【正文】 (2)引入顯色基團(tuán)生成有色化合物：如農(nóng)藥經(jīng)酸、堿水解產(chǎn)生酚類或芳胺，可與偶氮試劑進(jìn)行偶合形成有色化合物，偶氮試劑則稱為顯色劑。 1． 含氯農(nóng)藥的顏色反應(yīng) (1)吡啶 — 堿顯色反應(yīng) (Fujiwara反應(yīng) ) 含鹵素農(nóng)藥在堿性溶液中，與吡啶短時間加熱，至少有兩個鹵原子和一個碳原子成鍵，產(chǎn)生紅色或藍(lán)色。 如 DDT與含有呫啐酚的吡啶溶液及氫氧化鉀加熱生成紅色。可在 510 nm處測定光密度。 三氯殺螨醇在堿性條件下，水解產(chǎn)生氯仿，氯仿在堿 — 吡啶作用下生成紅色，可在 535nm處測光密度。氯丹可以產(chǎn)生紫色 (404nm)，毒殺芬可產(chǎn)生黃色 (400 nm)，七氯、克菌丹、敵敵畏等都有此反應(yīng)，反應(yīng)過程中，含有水或乙醇對顏色形成有干擾。 (2)硝化 — 甲醇鈉法；含氯芳香族農(nóng)藥，經(jīng)硝化后加甲醇鈉，形成四硝基衍生物，經(jīng)分子重排變?yōu)轷?，呈藍(lán)色。如對位 DDT、對位 DDD及三氯殺螨醇形成藍(lán)色 (598nm)；DDE， DDA形成紅色（ 420nm），鄰位 DDT形成紫色(590－ 511nm)。 六六六需加堿水解成 l， 2， 4三氯代苯再經(jīng)硝化與甲醇鈉反應(yīng)形成 6氯 2， 4二硝基間苯二酚，呈黃色，可在 415nm處測定光密度。 6 6 6C H C l 1 2 4 2 4 6??? ????堿 硝 化乙 醇 鈉， ， 三 氯 苯 ， 二 硝 基 氯 － 間 苯 二 酚 (3)脫氯磺化顯色反應(yīng)： DDT，甲氧 DDT等在 1％乙醇?xì)溲趸涢F液中，脫掉一分子氯化氫，再與濃硫酸反應(yīng)，即呈現(xiàn)顏色， DDT為桃紅色；甲氧 DDT為紫色。 (4)二苯胺 — 氯化鋅顯色反應(yīng)： 狄氏劑、毒殺芬等經(jīng)與二苯胺、氯化鋅混合熔融，而形成藍(lán)綠色化合物，將此化合物用丙酮或冰醋酸溶解，即可進(jìn)行比色。 (5)濃硫酸與鉻變酸顯色反應(yīng)； 鹵代苯氧乙酸類與濃硫酸反應(yīng)產(chǎn)生甲醛，再與鉻變酸 (1， 8二羥萘、 3， 6二磺酸 )加熱到 150℃ 出現(xiàn)紫色。 2．含磷農(nóng)藥的顏色反應(yīng) (1)鉬藍(lán)比色法測全磷： 含磷農(nóng)藥用高氯酸及硫酸混合液，消化分解成無機(jī)磷，在酸性條件下與鉬酸銨及偏釩酸銨反應(yīng)形成磷鉬雜多酸，顯黃色，在 420 nm處測定光密度。 PO33－ ＋ 12MoO42－ ＋ 3NH4＋ ＋ 24H＋ → [(NH4)3PO412MoO3]＋ 12H2O 如在鉬酸銨中加入 1氨基 — 2萘酚 — 4磺酸試劑或 SnCl2則顯藍(lán)色，在 735nm處測定光密度，所有有機(jī)磷農(nóng)藥均可用此法測定全磷含量。 (2) 4－ (對硝基芐基 )吡啶 (NBP)反應(yīng)： 有機(jī)磷農(nóng)藥在乙醇中與 4— (對硝基芐基 )吡啶在 100℃加熱 12— 17min，冷卻后加入四乙撐戊胺丙酮液 (或嗎啉丙酮液 )30 min呈藍(lán)色，在 580 nm處測定光密度。此法可測定馬拉硫磷、樂果、倍硫磷等含硫或不含硫有機(jī)磷農(nóng)藥。 (3)皂化比色法： 含硝基有機(jī)磷化合物，堿解后，產(chǎn)生對硝基苯酚化合物，呈黃色，可在 420－ 480nm波長范圍內(nèi)測光密度。如對硫磷、甲基對硫磷、殺螟松均可用此法測定。 (4)與氯化鈀反應(yīng)： 含硫磷酸酯類在酸性條件下與氯化鈀反應(yīng)形成黃色或褐色螯合物。二硫代磷酸酯形成 1∶ 1螯合物，一硫代形成1∶ 2螯合物。 (5)形成銅鹽絡(luò)合物： 二硫代磷酸酯類，在堿性條件下，水解成二烷基二硫代磷酸，與銅離子在四氯化碳溶液中反應(yīng)，呈黃綠色，在 420 nm下測定光密度。如馬拉硫磷、甲拌磷、乙硫磷、亞胺硫磷等均有此反應(yīng)。但樂果無此反應(yīng)，因樂果堿解后生成硫代磷酸和硫醇： 3．氨基甲酸酯類 氨基甲酸酯類農(nóng)藥經(jīng)堿解后形成酚類與偶氮試劑反應(yīng)形成重氮鹽而顯色。 甲萘威、克百威等經(jīng)堿解后生成 α萘酚，與對硝基苯偶氮氟硼酸的甲醇溶液反應(yīng)，呈黃色，在 590 nm處測光密度或加入對硝基氯化重氮苯在酸性條件下呈黃褐色。 速滅威等經(jīng)堿解后生成苯酚類，在弱酸下與對硝基氯化重氮苯反應(yīng)呈黃色。如在堿性條件下，則形成亮紅色染料可在 490 nm處測定光密度。 4．其它 (1)酚類的顏色反應(yīng)：酚類化合物在微堿性溶液中與 4－氨替比林及氧化劑的作用下，形成紅色，在 510－ 520nm處測光密度。 具有鹵素、羧基、甲氧基等取代的酚類均有上述反應(yīng)，五氯酚常用此法定量。 (2)福美雙的顏色反應(yīng)：福美雙在酸性溶液中為 與 Cu 2＋ 定量絡(luò)合成銅的絡(luò)合物，在 430 nm處測定光密度 。 NCSSH3CH3C (三 )紫外光譜定量分析 農(nóng)藥的有效成分在紫外區(qū) (200一 400nm)大多有特征吸收，一些吸收不明顯的農(nóng)藥，也可以通過適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)處理轉(zhuǎn)化成有吸收特征的物質(zhì)，再加以分析。 1． 一些農(nóng)藥的紫外光譜 (1)有機(jī)氯農(nóng)藥 (2)苯醚類農(nóng)藥 (3)苯酯類農(nóng)藥： 表 6－ 14 一些有機(jī)磷酸酯農(nóng)藥的最大吸收波長 名 稱 λmax（ nm） 硝基苯 260 三對位硝基苯磷酸酯 264 乙基二對位硝基苯磷酸酯 267 對氧磷 268 對硫磷 274 嘧啶 243 二嗪磷 (4)苯胺類農(nóng)藥 (5)均二嗪類農(nóng)藥： 表 6－ 16 一些三嗪類農(nóng)藥的最大吸收波長 名 稱 λmax（ nm） 莠去通 220 西瑪通 220 樸滅通 220 西瑪津 222 莠去津 222 樸滅津 223 草達(dá)津 228 (6)吡啶類化合物： (7)其它：含唑類及咪唑類農(nóng)藥大多有很好的吸收峰，如三環(huán)唑、三唑酮、多菌靈等都可用紫外光譜法進(jìn)行定量測定。 2．測定方法 (1)標(biāo)準(zhǔn)對照法 ：在同樣條件下配制標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液，在所選波長處分別測量吸光度，根據(jù)吸光度與濃度成正比的關(guān)系，用下式求出樣品濃度。 式中： A—— 吸光度； C—— 濃度。 (2)吸光系數(shù)法：用標(biāo)準(zhǔn)品在最大吸收波長處的吸光系數(shù) ? 值為依據(jù)，進(jìn)行定量測定。將標(biāo)準(zhǔn)品分別在已核正過的不同型號分光光度計上進(jìn)行多次測定，計算出吸光系數(shù) ?作為標(biāo)準(zhǔn)，然后與樣品的實驗值比較 . A A C C標(biāo) 樣 標(biāo) 樣＝ (3)標(biāo)準(zhǔn)曲線祛；根據(jù)光的吸收定律，當(dāng)液層厚度及入射光的波長不變，在一定濃度范圍內(nèi)吸光度與溶液的濃度成正比。因此，配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液、將測得的吸光度 A為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 C為橫坐標(biāo)，可繪制出 A— C關(guān)系圖。如果符合比爾定律，則成為一條直線，稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖 6— 15所示。在相同條件下，測量樣品溶液的吸光度，可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的濃度。 (4)最小二乘法：最小二乘法是根據(jù)光的吸收定律具有線性函數(shù)的特性， A＝ ac＋ b。配制若干不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定出一系列相應(yīng)的吸光系數(shù)，用最小二乘法處理，求出系數(shù) a和 b，以求其最佳值，這樣得到的吸光系數(shù)比較可靠。目前帶有微機(jī)的分光光度計可以通過設(shè)置二個或多個濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)最小二乘法校正系統(tǒng)，自動求出校正系數(shù) a及 b，可以進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析。 (5)示差分光光度法：示差分光光度法是用一個與待測組分濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液作參比溶液與未知試樣溶液相比較測量其吸光度，再從測得的吸光度值，求出未知濃度。利用示差分光光度法可以使相對誤差減小到千分之幾，所以又稱精密分析法，常應(yīng)用于微量分析。示差分光光度法對儀器的靈敏度和穩(wěn)定性要求較高，需用較高級的分光光度計，一般比色計不能測定。