【正文】 (2)引入顯色基團生成有色化合物：如農藥經酸、堿水解產生酚類或芳胺，可與偶氮試劑進行偶合形成有色化合物，偶氮試劑則稱為顯色劑。 1． 含氯農藥的顏色反應 (1)吡啶 — 堿顯色反應 (Fujiwara反應 ) 含鹵素農藥在堿性溶液中，與吡啶短時間加熱，至少有兩個鹵原子和一個碳原子成鍵，產生紅色或藍色。 如 DDT與含有呫啐酚的吡啶溶液及氫氧化鉀加熱生成紅色?？稍?510 nm處測定光密度。 三氯殺螨醇在堿性條件下，水解產生氯仿，氯仿在堿 — 吡啶作用下生成紅色，可在 535nm處測光密度。氯丹可以產生紫色 (404nm)，毒殺芬可產生黃色 (400 nm)，七氯、克菌丹、敵敵畏等都有此反應，反應過程中，含有水或乙醇對顏色形成有干擾。 (2)硝化 — 甲醇鈉法；含氯芳香族農藥，經硝化后加甲醇鈉，形成四硝基衍生物，經分子重排變?yōu)轷剑仕{色。如對位 DDT、對位 DDD及三氯殺螨醇形成藍色 (598nm)；DDE， DDA形成紅色（ 420nm），鄰位 DDT形成紫色(590－ 511nm)。 六六六需加堿水解成 l， 2， 4三氯代苯再經硝化與甲醇鈉反應形成 6氯 2， 4二硝基間苯二酚，呈黃色，可在 415nm處測定光密度。 6 6 6C H C l 1 2 4 2 4 6??? ????堿 硝 化乙 醇 鈉， ， 三 氯 苯 ， 二 硝 基 氯 － 間 苯 二 酚 (3)脫氯磺化顯色反應： DDT，甲氧 DDT等在 1％乙醇氫氧化鉀镕液中，脫掉一分子氯化氫，再與濃硫酸反應，即呈現顏色， DDT為桃紅色；甲氧 DDT為紫色。 (4)二苯胺 — 氯化鋅顯色反應： 狄氏劑、毒殺芬等經與二苯胺、氯化鋅混合熔融，而形成藍綠色化合物，將此化合物用丙酮或冰醋酸溶解，即可進行比色。 (5)濃硫酸與鉻變酸顯色反應； 鹵代苯氧乙酸類與濃硫酸反應產生甲醛，再與鉻變酸 (1， 8二羥萘、 3， 6二磺酸 )加熱到 150℃ 出現紫色。 2．含磷農藥的顏色反應 (1)鉬藍比色法測全磷： 含磷農藥用高氯酸及硫酸混合液，消化分解成無機磷，在酸性條件下與鉬酸銨及偏釩酸銨反應形成磷鉬雜多酸，顯黃色，在 420 nm處測定光密度。 PO33－ ＋ 12MoO42－ ＋ 3NH4＋ ＋ 24H＋ → [(NH4)3PO412MoO3]＋ 12H2O 如在鉬酸銨中加入 1氨基 — 2萘酚 — 4磺酸試劑或 SnCl2則顯藍色，在 735nm處測定光密度，所有有機磷農藥均可用此法測定全磷含量。 (2) 4－ (對硝基芐基 )吡啶 (NBP)反應： 有機磷農藥在乙醇中與 4— (對硝基芐基 )吡啶在 100℃加熱 12— 17min，冷卻后加入四乙撐戊胺丙酮液 (或嗎啉丙酮液 )30 min呈藍色，在 580 nm處測定光密度。此法可測定馬拉硫磷、樂果、倍硫磷等含硫或不含硫有機磷農藥。 (3)皂化比色法： 含硝基有機磷化合物，堿解后，產生對硝基苯酚化合物，呈黃色，可在 420－ 480nm波長范圍內測光密度。如對硫磷、甲基對硫磷、殺螟松均可用此法測定。 (4)與氯化鈀反應： 含硫磷酸酯類在酸性條件下與氯化鈀反應形成黃色或褐色螯合物。二硫代磷酸酯形成 1∶ 1螯合物，一硫代形成1∶ 2螯合物。 (5)形成銅鹽絡合物： 二硫代磷酸酯類，在堿性條件下，水解成二烷基二硫代磷酸，與銅離子在四氯化碳溶液中反應，呈黃綠色，在 420 nm下測定光密度。如馬拉硫磷、甲拌磷、乙硫磷、亞胺硫磷等均有此反應。但樂果無此反應，因樂果堿解后生成硫代磷酸和硫醇： 3．氨基甲酸酯類 氨基甲酸酯類農藥經堿解后形成酚類與偶氮試劑反應形成重氮鹽而顯色。 甲萘威、克百威等經堿解后生成 α萘酚，與對硝基苯偶氮氟硼酸的甲醇溶液反應，呈黃色，在 590 nm處測光密度或加入對硝基氯化重氮苯在酸性條件下呈黃褐色。 速滅威等經堿解后生成苯酚類，在弱酸下與對硝基氯化重氮苯反應呈黃色。如在堿性條件下，則形成亮紅色染料可在 490 nm處測定光密度。 4．其它 (1)酚類的顏色反應：酚類化合物在微堿性溶液中與 4－氨替比林及氧化劑的作用下，形成紅色，在 510－ 520nm處測光密度。 具有鹵素、羧基、甲氧基等取代的酚類均有上述反應，五氯酚常用此法定量。 (2)福美雙的顏色反應：福美雙在酸性溶液中為 與 Cu 2＋ 定量絡合成銅的絡合物，在 430 nm處測定光密度 。 NCSSH3CH3C (三 )紫外光譜定量分析 農藥的有效成分在紫外區(qū) (200一 400nm)大多有特征吸收，一些吸收不明顯的農藥，也可以通過適當的化學處理轉化成有吸收特征的物質，再加以分析。 1． 一些農藥的紫外光譜 (1)有機氯農藥 (2)苯醚類農藥 (3)苯酯類農藥： 表 6－ 14 一些有機磷酸酯農藥的最大吸收波長 名 稱 λmax（ nm） 硝基苯 260 三對位硝基苯磷酸酯 264 乙基二對位硝基苯磷酸酯 267 對氧磷 268 對硫磷 274 嘧啶 243 二嗪磷 (4)苯胺類農藥 (5)均二嗪類農藥： 表 6－ 16 一些三嗪類農藥的最大吸收波長 名 稱 λmax（ nm） 莠去通 220 西瑪通 220 樸滅通 220 西瑪津 222 莠去津 222 樸滅津 223 草達津 228 (6)吡啶類化合物： (7)其它：含唑類及咪唑類農藥大多有很好的吸收峰，如三環(huán)唑、三唑酮、多菌靈等都可用紫外光譜法進行定量測定。 2．測定方法 (1)標準對照法 ：在同樣條件下配制標準溶液及試樣溶液，在所選波長處分別測量吸光度，根據吸光度與濃度成正比的關系，用下式求出樣品濃度。 式中： A—— 吸光度； C—— 濃度。 (2)吸光系數法：用標準品在最大吸收波長處的吸光系數 ? 值為依據，進行定量測定。將標準品分別在已核正過的不同型號分光光度計上進行多次測定，計算出吸光系數 ?作為標準，然后與樣品的實驗值比較 . A A C C標 樣 標 樣＝ (3)標準曲線祛；根據光的吸收定律，當液層厚度及入射光的波長不變，在一定濃度范圍內吸光度與溶液的濃度成正比。因此，配制一系列標準溶液、將測得的吸光度 A為縱坐標，標準溶液的濃度 C為橫坐標，可繪制出 A— C關系圖。如果符合比爾定律，則成為一條直線，稱為標準曲線，如圖 6— 15所示。在相同條件下，測量樣品溶液的吸光度，可以在標準曲線上查出相應的濃度。 (4)最小二乘法：最小二乘法是根據光的吸收定律具有線性函數的特性， A＝ ac＋ b。配制若干不同濃度的標準溶液，測定出一系列相應的吸光系數，用最小二乘法處理，求出系數 a和 b，以求其最佳值，這樣得到的吸光系數比較可靠。目前帶有微機的分光光度計可以通過設置二個或多個濃度的標準溶液，根據最小二乘法校正系統，自動求出校正系數 a及 b，可以進行準確的定量分析。 (5)示差分光光度法：示差分光光度法是用一個與待測組分濃度相近的標準溶液作參比溶液與未知試樣溶液相比較測量其吸光度，再從測得的吸光度值，求出未知濃度。利用示差分光光度法可以使相對誤差減小到千分之幾，所以又稱精密分析法，常應用于微量分析。示差分光光度法對儀器的靈敏度和穩(wěn)定性要求較高，需用較高級的分光光度計，一般比色計不能測定。