微生物工程實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)-資料下載頁(yè)
2025-10-25 01:00本頁(yè)面
【導(dǎo)讀】培養(yǎng)48h，根據(jù)透明圈大小及透明圈菌落直徑比選擇產(chǎn)酶菌株。蛋白胨10g，NaCl10g，酵母粉5g，瓊脂15～20g，水1000ml，調(diào)節(jié)pH，121℃滅菌20min. CMc—Na1．88g，剛果紅0．2g，硫酸銨3g，瓊脂20g，MgS04·7H200．5g，NaCl0．5g，K2HP041g，，121℃滅菌20min. 篩選出產(chǎn)酶能力較強(qiáng)的菌株，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。若條件不允許，可直接利用LB培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)。溫培養(yǎng)24h，觀察菌株的生長(zhǎng)情況并測(cè)量各平板上菌落的直徑。分別以1％葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖、可溶性淀粉、甘油作為碳源，其他組分均相同進(jìn)行培養(yǎng)24h。2％、3％、4％、5％、6％、7％、8）的最佳碳源，其他組分均相同的條件進(jìn)行培養(yǎng)，確定最佳碳源的含量。將菌株接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，在相對(duì)濕度分別為10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%，37℃恒溫培養(yǎng)24h。將上述三種成分置于三角瓶中使其溶解，，分裝后高壓滅菌121℃，15min。液體發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)35℃，220r／瑚jn搖床培養(yǎng)。
【正文】 應(yīng)液的顏色呈正比。 取適當(dāng)稀釋的酶液，分別以濾紙或1％的CMC溶液為底物，于50℃恒溫水解反應(yīng)1 h；然后加人顯色劑DNS，沸水浴中煮沸5 min；再加入蒸餾水，于530 nm測(cè)定吸光度OD值。OD值越大，說(shuō)明該菌株的酶活力越強(qiáng).酶活力計(jì)算：從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出葡萄糖υmol數(shù)；酶活力(u／mL)=葡萄糖量/60Ew其中：60為保溫時(shí)間(酶與底物作用時(shí)間，min)；Ew為粗酶液的體積(mL)；u是指在特定條件下，每分鐘催化纖維素水解成1umol葡萄糖的酶量。CMC酶活力的測(cè)定：(羧甲基纖維素鈉鹽(CMCNa)酶活性測(cè)定方法) 纖維素酶對(duì)CMC—Na有降解能力，生成葡萄糖等還原糖，再用DNS法顯色，用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液作標(biāo)準(zhǔn)液，22 PC分光光度計(jì)在520 nm處測(cè)其吸光度，以每分鐘生成相當(dāng)于1umol的葡萄糖為一個(gè)酶活性單位。 取3支帶有20 mL刻度的試管，1支管作空白對(duì)照，2支管作平行樣品管。每支樣品管中加1 mL酶溶液，置于50℃水浴鍋中預(yù)熱2 min，然后在3支試管中分別加人4 mL已預(yù)熱至50℃的底物溶液，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)5 min取出，每管立即分別加入1 mL 2mol／L氫氧化溶液和2 mL DNS顯色液，搖勻后在對(duì)照管中再加入1 mL酶液。將3支試管放人沸水浴中，5 min后立即取出，流水冷卻，用蒸餾水定容至20 mE，于520 nm處測(cè)OD值。酶活力計(jì)算：從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出葡萄糖umol數(shù)。酶活力(u／ml)：葡萄糖量/(5Ew)其中：5為保溫時(shí)間(酶與底物作用時(shí)間，min)；Ew為液的體積(mL):u是指在特定條件下，每分鐘催化纖維素水解1umol葡萄糖的酶量。工作分配：陳怡璋 菌株復(fù)活 菌株擴(kuò)大培養(yǎng) 郭智 趙詔v 宋培換 菌株發(fā)酵參數(shù)工藝優(yōu)化 陳文竹 纖維素酶活性鑒定 整理：陳文竹
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