【正文】 天平： g。 振蕩器 渦旋混勻器 離心機 固相萃取裝置 氮吹儀 聚四氟乙烯離心管：15 mL。 濾膜： mm。 6 試樣制備與保存取有代表性試樣500 g，混合均勻，裝入潔凈容器中，密閉并標明標記，冷藏保存。7 測定步驟 提取準確稱取試樣3 g（ g），于15 mL離心管中，加入氘代4甲基咪唑標準中間溶液（）100 mL，用水溶解或稀釋，定容至10 mL，振蕩10 min。4500 r/min下離心5 min，待凈化。 凈化MCX固相萃取柱依次用甲醇3 mL和水5 mL活化，取待凈化液過柱，控制流速1滴/3～4 s，依次用2 %甲酸水溶液（）5 mL和甲醇5 mL淋洗，再用5 %氨水甲醇溶液（）9 mL洗脫，收集洗脫液，于40 ℃氮氣吹干。用乙腈5 mmol/L甲酸銨溶液（）1 mL溶解殘渣，渦旋混勻，濾膜（）過濾，供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測。 標準曲線的制備準確量取1 mg/mL混合標準中間溶液和1 mg/mL氘代4甲基咪唑標準中間溶液適量，用乙腈5 mmol/L甲酸銨溶液（）稀釋，，，500 .0 mg/L系列濃度的混合標準使用溶液，其中氘代4甲基咪唑濃度為10 mg/L，供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定。以目標化合物與內(nèi)標物峰面積比值為縱坐標，對應(yīng)標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線，求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。 測定 液相色譜條件色譜柱：HILIC （100 mm， mm）, 或相當者；柱溫：40 ℃；流速： mL/min；進樣量： mL。 流動相：乙腈+5 mmol/L甲酸銨溶液（9+1，V/V），等度洗脫； 質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源。掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)檢測；電離電壓： kV；離子源溫度： 115 ℃；脫溶劑氣溫度：350 ℃；脫溶劑氣：600 L/h；錐孔氣：50 L/h；定性、定量離子對及對應(yīng)的錐孔電壓和碰撞電壓見表1表1a 4甲基咪唑和2甲基咪唑定性、定量離子對和錐孔電壓及碰撞電壓化合物定性離子對定量離子錐孔電壓碰撞電壓4甲基咪唑（4Mel）3015142甲基咪唑（2Mel）371414氘代4甲基咪唑（4Meld6）3015a對于不同質(zhì)譜儀器，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。非商業(yè)性聲明：表1所列參數(shù)是在Waters ACQUITY UPLCQuattro Premier質(zhì)譜儀完成的，此處列出的實驗用儀器僅是為了提供參考，并不涉及商業(yè)目的，鼓勵標準使用者嘗試不同型號的儀器。 測定法（），按內(nèi)標法以峰面積比計算。混合標準使用溶液及試樣溶液中4甲基咪唑和2甲基咪唑和氘代4甲基咪唑的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。試樣溶液中的離子對相對豐度與混合標準使用溶液的離子相對豐度比符合表2的要求。 min。表2 試樣溶液中離子相對豐度的允許偏差范圍相對豐度（%）＞50＞ 20～50＞10～20≤10允許偏差（%）177。20177。25177。30177。50 空白試驗除不加試樣外，均按上述測定條件和步驟進行。8 結(jié)果計算和表達計算或峰面積比值，標準曲線校正。其中：—4甲基咪唑定量離子對峰面積； —2甲基咪唑定量離子對峰面積；—氘代4甲基咪唑峰離子對面積；由標準曲線方程：求得和，則試樣中4甲基咪唑或2甲基咪唑殘留量（mg/kg）：按下式計算： 式中： —混合標準使用溶液中4甲基咪唑或2甲基咪唑的峰面積；—混合標準使用溶液中內(nèi)標氘代4甲基咪唑的峰面積；—混合標準使用溶液中內(nèi)標氘代4甲基咪唑的濃度，單位為微克每升，mg/L；—混合標準使用溶液中4甲基咪唑或2甲基咪唑，單位為微克每升，mg/L；—試樣中4甲基咪唑或2甲基咪唑的濃度，單位為微克每升，mg/L；—試樣中4甲基咪唑或2甲基咪唑的峰面積；—試樣中內(nèi)標氘代4甲基咪唑的峰面積；—試樣中待分析物的殘留量，單位為微克每千克（mg/kg）； —溶解殘余物的體積，單位為毫升，mL；—試樣質(zhì)量，單位為克，g。注：計算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。9 定量限、回收率和精密度 定量限本方法對4甲基咪唑、 mg /kg。 回收率碳酸飲料、特殊用途飲料、茶飲料、咖啡飲料中4甲基咪唑、~ mg/ %~ %。 精密度本方法的相對標準偏差≤10 %。附 錄 A（資料性附錄） 4甲基咪唑（4Mel）、2甲基咪唑（2Mel）和氘代4甲基咪唑（4Meld6）的選擇離子色譜圖（10 mg/kg）附 錄 B（資料性附錄）4甲基咪唑和2甲基咪唑殘留檢測的添加回收率數(shù)據(jù) 碳酸飲料、特殊用途飲料、茶飲料、咖啡飲料中4甲基咪唑和2甲基咪唑添加濃度及回收率（n=5）樣品化合物添加水平 （mg/kg）回收率（%）碳酸飲料4甲基咪唑10~25~50~75~2甲基咪唑10~25~50~75~特殊用途飲料4甲基咪唑10~25~50~2甲基咪唑10~25~50~茶飲料4甲基咪唑10~25~50~2甲基咪唑10~25~50~咖啡飲料4甲基咪唑10~25~50~2甲基咪唑10~25~50~_________________________________8