【正文】 注。 校正因子的測定需要用到特定雜質(zhì)及主成分的標準物質(zhì)，這些標準物質(zhì)應具備量值準確的特點，符合標準物質(zhì)（對照品）的相關要求；其次，確定校正因子的分析方法應與最終確定的質(zhì)量標準方法一致，色譜條件等需經(jīng)篩選優(yōu)化后確定，如有變更，需考慮對校正因子的影響，必要時重新確定；第三，要關注影響待測物UV吸收的各種因素，如溶液制備所用溶劑最好與最終確定的流動相相同，檢測波長最好在特定雜質(zhì)及主成分UV曲線的峰或谷處，避開吸收值急劇變化波段，以保證測定方法具有較好的耐用性，并保持測定結(jié)果的恒定。 一般情況下，校正因子可視具體情況通過如下幾種方法確定： （1）單濃度點測定：制備適當濃度的特定雜質(zhì)對照品溶液和主成分對照品溶液，分別進樣測定，照上式計算，得到校正因子。 （2）多濃度點測定：制備適當?shù)母摺⒅?、低三水平濃度的特定雜質(zhì)對照品溶液和主成分對照品溶液（涵蓋定量限、標準限度），分別進樣測定，照上式計算各校正因子，計算RSD，求平均值，得到校正因子。 （3）標準曲線法測定：精密稱取雜質(zhì)對照品和主成分對照品，分別制備系列溶液（涵蓋定量限、標準限度），分別進樣后，按最小二乘法以進樣量對響應值（峰面積等）進行線性回歸，求得兩條標準曲線，兩曲線斜率之比即為校正因子。 （4）吸收系數(shù)比值法：對于UV檢測器來講，兩物質(zhì)的相對校正因子實際上也是兩物質(zhì)以流動相為溶劑，在檢測波長處的紫外吸收系數(shù)E1cm1%之比，故可按吸收系數(shù)法測定法的相關技術要求測定各自吸收系數(shù)，如對照品級別的標準物質(zhì)、高中低三水平濃度測定、～、至少5臺不同型號的UV分光光度計、2份供試液同時平行制備測定、同臺儀器2份供試液的平行測定結(jié)果不超過177。%等。測定兩物質(zhì)的吸收系數(shù)后，經(jīng)統(tǒng)計分析確定兩物質(zhì)吸收系數(shù)，計算比值，求得校正因子。 根據(jù)雜質(zhì)研究相關技術指導原則，為確保雜質(zhì)測定結(jié)果的準確可靠，一般情況下，～，直接采用不加校正因子的自身對照法定量；超出該范圍，如采用主成分自身對照法的定量方式，須用校正因子進行校正，即“加校正因子的主成分自身對照法”以保證雜質(zhì)定量的準確性；～，表明雜質(zhì)與主成分的UV吸收相差過大，校正因子的作用會受到顯著影響，此時應改變檢測波長等檢測條件，使校正因子位于上述范圍內(nèi)，或使用結(jié)構(gòu)或UV吸收與該雜質(zhì)接近的另一標準物質(zhì)為參照物質(zhì)（如對照品易于獲得、標準已采用對照品外標法定量的另一特定雜質(zhì)），重新確立校正因子；如校正因子仍無法調(diào)節(jié)至適當范圍，需考慮采用雜質(zhì)對照品外標法等適當?shù)碾s質(zhì)方式定量。 校正因子的應用同吸收系數(shù)的使用類似，需要具備一定的前提條件，比如相同的檢測波長、分析方法、色譜條件等。需要注意的是，雜質(zhì)的保留時間差別較大時，峰形及峰面積會有較大差別，對校正因子的校準作用也會產(chǎn)生明顯影響，因此色譜峰的保留時間要相對恒定，質(zhì)量標準需要對相關特定雜質(zhì)的色譜峰規(guī)定相對保留時間的限定。 在目前的申報資料中，校正因子的研究和使用中存在一些需要關注的問題。主要表現(xiàn)在如下幾個方面： （1）特定雜質(zhì)直接采用主成分自身對照法定量，沒有進行校正因子的研究以及測定結(jié)果校正前后的數(shù)據(jù)對比，無法判斷定量方式的合理性和測定結(jié)果的準確性。 （2）測定的校正因子超過指導原則中不需校正的范圍，仍直接采用不加校正因子的主成分自身對照法。如某藥物中雜質(zhì)I、II、但質(zhì)量標準仍采用不加校正因子的主成分自身對照法測定包括上述三個雜質(zhì)的各種雜質(zhì)。 （3）測得的校正因子不能有效校正測定結(jié)果，在沒有充分的數(shù)據(jù)支持的情況下，仍采用加校正因子的主成分自身對照法。，該數(shù)值校正能否準確定量雜質(zhì)，沒有相應研究工作的論證和對比檢測數(shù)據(jù)的支持顯然是不夠的。關于強制降解試驗中物料平衡的問題首先，主成分峰降解強度為10％左右，不超過10％。有雜質(zhì)對照品時，計算出校正因子，將校正因子代入計算。做主峰的峰純度檢查（DAD、MS），二極管陣列檢測的作用不僅是峰純度檢查，另外，還反映出雜質(zhì)及主藥的總體紫外吸收情況，可以計算在不同波長處的物料平衡情況（按具體品種而定）。計算方法：具體做法：建議取一定量的樣品溶解，作為母液，分別從母液中取一定量進行多個因素的降解試驗，再與此母液做的正常樣（減小誤差）對照，通過與正常樣的總分面積對比。峰純度檢查歸一化比較光譜：分別取色譜峰的前沿、峰頂和峰尾處的光譜圖進行比較， 如果色譜峰是純凈物形成的， 那么在色譜峰各點所得的光譜僅在振幅響應上有差別， 用歸一化方法， 所得的紫外一可見光譜應完全一致， 用匹配因子來衡量， 其值應接近于。若在色譜峰的不同部位得到的吸收光譜中， 吸收最大值或最小值發(fā)生了位移， 則證明該色譜峰中有雜質(zhì)存在。要使雜質(zhì)含量低于， 則純度匹配因子應在以上。這種鑒定方法的靈敏度主要取決于物質(zhì)和雜質(zhì)的光譜區(qū)別、相對吸收度及保留時間的差別。最近等人漢通過直接計算吸收光譜對之間的相關系數(shù)，有效地鑒定了多吠的重疊峰。吸收比法：對于任何在紫外一可見光區(qū)有吸收的純物質(zhì)在兩個選定波長下的吸收比為一常數(shù)，且與濃度無關。在組分的洗脫過程中，吸收比應恒定。以這一比值對分析時間作圖，純物質(zhì)應是恒定值的方波形。雜質(zhì)存在將使其產(chǎn)生扭曲。比值圖不僅可以用于估計峰純度，而且還可確定峰種類。吸收比法的可靠性依賴于波長的選擇及吸收值的差別，波長應盡量選擇在具有最大吸收差別處。光譜抑制法：簡稱光譜抑制法是吸收比法的進一步發(fā)展， 本法測定二波長的信號差△A對分析時間t作圖得到差示色譜，純物質(zhì)應為零信號，雜質(zhì)則將產(chǎn)生非零偏差。應用光譜抑制法，至少要知道一個洗脫組分的光譜， 而且光譜差異要大。MS分析：對產(chǎn)生的碎片離子峰進行對比，便很清晰的知道峰的純度。注：前三種方法采用的DAD檢測器，根據(jù)DAD得到時間—波長—吸光度三維圖譜的原理。現(xiàn)場確認1 時間鏈原料，對照品采購發(fā)票時間2 物料平衡樣品生產(chǎn)記錄、研究消耗用量，剩余量對照品購買量，每次研究的消耗量3電子圖譜參考2008年下發(fā)的《化學藥品研究資料及圖譜真實性問題判定標準》用Excel核對每一張圖譜的進樣時間，保密相片機上拍照時間4儀器使用記錄注意色譜工作站LOG里的記錄，天平稱量記錄5對照品存取記錄6穩(wěn)定性樣品存取記錄10