【導(dǎo)讀】導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）中凡引用他人。已經(jīng)發(fā)表或未發(fā)表的成果、數(shù)據(jù)、觀點(diǎn)等，均已明確注明出處?；蛟诰W(wǎng)上發(fā)表的論文。

　　

【正文】 － － 乳糖 － － － *： “+”表示陽(yáng)性， “－ ”表示 陰 性 真菌分析結(jié)果 參照文獻(xiàn) [19]對(duì)真菌進(jìn)行鑒定。 Z01： 菌落白色 ,氣生菌絲呈絨狀 ， 生長(zhǎng)比較旺盛 ,常產(chǎn)生紫色色素。分生孢子梗細(xì)長(zhǎng)分枝有明顯分隔。分生孢子無(wú)色 ， 分為大小兩種類(lèi)型 ： 小型孢 子數(shù)量較少 ,多為單細(xì)胞 ， 也有雙細(xì)胞卵圓形或長(zhǎng)圓形 ， 單生 ； 大型孢子數(shù)量多 ,為 4個(gè)細(xì)胞 ， 微彎 ,鐮刀形 ， 無(wú)足細(xì)胞和厚垣孢子。 Z02:菌落白色 ,氣生菌絲呈棉絮狀 ,生長(zhǎng)極旺盛 ,常產(chǎn)生黃色色素。 分生孢子梗細(xì)長(zhǎng)分枝。 分生孢子無(wú)色 ,分為大小兩種類(lèi)型 :小型孢子數(shù)量較多 ， 單細(xì)胞 ， 也有雙細(xì)胞，卵圓形或長(zhǎng)圓形 ,單生 。大型孢子數(shù)量極少 ， 為 4個(gè)細(xì)胞 ， 微彎 ， 兩端鈍 20 圓 ,鐮刀形 ， 無(wú)足細(xì)胞和厚垣孢子。 由此鑒定 2株菌株為鐮孢霉屬 ( Fusarium LK. ex Fx)。 菌株生長(zhǎng)特性 不同碳源對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響 試驗(yàn)選 取培養(yǎng)液的碳源分別為蔗糖、葡萄糖、甲醇、乙醇、丙酮、對(duì)硝基苯酚。在 30℃ 、 160 r/min 條件下培養(yǎng) 24h 后于波長(zhǎng) 600 下測(cè)量吸光度。 由圖 3. 1(a)可知，降解菌中的細(xì)菌最適碳源為葡萄糖。另外乙醇對(duì)于 3 株細(xì)菌生長(zhǎng)也有促進(jìn)作用，丙酮也能促進(jìn)菌株 X03 的生長(zhǎng)。 由圖 3. 1(b)可知，降解菌中的真菌最適碳源為葡萄糖，其他的幾種碳源也是真菌生長(zhǎng)可選擇的較優(yōu)碳源，可見(jiàn) 2 株真菌降解菌對(duì)碳源的適用范圍較廣。 (a)01XO1 X02 X03OD600蔗糖葡萄糖甲醇乙醇丙酮對(duì)硝基苯酚 (b)01Z01 Z02OD600蔗糖葡萄糖甲醇乙醇丙酮對(duì)硝基苯酚 圖 不同碳源對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響 Effect of carbon source on growth condition 21 最適碳源的不同濃度對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響 由 可知， 5 株降解菌的最適碳源都為真菌，因此，試驗(yàn)選取葡萄糖做最適碳源濃度的試驗(yàn)。試驗(yàn)選取葡萄糖的濃度分別為 、 、 、 、。在 30℃ 、 160 r/min 條件下培養(yǎng) 24h 后于波長(zhǎng) 600 下測(cè)量吸光度。 由圖 (a)、 (b)可知，葡萄糖對(duì)降解菌的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，且葡萄糖濃度越高時(shí)，菌株的生長(zhǎng)越旺盛。 (a)01 1 5 10葡萄糖濃度(g/L)OD600XO1X02X03 (b)01 1 5 10葡萄糖濃度(g/L)OD600Z01Z02 圖 葡萄糖濃度對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響 Effect of glucose concentrations on growth condition 22 不同 pH 值對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響 試驗(yàn)選取培養(yǎng)液的 pH值分別為 5． 0、 6． 0、 7． 0、 8． 0、 9． 0。在 30℃ 、160 r/min條件下培養(yǎng) 24h后于波長(zhǎng) 600下測(cè)量吸光度。 由圖 (a)可知，菌株 X01的最適 pH值為 ，菌株 X0 X03最適 pH值為 8． 0，3株細(xì)菌在偏酸或偏堿條件下 (pH值 —)均有一定的生長(zhǎng)能力，但 pH值低于 。 由圖 (b)可知，菌株 Z01的最適 pH值為 ，菌株 Z02的最適 pH值為 。從圖中可以知道，真菌對(duì) pH的耐受程度較廣。 (a)015 6 7 8 9初始pH值OD600 XO1X02X03 (b)05 6 7 8 9初始pH值OD600Z01Z02 圖 3. 3 最適 pH值曲線 Fig The curve of optimum pH range 23 不同溫度對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響 溫度是影響微生物生長(zhǎng)和生存的最重要的環(huán)境因素之一。試驗(yàn)對(duì) 5株菌株在1 2 3 42℃ 時(shí)的生長(zhǎng)情況進(jìn)行了考察。 由圖 (a)、 (b)可知，在所試的溫度范圍內(nèi)， 5株菌株均有不同程度的生長(zhǎng)，其中細(xì)菌溫度為 37℃ 、真菌溫 度為 30℃ 時(shí)的生長(zhǎng)情況最佳，溫度過(guò)高或過(guò)低都不利于其生長(zhǎng)。 (a)0115 22 30 37 45溫度(176。C)OD600XO1X02X03 (b)0115 22 30 37 45溫度(176。C)OD600Z01Z02 圖 3. 4 最適溫度范圍曲線 Fig3. 4 The curve of optimum temperature range 不同農(nóng)藥濃度對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響 試驗(yàn)選取培養(yǎng)液中毒死蜱的濃度分別為 60mg/L、 120mg/L、 240mg/L、480mg/L、 960mg/L。在 30℃ 、 160 r/min 條件下培養(yǎng) 24h 后于波長(zhǎng) 600 下測(cè)量吸 24 光度。 圖 (a)、 (b)表明，從總體上而言 ,毒死蜱濃度對(duì)菌株生長(zhǎng)影響不大 ,但是當(dāng)敵敵畏濃度達(dá)到 960g/ L 時(shí)，菌株的生長(zhǎng)明顯受到抑制 ,這說(shuō)明在毒死蜱濃度過(guò)高對(duì)細(xì)胞具有毒害作用 ,抑制了菌株的生長(zhǎng)。 (a)0160 120 240 480 960毒死蜱濃度(mg/L)OD600XO1X02X03 (b)0160 120 240 480 960毒死蜱濃度(mg/L)OD600Z01Z02 圖 3. 5 毒死蜱濃度對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響 Effect of chlorpyrifos concentrations on growth condition 25 第四章 總結(jié)與展望 總結(jié) 利用微生物及其產(chǎn)生的降解酶處理環(huán)境中的有機(jī)磷農(nóng)藥己顯示出良好的應(yīng)用前景，是近年來(lái)有機(jī)磷農(nóng)藥降解的主要發(fā)展方向。因此，研究有機(jī)磷農(nóng)藥的降解具有重要的理論意義和廣闊的應(yīng)用前景，篩選能夠 降解有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物顯得尤其重要和關(guān)鍵。 (1) 本研究采用農(nóng)藥廠附近土壤為菌源，通過(guò)馴化、篩選，分離得到 5株可有效降解有機(jī)磷農(nóng)藥的優(yōu)勢(shì)菌種，其中 3株為細(xì)菌， 2株為真菌，觀察菌株的培養(yǎng)特征和個(gè)體形態(tài)，根據(jù)文獻(xiàn) [18,19]初步鑒定， 3株細(xì)菌 均為假單胞菌屬 (Pesudomon as)， 2株真菌均為鐮孢霉屬 ( Fusarium LK. ex Fx)。 (2) 降解菌的最適生長(zhǎng)條件：葡萄糖能促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng) ,農(nóng)藥濃度不高時(shí)對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)影響不大 ， 細(xì)菌的最適 pH 為 ～ 8. 0 ，最適溫度為 37 ℃ ；真菌生長(zhǎng)量隨 外加碳源濃度的增加而增加 ， 在 pH ～ 8. 0時(shí)生長(zhǎng)量較大 ,溫度 30 ℃ 時(shí)其生長(zhǎng)量最大，農(nóng)藥濃度不大時(shí)對(duì)菌株影響不大。 (3) 在 5株降解菌株中，真菌的生長(zhǎng)條件適應(yīng)范圍比細(xì)菌要廣，因此真菌降解有機(jī)磷農(nóng)藥的應(yīng)用前景更好。 展望 (1)在本實(shí)驗(yàn)的研究基礎(chǔ)上， 獲得菌株 的降解酶 ，研究酶學(xué)性質(zhì) 和 有機(jī)磷降解酶的結(jié)構(gòu) 對(duì) 作用機(jī)理 的研究 有重大的意義。 (2)分離純化菌株產(chǎn)生的降解酶，進(jìn)行降解酶固定化的研究，從而實(shí)現(xiàn)有機(jī)磷農(nóng)藥廢水的生物治理，這也是以后值得研究和開(kāi)發(fā) 。 (3)以本實(shí)驗(yàn)篩選的菌株為對(duì)象，開(kāi)發(fā)微生物菌肥 ，將其和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的基肥應(yīng)用于田間，不但可以改善土壤中 N、 P 等元素的狀況，還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)土壤中長(zhǎng)年積累的有機(jī)磷殘留進(jìn)行降解。 (4)采用基因工程相關(guān)技術(shù)，將 降解菌株 的降解酶的基因和其它降解酶的基 26 因轉(zhuǎn)入同一個(gè)質(zhì)粒內(nèi)，構(gòu)建所謂的超級(jí)菌。 總而言之，環(huán)境的治理是一項(xiàng)長(zhǎng)期而艱巨的任務(wù)。利用微生物的辦法來(lái)治理有機(jī)磷農(nóng)藥的污染，實(shí)現(xiàn)人與自然地和諧共處。 27 參考文獻(xiàn) [1] 夏世鈞．農(nóng)藥毒理學(xué) [M]．第 1版 .北京：化學(xué)工業(yè)出版社， 2020： 266—272. 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