【正文】 ??血清中存在豐富的Lewis物質(zhì)??在人體外可在定型時(shí)被中和??故須洗滌紅細(xì)胞方可定型。Lewis抗體在鹽水中凝集紅細(xì)胞時(shí)凝集塊易碎??取出試管不宜搖動(dòng)??以免出現(xiàn)假陰性。采用高效價(jià)單克隆抗Lea、抗Leb血清試劑定型以免遺漏血型。2??8血型物質(zhì)檢測(cè)A、B、H抗原不僅存在于人的紅細(xì)胞上??而且廣泛分布在組織及體液中??Lewis血型抗原存在亍唾液和血漿中??這些物質(zhì)稱(chēng)為血型物質(zhì)??它們?yōu)槎嗵穷?lèi)一半抗原。唾液中的血型物質(zhì)??能特異地與相應(yīng)抗體結(jié)合??從而抑制該抗體與相應(yīng)紅細(xì)胞發(fā)生凝集??因此??將待檢者唾液與抗血清混合靜置一段時(shí)間后??再加入相應(yīng)紅細(xì)胞??觀察紅細(xì)胞凝集與否??如不凝集??待檢者為分泌型??反之為非分泌型。因此??檢測(cè)唾液中各種血型物質(zhì)??可作為判定血型的一個(gè)輔助證據(jù)。(1)材料??5??A、B、O和Le(a+b)紅細(xì)胞懸液??與待檢者相同??標(biāo)化的抗A、抗B、抗H、抗Lea血清已知的分泌型和非分泌型唾液??其A、B、O型與待檢者相同燒杯或粗口試管、煮鍋等其它材料同A、B、O血型鑒定。(2)操作方法??1)唾液的留取??將自然流出的唾液5—10ml??盛入干燥清潔的容器(小燒杯、三角瓶或粗口試管等)內(nèi)??在水浴中煮沸10min(以滅活能使血型物質(zhì)不活化的唾液酶??同時(shí)也破壞常見(jiàn)存在于唾液中的抗A及抗B)。以3000r??min離心10min??留取上清液備用??棄去透明的半固態(tài)物質(zhì)。2)試劑血清修正液的制備??取小試管分成4排??每排5管??第1排分別標(biāo)明A1一A5??第2排B1B5??第3排H1H5??第4排Le a 1—Leb5。各排從第2管開(kāi)始??每管加生理鹽水O??1ml。第1—4排的第1和第2管分別加抗A、抗B、抗H、及抗Lea血清0??1ml??從第2管開(kāi)始倍量稀釋。于第4排各管分別加5??的A型、B型、O型和Le( a+b)型紅細(xì)胞鹽水懸液0??1ml。振搖試管架使之混勻??置室溫1h后??觀察結(jié)果。每排以出現(xiàn)“4+”凝集的最高稀釋度為最適稀釋度。3)唾液中血型物質(zhì)的檢測(cè)??準(zhǔn)備唾液做陽(yáng)性或陰性對(duì)照。對(duì)ABH分泌者??使用已知Se(分泌型)和Sese(非分泌型)人的唾液。對(duì)Lewis分泌者??使用Lea陽(yáng)性和Lea陰性人的唾液?？梢杂脤?duì)紅細(xì)胞試驗(yàn)的結(jié)果來(lái)選擇這些對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)該有Le( a+b)的紅細(xì)胞??陰性對(duì)照應(yīng)該有Le( ab)的紅細(xì)胞??試劑對(duì)照用生理鹽水。取4支試管??對(duì)ABH試驗(yàn)分別標(biāo)明待檢者、分泌型、非分泌型和生理鹽水。對(duì)Lewis試驗(yàn)分別標(biāo)明待檢者、Lewis陽(yáng)性、Lewis陰性和生理鹽水。按標(biāo)記分別加入最適稀釋度抗血清1滴。在相應(yīng)的試管中加入唾液1滴??在對(duì)照管中加入生理鹽水1滴?；旌虾??在室溫孵育30min??中和抗體。各加入5??洗滌并與抗體相對(duì)應(yīng)的紅細(xì)胞懸液1滴?；旌虾??置室溫孵育1h或15min后??以3000r??min離心15s??觀察結(jié)果。結(jié)果判讀??對(duì)照??分泌型不凝集??非分泌型凝集待檢者??不凝集為分泌型??凝集為非分泌型Lewis試驗(yàn)??對(duì)照??陽(yáng)性不凝集??陰性凝集待檢者??不凝集為L(zhǎng)ea陽(yáng)性??凝集者為L(zhǎng)ea陰性4)血型物質(zhì)效價(jià)測(cè)定:取小試管10支??依次編號(hào)。第2—10管分別加入生理鹽水0??1ml。第2管各加入待檢者唾液0??1ml??自第2管起作倍量稀釋??第10管為對(duì)照管。每管加相應(yīng)的經(jīng)修正過(guò)的試劑血清(待檢者為A型??則用抗A??B型用抗B??O型用抗H??AB型用抗A和抗B??Lea+用抗Lea)0、1ml?；靹蚝??置室溫(20℃)30min。每管再加入與待檢者同型的5??紅細(xì)胞懸液1滴?；旌虾??放置室溫(20℃)lh??觀察結(jié)果。結(jié)果判讀??先看對(duì)照的第10管??然后依次看1—9管??以抑制紅細(xì)胞凝集的最后一管的稀釋倍數(shù)為該唾液中血型物質(zhì)的效價(jià)。(3)注意事項(xiàng)??漱口后留取唾液??以免食物殘?jiān)烊??為增加唾液分泌??待檢者可嚼蠟、石蠟?zāi)せ蛳鹌l??但不能嚼口香糖或其它含糖或蛋白質(zhì)的食品??如果當(dāng)日試驗(yàn)用??血型物質(zhì)可置4℃冰箱保存??若暫時(shí)不用??可置低溫冰箱保存??可保留其活性幾年??每次試驗(yàn)最好備有分泌型和非分泌型唾液作對(duì)照。交叉配合試驗(yàn)3??1鹽水交叉配合試驗(yàn)(1)操作方法??【試管法】取小試管2支??主管標(biāo)明受血者血清(PS)+供血者紅細(xì)胞(DC)??次管標(biāo)明供血者血清(DS)+受血者紅細(xì)胞(PC)字樣。分離受血者和供血者血清??配置5??紅細(xì)胞懸液。于主管中加入受血者血清(PS)2滴和供血者5??紅細(xì)胞懸液(DC)2滴。亍次管中加入供血者血清(DS)2滴和受血者5??紅細(xì)胞懸液(PC)2滴??混勻??作交叉配合。以3000r??min離心15s??條件允許時(shí)??試管可置入37℃水浴30min。取出先用肉眼觀察??再以鏡檢判斷結(jié)果a??凡主測(cè)有凝集現(xiàn)象時(shí)不能輸用。b??如主測(cè)不凝集??但次測(cè)有凝集或異型輸血(指O型輸給其它型??A或B型輸給AB型時(shí))??如果供血者血清中抗體是免疫性抗體也不可輸入。c??如果是天然凝集素??其效價(jià)高凝集力強(qiáng)也最好不輸??以防破壞受血者的紅細(xì)胞。復(fù)核標(biāo)本管??填寫(xiě)檢驗(yàn)報(bào)告單及交叉配合試驗(yàn)登記?！静Ｆā?無(wú)離心機(jī)的情況下可采用)取玻片1塊??主測(cè)標(biāo)明PS+DC??次側(cè)標(biāo)明DS+PC。主側(cè)加受血者血清2滴和供血者5??紅細(xì)胞1滴。次側(cè)加供血者血清2滴和受血者5??紅細(xì)胞1滴。③分別混勻??室溫(22—25℃)放置15min。④搖動(dòng)玻片??觀察凝集結(jié)果??(2)注意事項(xiàng)??長(zhǎng)期反復(fù)多次輸血的患者??不但交叉配合困難??且易發(fā)生輸血反應(yīng)。宜選擇沒(méi)有輸用過(guò)的供血者的血液??加用酶法配血。若還有反應(yīng)??用吸收抑制試驗(yàn)、吸收放散試驗(yàn)??明確抗體后輸血??若為白細(xì)胞、血小板抗體??可試輸除去白細(xì)胞、血小板的血液。3??2低離子溶液(LISS)法交叉配合試驗(yàn)在交叉配血規(guī)程中??使用LISS有兩種方法??是直接懸浮紅細(xì)胞于LISS中??是把LISS加到血清和生理鹽水懸浮的細(xì)胞混合物中??在交叉配合過(guò)程中必須嚴(yán)格遵守LISS使用說(shuō)明??LISS‘‘懸浮’’的交叉配血步驟如下??(1)用等滲鹽水將受血者、供血者紅細(xì)胞洗滌2次。(2)用LISS將受血者、供血者紅細(xì)胞洗滌1次。(3)將上清液全部?jī)A出??再用LISS將受血者、供血者的紅細(xì)胞配成5??的懸液。(4)主管加受血者血清2滴??供血者紅細(xì)胞LISS懸液2滴。(5)次管加供血者血清2滴??受血者紅細(xì)胞LISS懸液2滴。(6)混勻??即刻離心??以3000r??min離心15s。(7)觀察結(jié)果??并檢查上清液有無(wú)溶血??松動(dòng)細(xì)胞有無(wú)凝集??記錄觀察結(jié)果。(8)置于37℃孵育15—30min??即刻離心??觀察有無(wú)凝集??記錄結(jié)果。(9)生理鹽水洗滌3次??傾掉上清液??加抗人球蛋白試劑2滴混合??離心觀察??記錄凝集結(jié)果。(10)陰性試驗(yàn)??加1滴IgG致敏的紅細(xì)胞??離心并觀察有無(wú)凝集??如果沒(méi)有凝集??重做試驗(yàn)全過(guò)程。(11)交叉配血的任何步驟中沒(méi)有溶血或凝集??則認(rèn)為交叉配血相合。3??3蛋白水解酶法交叉配合試驗(yàn)蛋白水解酶包括木瓜酶、菠蘿酶、無(wú)花果酶、胰蛋白酶等。有些不完全抗體??只能用蛋白水解酶方法才能檢測(cè)出來(lái)??因此??必要時(shí)要加用此法。(1)操作方法??取試管4支??分別標(biāo)明主、次管和陰性、陽(yáng)性對(duì)照。主管加受血者血清、供血者5??的洗滌紅細(xì)胞鹽水懸液及酶液各1滴??混合??次管加供血者血清、受血者5??的洗滌紅細(xì)胞鹽水懸液及酶液各1滴??混合。置37℃水浴中3060min后??觀察結(jié)果。以AB型血清加O型Rho(D)陽(yáng)性紅細(xì)胞作陰性對(duì)照。以抗Rho(D)試劑加O型Rho(D)陽(yáng)性紅細(xì)胞作陽(yáng)性對(duì)照。(2)結(jié)果判讀??對(duì)照??陰性無(wú)凝聚??陽(yáng)性有凝集主次管??先眼觀后鏡檢??同Rh血型鑒定酶介質(zhì)法。3??4抗人球蛋白法交叉配合試驗(yàn)(1)材料?? ??受血者與供血者血清和洗滌3次的5??紅細(xì)胞懸液?？谷饲虻鞍自噭⒖笵試劑、AB型血清洗滌3次的標(biāo)準(zhǔn)Rho(D)陽(yáng)性5??紅細(xì)胞懸液。(2)操作方法?? ??取小試管5支??分別標(biāo)明PS+DC、DS+PC、陽(yáng)性、陰性及自身對(duì)照??并按下表加入反應(yīng)物。抗人球蛋白交叉配合試驗(yàn)反應(yīng)物(滴數(shù)) PS+DC PC+DS 陽(yáng)性對(duì)照 陰性對(duì)照 自身對(duì)照受血者血清 2 — — — 2供血者血清 — 2 — — —抗D試劑 — — 2 — —AB型血清 — — — 2 —受血者5??紅細(xì)胞 — 1 — — 1供血者5??紅細(xì)胞 1 — — — —RhD陽(yáng)性5??紅細(xì)胞 — — 1 1 —將試管置于37℃水浴中致敏1h??離心棄去上清液??再用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次??末次吸干上清液??各加生理鹽水1滴。各試管加入抗人球蛋白試劑1滴?；靹蚝??以3000r??min離心15s??觀察結(jié)果。結(jié)果判讀??先看陰性、陽(yáng)性對(duì)照是否符合??再看PS+DC、PC+DS管是否凝集??無(wú)凝集的可以輸用。必要時(shí)作顯微鏡檢查。(3)注意事項(xiàng)??抗人球蛋白交叉配合試驗(yàn)用受血者血清??不用血漿。如遇受血者血清具有某種抗體時(shí)??根據(jù)抗體的特異性??選擇適合的獻(xiàn)血者。自身免疫性溶血性貧血者??有時(shí)血清中有非特異性抗體??則對(duì)供血者均可出現(xiàn)凝集??須參照自身對(duì)照管??若PS+DC管反應(yīng)較弱??受血者急需輸血??可以試輸。3??5血型鑒定和交叉配合試驗(yàn)中的假陰性和假陽(yáng)性除因工作人員將樣本弄錯(cuò)、結(jié)果誤判(未在顯微鏡下觀察結(jié)果)及報(bào)告單錯(cuò)寫(xiě)外??尚有下述幾點(diǎn)必須注意。【假陰性】??1??診斷試劑放置室溫或使用過(guò)久??凝集效價(jià)降低??以致誤將A2型定為O型??A2B型定為B型。??2??血清與紅細(xì)胞比例不當(dāng)??血清太少或紅細(xì)胞懸液過(guò)淡。??3??嚴(yán)重貧血、老人、小兒患者凝集效價(jià)較低。保存過(guò)久的紅細(xì)胞??其凝集力減弱??易致假陰性??宜用標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞將血型校對(duì)準(zhǔn)確。??4??觀察時(shí)間不夠15min。??5??當(dāng)血清中有與紅細(xì)胞相合的抗體??同時(shí)又有補(bǔ)體存在??可導(dǎo)致溶血??誤認(rèn)為不凝集??因此必須注意觀察交叉試管中的溶血現(xiàn)象。【假陽(yáng)性】??1??室內(nèi)溫度過(guò)高、過(guò)低??樣本干燥均可影響結(jié)果??室溫低于15℃以下??又易出現(xiàn)冷凝集。??2??紅細(xì)胞懸液過(guò)濃或診斷試劑被污染??出現(xiàn)全凝集現(xiàn)象??遇此情況時(shí)??須另取新鮮樣本??更換合格的診斷試劑。??3??多凝集??少數(shù)人的紅細(xì)胞??可被部分正常人的血清凝集 .但又非屬配合禁忌 .可用吸收抑制試驗(yàn)或吸收放散試驗(yàn)明確血型后 .再做交叉配合 .4??紅細(xì)胞懸液過(guò)濃或形成緡錢(qián)狀。??5??某些疾病(如球蛋白增高性疾病或慢性炎癥等)可致假陽(yáng)性。??6??胎盤(pán)血內(nèi)含有的華通膠、輸過(guò)右旋糖酐、試驗(yàn)時(shí)所用的器皿不潔??均易產(chǎn)生假陽(yáng)性??可洗滌紅細(xì)胞后配血。3??6交叉配血注意事項(xiàng) ????(1)配血方法繁簡(jiǎn)不一??各有利弊??可根據(jù)檢查抗體的性質(zhì)選擇不同的方法。(2)一般天然抗體選用鹽水介質(zhì)配血??方法簡(jiǎn)單??時(shí)間短。免疫抗體可選用木瓜酶或抗人球蛋白配血。(3)緊急用血??來(lái)不及查血型和配血??可復(fù)查庫(kù)存“O”型血的血型??確為“O”型可不配血直接發(fā)給臨床搶救用??留有時(shí)間查清病人血型交叉配血 后繼續(xù)輸血。(4)配血人員要注意臨床診斷、輸血史、妊娠史??以便判斷可能為冷凝集、假凝集、自家凝集、免疫性抗體的存在。(5)冷凝集造成的假凝集??可把配血管放入37℃水浴箱3分鐘??取出立即觀察結(jié)果。(6)假凝集可把配血混液取1滴于玻片上??并立即加1滴生理鹽水??混勻??放顯微鏡下觀察??輕度假凝集可因滴加鹽水而散開(kāi)。(7)若獻(xiàn)血者血液造成的假凝集??可用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞三次。(8)自家凝集配血較困難時(shí)??可定準(zhǔn)血型??臨床觀察輸入。(9)配血人員精力要高度集中??嚴(yán)防出現(xiàn)差錯(cuò)??配血標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)血清用完及時(shí)放入冰箱內(nèi)保存??以防細(xì)菌繁殖。抗體檢測(cè)機(jī)體因受輸血或妊娠刺激而產(chǎn)生免疫抗體??遇相應(yīng)抗原可致溶血性輸血反應(yīng)或新生兒溶血癥??以A、B、O免疫性抗體多見(jiàn)??應(yīng)引起重視。4??1完全抗體檢查法(1)材料??受檢者血清及5??紅細(xì)胞生理鹽水懸液對(duì)象(供血者或孕婦的丈夫)5??紅細(xì)胞生理鹽水懸液(2)操作方法??取小試管4支??分成2排??每排2管??分別標(biāo)明“受血者”和。自身對(duì)照”。按下表進(jìn)行操作??同時(shí)做兩份??一份放置37℃水浴??一份放置20℃室溫??1h后看結(jié)果。完全抗體檢查反應(yīng)物(滴數(shù))?? 受檢者 自身對(duì)照受檢者血清 2 2供血者或孕婦丈夫紅細(xì)胞 1