【正文】 存活等 )?？晒┻x擇并符合上述 4條以上要求的不過只有 30余種遺傳病 。 遺傳病基因治療必須符合以下要求： 83 1．腺苷脫氨酶 (ADA)和嘌呤核苷磷酸化酶 (PNP)缺乏癥 2．珠蛋白生成障礙性貧血和血紅蛋白病 3．血友病和其他血漿蛋白缺乏癥 4．苯丙酮酸尿癥和其他先天性代謝缺陷病 5．萊 納 (LeschNyhan)綜合征 6．家族性高膽固醇血癥 7．囊性纖維化病 84 （二）惡性腫瘤基因治療研究 （ 1）通過基因置換和基因補(bǔ)充，導(dǎo)入多種抑癌基因以抑制癌癥的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移； 腫瘤發(fā)生是一個(gè)極為復(fù)雜的過程，許多基因的突變會(huì)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。 （ 2）抑制癌基因的活性，通過干擾癌基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，發(fā)揮抑癌作用； （ 3）增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫原性，通過對(duì)腫瘤組織進(jìn)行細(xì)胞因子修飾，刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生對(duì)腫瘤細(xì)胞的溶解和排斥反應(yīng)； （ 4）通過導(dǎo)入“自殺基因”殺傷癌細(xì)胞。 85 從實(shí)際應(yīng)用于臨床治療的角度來看 ， 腫瘤基因治療的策略包括： (1)直接殺傷腫瘤細(xì)胞或抑制其生長 。 (2)增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng) ， 間接殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞 。 (3)改善腫瘤常規(guī)治療方法 ， 提高療效 。 86 ?基因干預(yù)技術(shù)：通過基因干預(yù) ， 使得腫瘤細(xì)胞過度表達(dá)的癌基因得到抑制 ， 從而降低其惡性表型 。 ?自殺基因治療 — 分子化療：直接殺死腫瘤細(xì)胞 。 ?腫瘤的免疫基因治療：以激發(fā)機(jī)體腫瘤免疫效應(yīng)或提高免疫效應(yīng)細(xì)胞功能。 ?提高化療效果的輔助基因治療： 藥物增敏基因治療； 耐藥基因治療。 87 ：自殺基因治療是目前腫瘤基因治療領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)之一。 基本原理： 向腫瘤細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入某些真核細(xì)胞中不存在的酶基因（自殺基因），這些基因表達(dá)的特異性酶可以催化對(duì)真核細(xì)胞無毒或低毒的藥物前體，轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂幸种坪怂岷铣尚?yīng)的抗代謝藥物，進(jìn)而選擇性地將轉(zhuǎn)染了該基因的腫瘤細(xì)胞“自殺”。這些基因也相應(yīng)地被稱為“自殺基因”。 88 自殺基因治療的前提條件是“自殺基因”的表達(dá)必須局限于腫瘤細(xì)胞中，而不傷及正常細(xì)胞。 ①利用免疫脂質(zhì)體、受體介導(dǎo)等技術(shù)進(jìn)行定向基因轉(zhuǎn)移。 ②利用病毒載體進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移。 ③腫瘤特異性基因轉(zhuǎn)錄。 ④腫瘤內(nèi)直接注射。 自殺基因轉(zhuǎn)移常用方法 89 激發(fā)機(jī)體腫瘤免疫效應(yīng)或提高免疫效應(yīng)細(xì)胞功能為目的的一種腫瘤基因治療方法。主要包括細(xì)胞因子（或受體）基因治療和抗原抗體基因治療兩大類。 90 ： 臨床上對(duì)腫瘤患者進(jìn)行化療時(shí) ， 通常面臨兩大難題： （ 1） 是患者機(jī)體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感程度存在差異 ， 特別是某些經(jīng)過多次化療的患者 ，其體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞已經(jīng)產(chǎn)生了多藥耐藥性 ， 對(duì)多種化療藥物產(chǎn)生交差耐受 ， 最終導(dǎo)致化療失敗 。 （ 2） 是大劑量的化療可能導(dǎo)致患者的正常細(xì)胞 ，特別是骨髓造血細(xì)胞的功能受到抑制 。 91 (1)藥物增敏基因治療： 將雞鈣調(diào)素 （ calmodulin, CaM） 基因?qū)胄∈笕橄侔┘?xì)胞株 C127， 結(jié)果僅需低劑量的長春新堿或長春花堿即可明顯抑制該細(xì)胞株的生長 。 對(duì)其作用原理進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn) ， CaM基因的表達(dá)產(chǎn)物作為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的重要物質(zhì) ， 明顯增加了腫瘤細(xì)胞對(duì)長春新堿或長春花堿的吸收量而相應(yīng)減少了排出量 ， 從而提高了腫瘤細(xì)胞內(nèi)化療藥物濃度 ， 導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡 。 為了使化療藥物能夠最大程度地殺死腫瘤細(xì)胞 ， 可以考慮將某些藥物增敏基因?qū)肽[瘤細(xì)胞 ， 特別是對(duì)化療藥物原本不敏感的腫瘤細(xì)胞 ， 使其對(duì)抗腫瘤藥物的敏感性大大增加 ， 從而達(dá)到增強(qiáng)化療效果的目的 。 92 (2)耐藥基因治療： 在解決化療所致骨髓細(xì)胞造血功能受到嚴(yán)重抑制的問題方面 ， 通過向腫瘤患者的骨髓細(xì)胞導(dǎo)入某種耐藥基因 ， 如 mdr1基因等 ， 以增強(qiáng)骨髓細(xì)胞的抗藥性 ， 以便耐受大劑量的化療藥物 ， 以達(dá)到徹底殺滅腫瘤細(xì)胞的目的 。 腫瘤細(xì)胞耐藥性的產(chǎn)生與多種糖蛋白或酶有關(guān) ， 包括多藥耐藥 （ mdr1） 基因編碼的 P糖蛋白 、 多藥耐藥相關(guān)蛋白 （ MRP） 以及近年來發(fā)現(xiàn)的肺耐藥相關(guān)蛋白等；還有細(xì)胞內(nèi)氧化和解毒作用的酶系統(tǒng) ， 包括細(xì)胞色素 P450（ cytochrome P450） 、 谷胱甘肽 S轉(zhuǎn)移酶 （ GST） 以及谷胱甘肽過氧化物酶 （ GSHPX） 等等 。 目前除了開發(fā)針對(duì)腫瘤細(xì)胞耐藥性產(chǎn)生機(jī)制的拮抗劑 ， 如用于阻斷 P糖蛋白所引發(fā)多藥耐藥的戊脈安（ verapamil） 和用于阻斷 GSH合成的丁硫氨酸亞砜胺（ BSO） 等 。 還采用基因干擾技術(shù) ， 在基因水平阻斷耐藥基因的表達(dá) ， 使腫瘤細(xì)胞喪失多藥耐藥性 ， 從而易于被化療藥物殺死 。 93 （三）病毒性疾病的基因治療研究 據(jù)統(tǒng)計(jì)， 75%的人類傳染病是由病毒引起的。病毒感染人體后不僅可能急性發(fā)病，還可以在人體內(nèi)長期潛伏，造成終身傷害。病毒還是造成先天畸形的重要因素之一。研究表明，它與某些癌癥、自身免疫性疾病和內(nèi)分泌疾病也存在一定的聯(lián)系。迄今為止，臨床上對(duì)絕大多數(shù)病毒感染性疾病仍然缺乏有效的治療手段，而在眾多開展的抗病毒治療方案中，抗病毒基因治療十分引人注目。 94 1． 調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答： （ 1） 將細(xì)胞因子 (如干擾素 、 白細(xì)胞介素等 )的基因 ， 導(dǎo)入機(jī)體免疫細(xì)胞 ， 激活免疫細(xì)胞并促進(jìn)其增殖分化 ， 增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答 ， 促進(jìn)機(jī)體清除病毒感染細(xì)胞和游離病毒 。 （ 2）將能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答的病毒抗原基因，如乙型肝炎病毒表面抗原基因等，導(dǎo)入機(jī)體，表達(dá)的抗原不僅可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體，還可以引發(fā)特異性的細(xì)胞免疫應(yīng)答，產(chǎn)生對(duì)野生致病病毒攻擊的防御作用。 95 2． 抗病毒復(fù)制：根據(jù)病毒在機(jī)體細(xì)胞中復(fù)制周期的各個(gè)環(huán)節(jié)來設(shè)計(jì)的 ， 主要包括： （ 1） 抑制病毒與宿主細(xì)胞結(jié)合：即阻斷病毒表面抗原決定簇與宿主細(xì)胞受體間的特異性結(jié)合 。 （ 2） 干擾病毒基因組的轉(zhuǎn)錄起始和調(diào)控 。 （ 3） 抑制病毒基因組的復(fù)制和蛋白質(zhì)合成 。 （ 4） RNA干擾技術(shù) 。 （ 5） 將抗病毒蛋白質(zhì)基因 ， 如 2ˊ→ 5ˊ 腺苷酸合成酶等基 因 ， 導(dǎo)入機(jī)體細(xì)胞并持續(xù)表達(dá) ， 可以激活核酸酶 F， 降解病毒 RNA， 對(duì) RNA病毒的感染產(chǎn)生明顯的抵抗作用 。 96 （四）其他疾病的基因治療研究 神經(jīng)退化性疾?。ㄈ缗两鹕喜。?:由于腺病毒可以感染有絲分裂后的細(xì)胞，同時(shí)具有潛在的高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和在中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫特惠區(qū)（ immunologically privileged site） 中的低病原性，因此是進(jìn)行神經(jīng)系統(tǒng)疾病基因治療的有效載體。 神經(jīng)母細(xì)胞 （ neuroprogenitor） 和人星型膠質(zhì)細(xì)胞可以作為自體同源細(xì)胞用于 ex vivo修飾。使用四環(huán)素調(diào)節(jié)的腺病毒載體來表達(dá)酪氨酸羥化酶在動(dòng)物模型中用 ex vivo技術(shù)表現(xiàn)出了可觀的前景。在用腦衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子（ BDNF）腺病毒重組體緩解亨廷頓疾病的實(shí)驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)表達(dá)BDNF的大鼠取得了明顯結(jié)果。 （ 1)重組載體的腦內(nèi)直接注射； (2）采用取出體內(nèi)細(xì)胞在體外經(jīng)由載體轉(zhuǎn)染修飾后回輸腦內(nèi)相關(guān)區(qū)域 。 兩種傳遞治療基因的主要策略 ： 97 基因治療的問題與展望 ? 治療基因調(diào)控元件的選擇； ? 安全高效載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)移技術(shù)的 選擇； ? 靶細(xì)胞的選擇 。 98 99 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH