【正文】 Fert Soils, 1990, 9 (1) :14～ 18. [17] Mallick K, Bharati K, Banerji A. Bacterial degradation of chlorpyrifos in pure cultures and in soil[J]. B ull Environ Contam Toxicol, 1999, 62 (1) : 48～ 54. [18] 李建武，余瑞元，袁明秀等 .生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)原理和方法 [M].北京 :北京大學(xué)出版社， 1999， 9:405406. [19] 李淑彬，周仁超，劉玉煥等 .曲霉 M2 降解有機(jī)磷農(nóng)藥 (甲胺磷 )的研究 [J].微生物學(xué)通報(bào)， 1999， 26(1):2730. [20] 王小寧 .甲基對(duì)流磷共代謝降解菌的篩選及降解機(jī)制和降解性能的研究 [D].西安：西北大學(xué)， 2020. [21] 沈萍等．微生物實(shí)驗(yàn) [M]．第 3 版 .北京：高等教育出版社， 1999: 1214. [22] 布坎南等 . 伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè) [M], 北京 : 科學(xué)出版社 , 1984. [23] 李振高，駱永明等．土壤與環(huán)境微生物研究法 [M]．第 1 版 .北京：科學(xué)出版社， 2020： 257—262. [24] 阮華芳 。 展望 (1)在本實(shí)驗(yàn)的研究基礎(chǔ)上， 獲得菌株 的降解酶 ，研究酶學(xué)性質(zhì) 和 有機(jī)磷降解酶的結(jié)構(gòu) 對(duì) 作用機(jī)理 的研究 有重大的意義。C)OD600Z01Z02 圖 3. 4 最適溫度范圍曲線 Fig3. 4 The curve of optimum temperature range 不同農(nóng)藥濃度對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響 試驗(yàn)選取培養(yǎng)液中毒死蜱的濃度分別為 60mg/L、 120mg/L、 240mg/L、480mg/L、 960mg/L。 由圖 (a)可知，菌株 X01的最適 pH值為 ，菌株 X0 X03最適 pH值為 8． 0，3株細(xì)菌在偏酸或偏堿條件下 (pH值 —)均有一定的生長(zhǎng)能力，但 pH值低于 。另外乙醇對(duì)于 3 株細(xì)菌生長(zhǎng)也有促進(jìn)作用，丙酮也能促進(jìn)菌株 X03 的生長(zhǎng)。 Z02:菌落白色 ,氣生菌絲呈棉絮狀 ,生長(zhǎng)極旺盛 ,常產(chǎn)生黃色色素。菌落直徑在 2mm左右。 碳源濃度對(duì)菌種生長(zhǎng)的影響試驗(yàn)：將菌種在含有農(nóng)藥的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，制成種子液，按 10%的接種量接于含 300mg/L的毒死蜱的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基的三角瓶中，分別以 、 、 1g/L、 5g/L、 10g/L濃度的葡萄糖作為碳源， 置于 160r/ min ,30 ℃ 搖床培養(yǎng) 24h測(cè)其 OD600值。于適溫下培養(yǎng)，適溫培養(yǎng)幾天，觀察如果是兩管內(nèi)均產(chǎn)酸或皆產(chǎn)酸又產(chǎn)氣者即為發(fā)酵產(chǎn)酸。置于 4850℃ 的水浴鍋中 2 小時(shí)，或37℃ 溫度中 4 小時(shí)，呈紅色者為陽(yáng)性反應(yīng)。陽(yáng)性者斜面上有菌落生長(zhǎng)，并且培養(yǎng)基由綠色轉(zhuǎn)為藍(lán)色，否則為陰性。如菌苔周?chē)途ο碌呐囵B(yǎng)基顯藍(lán)色，則為陰性反應(yīng)。如菌已生長(zhǎng)，且明膠培養(yǎng)基凝塊在 20℃ 下已部分或全部變成可流動(dòng)的液體，為明膠水 解陽(yáng)性．若菌已長(zhǎng)出，而明膠表面無(wú)凹陷為穩(wěn)定的凝塊，則為明膠水解陰性。培養(yǎng)數(shù)天后，將蓋玻片取出倒放在加封片液的載玻片上鏡檢。2H2O 西安化學(xué)試劑廠 MgSO47H2O 0. 005g ， (NH4)2SO4 1. 0g ， 蒸餾水 1000mL,調(diào)節(jié) 。 (2)同樣的菌株能夠降解不同的農(nóng)藥，一種農(nóng)藥同時(shí)可以被不同菌株降解。從菌株 M6 中分離提純的有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，其 C－末端含有 6 個(gè)寡聚組氨酸，水解甲基對(duì)硫磷時(shí)，最適 ，最佳反應(yīng)溫度 15℃ ； Mn2+、 Zn2+、Cu2+可使酶活性增加 15％－ 20％， Ca2+、 Mg2+微弱的促進(jìn)酶的作用， Ni2+對(duì)酶活性幾乎無(wú)影響； 1mmol/+ 幾乎不影響酶的 活性，而 10mmol/L +對(duì)甲基對(duì)硫磷水解酶有較強(qiáng)的抑制作用。 最近又有報(bào)道， 的 opd 基因兩側(cè)基因簇有轉(zhuǎn)座子特性。到目前為止已發(fā)現(xiàn)的有機(jī)磷降解微生物包括細(xì)菌、真菌、放線菌和藻類。郭明等 (2020) [12]發(fā)現(xiàn)在 7d 以內(nèi)，氧化樂(lè)果和久效磷對(duì)土壤中的脫氫酶產(chǎn)生抑制作用，在 9d以后，對(duì)脫氫酶的抑制作用消失，反而有一定的激活作用。 有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物降解途徑 有機(jī)磷農(nóng)藥被微生物降解是它們?cè)谕寥乐修D(zhuǎn)化的重要途徑，有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物降解主要存在以下過(guò)程 ： 一種是微生物本身含有可降解該農(nóng)藥的酶系基因，當(dāng)有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)人土壤后，微生物馬上能產(chǎn)生降解有機(jī)磷農(nóng)藥的降解酶，在這種情況下，降解菌的選育較為容易 ； 另一種是微生物本身并無(wú)可降解該有機(jī)磷農(nóng)藥的酶系 ，當(dāng)農(nóng)藥進(jìn)人環(huán)境以后，由于微生物生存的需要，微生物的基因發(fā)生重組或改變，產(chǎn)生新的降解酶系。鐘愛(ài)國(guó)進(jìn)行了用超聲波誘導(dǎo)來(lái)降解甲胺磷的實(shí)驗(yàn) [6]。章維華等進(jìn)行了通過(guò)臭氧來(lái)降解大白菜中殘留的農(nóng)藥 [4]。于是，在合理使用化學(xué)農(nóng)藥的前提下，如何減少，消除化學(xué)農(nóng)藥污染成為日益迫切的任務(wù)。但后來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，這些所謂的非持久性農(nóng)藥在某些環(huán)境條件下也會(huì)有較長(zhǎng)的殘留期，并在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生蓄積作用。 有機(jī)磷農(nóng)藥施用，破壞了自然界天敵與害蟲(chóng)之間的生態(tài)平衡，導(dǎo)致天敵數(shù)量急劇下降及抗藥性害蟲(chóng)數(shù)量增加，這樣就得再次加量使用農(nóng)藥，造成惡性循環(huán)。另一種是 P 通過(guò)雙鍵與 S 結(jié)合，形成磷硫雙鍵 (P=S)，如對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、辛硫磷、毒死蜱等。如果再加上有機(jī)磷除草劑（如草甘膦、草銨膦等），則更為引人注目，可見(jiàn)有機(jī)磷農(nóng)藥在世界農(nóng)藥市場(chǎng)中仍具有舉足輕重的地位。商品化有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑開(kāi)發(fā)的鼎盛時(shí)期是 1950～ 1965 年。Glucose can promote the growth of bacteria, pesticides are not high when the concentration of bacteria growth was not, bacteria optimum pH was ~ , the optimal temperature was 37 ℃ 。 特此聲明。 論文作者簽名： 日 期： 年 月 日 目 錄 摘 要 ...........................................................................................................................I ABSTRACT .............................................................................................................. II 第一章 文獻(xiàn)綜述 ..................................................................................................... 1 有機(jī)磷農(nóng)藥概述 ............................................................................................... 1 發(fā)展簡(jiǎn)史 ................................................................................................. 1 有機(jī)磷農(nóng)藥的性質(zhì)及分類 ..................................................................... 2 有機(jī)磷農(nóng)藥的危害 ................................................................................. 3 本文采用的有機(jī)磷農(nóng)藥 ——毒死蜱 ..................................................... 4 環(huán)境中有機(jī)磷農(nóng)藥的降解方法 ...................................................................... 5 化學(xué)降解 ................................................................................................. 5 超聲波誘導(dǎo)降解法 ................................................................................ 5 光學(xué)降解 ................................................................................................ 6 生物降解 ................................................................................................ 6 有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物降解 .............................................................................. 6 有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物降解 途徑 ............................................................. 6 有機(jī)磷農(nóng)藥微生物降解的研究進(jìn)展 .................................................... 8 降解有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物種類 ............................................................. 9 第二章 有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌的篩 選及生長(zhǎng)條件的研究 ............................. 11 試驗(yàn)材料 ......................................................................................................... 11 培養(yǎng)基 .................................................................................................. 11 樣品及試劑 ........................................................................................... 11 主要儀器及設(shè)備 ................................................................................... 11 試驗(yàn)方法 ........................................................................................................ 11 菌種的分離及篩選 ............................................................................... 11 菌種的鑒定 ........................................................................................... 13 生長(zhǎng)特性研究 ....................................................................................... 16 第三章 結(jié)果與分析 .............................................................................................. 18 ......................................................................................... 18 細(xì)菌分析結(jié)果 ....................................................................................... 18 真菌分析結(jié)果 ....................................................................................... 19 菌株生長(zhǎng)特 性 ................................................................................................. 20 不同碳源對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響 ..........