：：　　　　　核心層次　　　核心層次 （包括分子生物學和細胞生物學學科）（包括分子生物學和細胞生物學學科） 　　　　　　　個體生物學層次　　　個體生物學層次 （對多個物種及種群的結(jié)構(gòu)及功能研究）（對多個物種及種群的結(jié)構(gòu)及功能研究）　　　生物圈層次　　　生物圈層次 ?！　　o論是對細胞結(jié)構(gòu)和功能的深入研究，還是對細　　　無論是對細胞結(jié)構(gòu)和功能的深入研究，還是對細胞重大生命活動規(guī)律的探索，都需要用分子生物學的胞重大生命活動規(guī)律的探索，都需要用分子生物學的新概念與新方法，在分子水平上進行研究，換句話說新概念與新方法，在分子水平上進行研究，換句話說， 細胞分子生物學細胞分子生物學 或或 分子細胞生物學分子細胞生物學 將是今后相當一將是今后相當一段時間的主流。段時間的主流。94l 2022年 《 美國科學院院報 》 （ PNAS）的一篇文章中，通過數(shù)學方法，對科學雜志的引用關系進行了分析，對當前的 88個研究領域進行了排序。l 分子與細胞生物學分子與細胞生物學 當之無愧成為 最大熱門。9596對細胞生命活動的研究成為當今生命科學發(fā)展的瓶頸對細胞生命活動的研究成為當今生命科學發(fā)展的瓶頸細胞生命活動細胞生命活動突變體分析突變體分析 突變體分析突變體分析 蛋白修飾分析蛋白修飾分析基因表達基因表達 多肽定性分析多肽定性分析生物信息學生物信息學序列測定序列測定雙向電泳分析雙向電泳分析DNA分離與克隆分離與克隆 機器人技術機器人技術 (robotics) 功能基因組學功能基因組學蛋白質(zhì)分離與制備蛋白質(zhì)分離與制備 蛋白質(zhì)組學蛋白質(zhì)組學9798重點研究領域：重點研究領域：l　　 染色體染色體 DNA與蛋白質(zhì)相互作用關系與蛋白質(zhì)相互作用關系 　　　 — 主要是非組蛋白對基因組的作用l　 細胞增殖、分化、凋亡的相互關系及其調(diào)控細胞增殖、分化、凋亡的相互關系及其調(diào)控 　　　 　 細胞增殖、分化、凋亡與衰老是細胞最重要的生命活動現(xiàn)象，它們既相互聯(lián)系又相互制約并受到一系列基因的調(diào)控。一切動植物的生長發(fā)育都是依靠細胞增殖、分化與凋亡來實現(xiàn)的。l　 細胞信號轉(zhuǎn)導的研究細胞信號轉(zhuǎn)導的研究 包括細胞間信號傳遞、受體與信號跨膜傳導、細胞內(nèi)信號傳遞途徑l　 細胞結(jié)構(gòu)體系的組裝細胞結(jié)構(gòu)體系的組裝 生物大分子如何逐級裝配并最終形成生物賴以進行生命活動的細胞結(jié)構(gòu)體系的問題 99l 美國科學情報研究所（ ISI） 1997年以來 SCI（Science Citation Index）收錄及引用論文檢索，全世界自然科學研究中論文發(fā)表最集中的幾個領域分別是：l ?細胞信號轉(zhuǎn)導 （ signal transduction）；l ?細胞凋亡 （ cell apoptosis）；l ?基因組與后基因組學研究 （ genome and postgenomic analysis）。100?Apoptosis is a multistep, multipathway celldeath programme that is inherent in every cell of the body. ?Apoptosis can be initiated either through the deathreceptor or the mitochondrial pathway. Caspases that cleave cellular substrates leading to characteristic biochemical and morphological changes are activated in both pathways. The apoptotic process is tightly controlled by various proteins. ?Immune cells (T cells amp。 natural killer cells) can kill tumour cells using the granule exocytosis pathway or the deathreceptor pathway. ?Cancer treatment by chemotherapy and irradiation kills target cells primarily by inducing apoptosis. Therefore, modulation of the key elements of apoptosis signalling directly influences therapyinduced tumourcell death. Summary101102