維生素與測定ppt課件-資料下載頁
2025-05-12 13:00本頁面
【正文】 生素 C對氧、銅離子敏感，易被氧化。 食品中水溶性維生素的測定 食品中維生素 B1的測定 食品中維生素 B2的測定 食品中維生素 C的測定 食品中煙酸的測定 食品中維生素 B6的測定 一、維生素 B1的測定 維生素 B1又稱硫胺素、抗神經(jīng)炎素。 測定方法：比色法 熒光法（ GB/T 123901990） HPLC法 1. 熒光法原理 硫胺素在堿性鐵氰化鉀溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外線下，噻嘧色素發(fā)出熒光。在給定的條件下，以及沒有其他熒光物質(zhì)干擾時，此熒光之強度與噻嘧色素量成正比，即與溶液中硫胺素量成正比。 本方法適用于各類食物中硫胺素的測定，但不適用于有吸附硫胺素能力的物質(zhì)和含有影響噻嘧色素熒光物質(zhì)的樣品。 本方法的最小檢出限為 。 2. 主要試劑 活性人造浮石 硫胺素標準溶液 3. 儀器設備 熒光分光光度計 MaizelGerson 反應瓶 鹽基交換管 3. 操作步驟 （ 1）試樣處理 樣品勻漿（或粉碎）于低溫冰箱中冷凍保存。 （ 2）提取 ①水解 ②酶解 稱樣 三角瓶 高壓水解 鹽酸溶液 調(diào) pH值 乙酸鈉溶液 酶解 淀粉酶 定容 （ 3）凈化 樣品 熱水 酸性氯化鉀 收集酸性氯化鉀定容至 25ml （ 4）氧化 靜置 → 過濾 → 脫水 反應瓶編號 標準 A瓶 標準 B瓶 樣品 A瓶 樣品 B瓶 加標準液或樣品液 標準液 5ml 標準液 5ml 樣品液 5ml 樣品液 5ml 加氫氧化鈉 3ml —— 3ml —— 加堿性鐵氰化鉀 —— 3ml —— 3ml 加正丁醇 10ml 10ml 10ml 10ml （ 5）熒光強度測定 激發(fā)波長 365nm；發(fā)射波長 435nm； 激發(fā)波狹縫 5nm；發(fā)射波狹縫 5nm。 ? ? ? ?1000100121 ????????mVVSSVCUUXbb二、維生素 B2的測定 維生素 B2又稱核黃素 測定方法主要有：微生物法、熒光法、 HPLC法 GB/T 123911990采用的是微生物法和熒光法。 （一）微生物法 原理： 某一種微生物的生長 (繁殖 )必需某些維生素。例如干酪乳酸桿菌 (Lactobacillus casei，簡稱 .)的生長需要核黃素，培養(yǎng)基中若缺乏這種維生素該細菌便不能生長。在一定條件下，該細菌生長情況，以及它的代謝物乳酸的濃度與培養(yǎng)基中該維生素含量成正比，因此可以用酸度及混濁度的測定法來測定樣品中核黃素的含量。 （二）熒光法 ： 核黃素在 440～ 500nm波長光照射下發(fā)生黃綠色熒光。在稀溶液中其熒光強度與核黃素的濃度成正比。在波長 525nm下測定其熒光強度。試液再加入低亞硫酸鈉 (Na2S2O4)，將核黃素還原為無熒光的物質(zhì)，然后再測定試液中殘余熒光雜質(zhì)的熒光強度，兩者之差即為食品中核黃素所產(chǎn)生的熒光強度。 為使 VB2游離出來，采用需經(jīng)酸解和酶解 為消除干擾，試樣通過氧化處理和柱層析處理。 （ 1）樣品提取 稱樣 三角瓶 高壓水解 鹽酸溶液 調(diào) pH值 氫氧化鈉溶液 酶解 淀粉酶 定容 蛋白酶 （ 2）氧化去雜 樣品提取液 具塞試管 水 雙氧水 冰乙酸 高錳酸鉀 氧化去雜 褪色 標準液按相同方法進行 （ 3）柱層析 樣品液 水 丙酮 乙酸 水混合液 水 收集洗脫液 定容至 10ml *標準液按相 同操作進行 （ 4）熒光測定 ? 激發(fā)光波長 440nm，發(fā)射光波長 525nm，測量樣品管及標準管的 熒光值 。 ? 待樣品及標準的熒光值測量后，在各管的剩余液中加 20%低亞硫酸鈉 溶液，立即混勻，在 20s內(nèi) 測出各管的熒光值，作為各自的 空白值 。 ? ?? ? 1 0 0 01 0 02 ??????? fmDCSBAX
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