固定化酶和固定化細(xì)胞-資料下載頁(yè)
2025-08-11 12:03本頁(yè)面
【正文】 固定化酶、游離酶和細(xì)胞以及小分子產(chǎn)物與大分子底物。 Company Logo 循環(huán)式反應(yīng)器， RCR 外循環(huán)反應(yīng)器 內(nèi)循環(huán)反應(yīng)器 循環(huán)操作仍能為底物與酶提供足夠的接觸機(jī)會(huì)，以達(dá)到所需的轉(zhuǎn)化率。這種反應(yīng)器可用于難溶或者不溶性底物的轉(zhuǎn)化反應(yīng)。 Company Logo 酶反應(yīng)器的選擇依據(jù) ?根據(jù)固定化酶的形狀： ? 溶液酶： BSTR ? 顆粒狀和片狀： CSTR、 PBR ? 膜狀和纖維狀： PBR ? 容易變形、易粘結(jié)、顆粒細(xì)?。?FBR ?根據(jù)底物的物理性質(zhì) ? 溶解性和濁液性底物：任何類(lèi)型 ? 顆粒狀和膠狀底物： CSTR、 FBR、 RCR Company Logo ?根據(jù)酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特性 ? 產(chǎn)物對(duì)酶活性抑制： PBR ? 底物對(duì)酶活性抑制： CSTR ?根據(jù)外界環(huán)境對(duì)酶的穩(wěn)定性的影響 ? 改良的 CSTR ?根據(jù)操作要求及反應(yīng)器費(fèi)用 ? CSTR Company LOGO 固定化細(xì)胞法生產(chǎn) 6氨基青霉烷酸 Company Logo 基本原理 ?青霉素 G經(jīng)青霉素?；缸饔?，水解除去側(cè)鏈后的產(chǎn)物稱(chēng)為 6氨基青霉烷酸，也稱(chēng)無(wú)側(cè)鏈青霉素。 6APA結(jié)構(gòu)式 Company Logo 工藝路線(xiàn) 大腸桿菌的培養(yǎng) 大腸桿菌固定化 固定化大腸桿菌反應(yīng)堆制備 轉(zhuǎn)化反應(yīng) 6氨基青霉烷酸的提取 Company Logo 工藝要點(diǎn) ?大腸桿菌的培養(yǎng) ?菌種：大腸桿菌 D816 ?斜面培養(yǎng)基：普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基 ?發(fā)酵培養(yǎng)基：蛋白胨、氯化鈉、苯乙酸、自來(lái)水 ?發(fā)酵條件：通氣攪拌培養(yǎng)， 28℃ ， Company Logo ?大腸桿菌固定化 ? 取濕菌體 100 kg，置于 40℃ 反應(yīng)罐中，在攪拌下加入50L10%戊二醛 5 升，在轉(zhuǎn)移至搪瓷盤(pán)中，使之成為 35 cm厚的液層，室溫放置 2 小時(shí)，再轉(zhuǎn)移至 4 ℃ 冷庫(kù)過(guò)夜 ，待形成固體凝膠后，通過(guò)粉碎和過(guò)篩，使其成為直徑為 2 mm左右的顆粒狀固定化大腸桿菌細(xì)胞，用蒸餾水以 ，抽干，備用。 Company Logo ?固定化大腸桿菌反應(yīng)堆制備 ?將上述充分洗滌后的固定化大腸桿菌細(xì)胞裝填于帶保溫夾套的 填充式反應(yīng)器 中，即成為固定化大腸桿菌反應(yīng)堆，反應(yīng)器規(guī)格為直徑 70 160 cm。 Company Logo ?轉(zhuǎn)化反應(yīng) ?取 20 kg青霉素 G鉀鹽 ，加入到 1000L配料罐中，用 mol/L、 的磷酸緩沖液溶解并使 青霉素 G鉀鹽濃度為3%，用 2 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào) pH 至 ，然后將反應(yīng)器及 pH 調(diào)節(jié)罐中反應(yīng)液溫度到 0℃ ，維持反應(yīng)體系的酸度在 范圍內(nèi)，以 70L/min流速使青霉素 G鉀鹽溶液通過(guò)固定化大腸桿菌反應(yīng)堆進(jìn)行循環(huán)轉(zhuǎn)化，直至轉(zhuǎn)化液酸度不變?yōu)橹埂?循環(huán)時(shí)間 一般為 34h，反應(yīng)結(jié)束后，放出轉(zhuǎn)化液，再進(jìn)入下一批反應(yīng)。 Company Logo ?6氨基青霉烷酸的提取 ? 上述轉(zhuǎn)化液經(jīng)過(guò)濾澄清后，濾液用薄膜濃縮器 減壓濃縮 至100 L左右，冷卻至室溫后，于 250L攪拌罐中加 50L醋酸丁酯 充分?jǐn)嚢杼崛?1015min，取下層水相，加 1%活性炭于 70℃ 攪拌脫色 30min，濾除活性炭，濾液用 6mol/L HCl調(diào) pH至 4 左右， 5℃ 放置 結(jié)晶過(guò)夜 ，次日濾取結(jié)晶，用少量冷水洗滌，抽干， 115℃ 烘 23h得成品 6氨基青霉烷酸，收率為 7080%。
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