【正文】 和反應(yīng)能力，這實際上是免疫治療和基因治療技術(shù)的組合，一定程度上克服了細(xì)胞因子注射療法需反復(fù)多次、副作用大等缺點，療效也有所提高。腫瘤免疫細(xì)胞因子基因治療因其簡單、有效、安全，已成為腫瘤免疫基因治療研究的最常用方法。 100 ? （ 4） 細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞 腫瘤細(xì)胞經(jīng)過細(xì)胞因子轉(zhuǎn)移后，其MHC抗原分子表達(dá)增強(qiáng)，成為免疫原性更強(qiáng)的瘤苗，使多種免疫細(xì)胞在腫瘤局部浸潤，增強(qiáng)機(jī)體對腫瘤的免疫功能。 101 ? （ 5） “自殺基因”療法 將“自殺基因”（ suicide gene)導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞，其能將無毒性前體藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)代謝為毒性產(chǎn)物，進(jìn)而選擇性的殺傷腫瘤細(xì)胞。能夠編碼產(chǎn)生將非活性或無毒性前體藥物轉(zhuǎn)化成活性活毒性藥物的酶的基因，稱“自殺基因” 。 自殺基因的作用機(jī)制 ?TK/GCV 單純皰疹病毒 （ herps simplex virus, HSV）Ⅰ 型胸苷激酶 （ thymidine kinase, tk） 基因編碼胸苷激酶 ， 特異性地將無毒的核苷類似物丙氧鳥苷（ ganciclovir, GCV） 轉(zhuǎn)變成毒性 GCV三磷酸核苷 ，后者能抑制 DNA聚合酶活性 ， 導(dǎo)致細(xì)胞死亡 。 ?CD/5FC 大 腸 桿 菌 胞 嘧 啶 脫 氨 酶 （ cytosine deaminase, CD） 基因 ， 在細(xì)胞內(nèi)將無毒性 5氟胞嘧啶 （ 5FC） 轉(zhuǎn)變成毒性產(chǎn)物 5氟尿嘧啶 （ 5FU） 。 旁觀者效應(yīng) :“自殺基因 ” 治療不僅使轉(zhuǎn)導(dǎo)了 “ 自殺基因 ” 的腫瘤細(xì)胞在用藥后被殺死 ，而且與其相鄰的未轉(zhuǎn)導(dǎo) “ 自殺基因 ” 的腫瘤細(xì)胞也被殺死 。 2. 旁觀者效應(yīng) 105 心血管疾病基因治療 ? 心血管基因治療 : VEGF165（血管內(nèi)皮生長因子） 對于血管的生成具有重要作用 , 而一些心腦血管疾病由于血管堵塞 ,狹窄導(dǎo)致 , 可以采用該策略進(jìn)行血管再生 , 旁路再通 , 使病人免受開刀搭橋之苦 . 美國已經(jīng)有多項方案進(jìn)入臨床試驗 , 臨床 試驗結(jié)果顯示 :新血管生長、心肌血流灌注和室壁功能改善，大多數(shù)病人的心絞痛減輕。 （六）基因治療面臨的問題和挑戰(zhàn) ? 基因治療的發(fā)展經(jīng)歷了“樂觀與熱情 —失望與懷疑 —理性與挑戰(zhàn)”的過程，這是符合事物發(fā)展規(guī)律的。目前，基因治療領(lǐng)域存在的主要問題是有效性和安全性。 106 ? 主要表現(xiàn)為： (1)基因?qū)胂到y(tǒng)缺乏靶向性，效率也較低。如以腺病毒為載體的 p53基因轉(zhuǎn)移治療惡性腫瘤的方案中，只能直接將腺病 毒注射到腫瘤局部。若靜脈注射，病毒顆粒將很快被清除，真正能夠到達(dá)腫瘤組織的很少，難以達(dá)到治療效果，且增加了副作用。前面提到的第一例逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo) ADA 基因轉(zhuǎn)移成功治療 SCID 的病例，因為導(dǎo)入效率較低，前后經(jīng)歷了 11 次體外轉(zhuǎn)導(dǎo)和回輸。 107 ? (2)目前針對遺傳性疾病的基因治療方案大多采用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，其插入或整合到染色體的位置是隨機(jī)的，有引起插入突變及細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的潛在危險。而理想的基因治療方案應(yīng)該是在原位補(bǔ)充、置換或修復(fù)致病基因，或者將治療基因插入到宿主細(xì)胞染色體上不致病的安全位置。 108 ? (3)理想的基因治療應(yīng)能根據(jù)病變的性質(zhì)和嚴(yán)重程度不同，調(diào)控治療基因在適當(dāng)?shù)慕M織器官內(nèi)和以適當(dāng)?shù)乃交蚍绞奖磉_(dá)。但目前還達(dá)不到這一目標(biāo)，其主要原因是：現(xiàn)有的基因?qū)胼d體容量有限，不能包容全基因或完整的調(diào)控順序，同時人們對導(dǎo)入的基因在 體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)理的認(rèn)識有限。 109 1999年 9月份， 18歲美國青年Jesse Gelsinger因一種在醫(yī)學(xué)上稱為鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶不足癥的罕見遺傳性疾病而在美國賓夕法尼亞州大學(xué)人類基因治療中心接受基因治療時不幸死亡，成為被報道的首例死于基因治療中的患者。 基因治療出現(xiàn)的問題 ? 2022年，法國患有重癥聯(lián)合免疫缺陷病11名兒童基因治療獲得成功。但是，沒過多久，檢查出 1名兒童患上某種類似白血病，有關(guān)專家認(rèn)為這是由基因治療引起的。這立刻引起各國的廣泛關(guān)注。 基因治療出現(xiàn)的問題 治療基因插入逆轉(zhuǎn)錄酶病毒載體，再進(jìn)入患者細(xì)胞中與 DNA結(jié)合。這些病毒載體雖經(jīng)過處理可防止感染，但無法控制病毒載體在 DNA上的插入位置。擔(dān)心病毒載體會破壞重要基因，導(dǎo)致 “插入型突變 ” 。如果破壞的是負(fù)責(zé)調(diào)控細(xì)胞生長和分裂的基因，就會產(chǎn)生癌癥。但也有人認(rèn)為，不能排除有些病人是后發(fā)生癌癥的可能。此前基因治療沒有發(fā)生類似問題?？赏ㄟ^改造逆轉(zhuǎn)錄酶病毒減少插入變異的風(fēng)險?？尚械霓k法是給載體安上 “ 自殺 ” 基因。用特定抗病毒藥物讓病毒 “自殺 ” ，將癌癥消滅在萌芽階段。 基因治療出現(xiàn)的問題 目前，基因治療已從最初的單基因缺陷病，發(fā)展到帕金森綜合征、心臟病和艾滋病，其中大約三分之二的臨床試驗是針對癌癥的。美國費城杰弗遜醫(yī)學(xué)院的研究人員已經(jīng)成功地在動物身上實現(xiàn)了用基因治療的方法預(yù)防胃癌。科學(xué)家的下一步目標(biāo)是進(jìn)行口服基因試劑的試驗。 基因治療的發(fā)展 基因治療 3個階段： 1980— 1989年為準(zhǔn)備期。在臨床前研究和輿論準(zhǔn)備。 1990— 1995年為狂熱期。 1990年 9月第一例成功，帶來一片狂熱。一些關(guān)鍵技術(shù)沒有解決，在臨床應(yīng)用中碰壁也是正常的。 1996年進(jìn)入理性期。對臨床試驗進(jìn)行評估，提出關(guān)鍵問題進(jìn)行研究，從狂熱轉(zhuǎn)入理性化的正常軌道。 基因治療的發(fā)展 將人基因圖記錄在光盤上。醫(yī)生打開光盤，檢查幾個 “ 候選基因 ” ，并把重要區(qū)域、重要基因、重要位點搞清楚。針對個體差異，醫(yī)生開出 “ 特效藥 ” 就行了。迄今所有的藥物，都是通過修飾基因的結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)、改變?nèi)梭w的基因表達(dá)，改變基因產(chǎn)物的功能從而達(dá)到治療的目的，是間接的 “ 基因治療 ” 。真正的 “ 基因治療 ” 是把治病的基因直接送到人體細(xì)胞中而發(fā)揮治療功效，基因治療不僅要找到致病的等位基因與正常的等位基因的區(qū)別，還要有 “ 治療基因 ” 。 基因治療的發(fā)展 ? 白細(xì)胞介素 2：腎肝胰腺癌，慢性肝炎，黑色素瘤等輔助治療 ? 表皮細(xì)胞因子 (EGF)：表皮生長，治療燒傷 ? 人生長激素 (hGH)：兒童生長激素缺乏 ? 粒狀細(xì)胞集落刺激因子 (GDSF)：促白細(xì)胞生長，增加免疫，治療白血病、愛滋病 ? 粒狀嗜細(xì)胞集落刺激因子 (GMGGSF)： IL3配合促白細(xì)胞生長，治療再生障礙性貧血 基因工程產(chǎn)品 基因工程產(chǎn)品 缺乏生長激素造成的侏儒癥 巨人癥患者 ? 促紅細(xì)胞生長 素 (EFG)：促紅細(xì)胞生長 ? 鏈激酶 (CSK)：溶血栓 ? 尿激酶原 (proUK)：溶血栓 ? ?干擾素：抗病毒 ? 人腫瘤壞死因子 (TNF)：治療癌癥 ? 酶：工業(yè)用酶，分析、臨床檢測用酶， 工具酶 基因工程產(chǎn)品 尿激酶 尿激酶 溶解血栓過程 在胚胎發(fā)育的最早階段（受精卵）引入外源基因，經(jīng)整合，使發(fā)育的個體攜帶外源基因的動物。 轉(zhuǎn)基因動物 轉(zhuǎn)基因羊 羊受精卵 凝血因子基因 代母親 乳汁含治療血友病的凝血因子 將基因注入受精卵 帶有人凝血因子基因的轉(zhuǎn)基因羊 羊奶可治血友病 攜帶雞 IBDV基因（ 傳染性法氏囊病毒 ）的綿羊 攜帶人 mAAT蛋白（ 抗胰蛋白酶 ）基因的轉(zhuǎn)基因山羊 轉(zhuǎn)大鼠生長激素基因的 “超級”小鼠 轉(zhuǎn)基因超級兔 轉(zhuǎn)基因魚 轉(zhuǎn)基因觀賞魚 抗 CMV甜椒 轉(zhuǎn)基因蔬菜 發(fā)展與展望 ? 基因定向進(jìn)化：點突變，基因重構(gòu) ? 基因設(shè)計：根據(jù)蛋白質(zhì)設(shè)計進(jìn)行 ? 高效表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建：新的宿主及表達(dá)系統(tǒng)，基因表達(dá)調(diào)控，滿足不同需要 ? 多基因的共克隆與表達(dá) ? 代謝工程的設(shè)計 ? 生物發(fā)生器或生物反應(yīng)器 ? 基因治療在臨床上能寅際應(yīng)用，應(yīng)符臺下列條件 :有效性、安全性、經(jīng)濟(jì)性、容易操作等，同時從科學(xué)的觀點可以預(yù)測較其它治療為優(yōu)。 發(fā)展與展望