維生素與測(cè)定ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-12 13:00本頁(yè)面
【正文】 生素 C對(duì)氧、銅離子敏感，易被氧化。 食品中水溶性維生素的測(cè)定 食品中維生素 B1的測(cè)定 食品中維生素 B2的測(cè)定 食品中維生素 C的測(cè)定 食品中煙酸的測(cè)定 食品中維生素 B6的測(cè)定 一、維生素 B1的測(cè)定 維生素 B1又稱硫胺素、抗神經(jīng)炎素。 測(cè)定方法：比色法 熒光法（ GB/T 123901990） HPLC法 1. 熒光法原理 硫胺素在堿性鐵氰化鉀溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外線下，噻嘧色素發(fā)出熒光。在給定的條件下，以及沒有其他熒光物質(zhì)干擾時(shí)，此熒光之強(qiáng)度與噻嘧色素量成正比，即與溶液中硫胺素量成正比。 本方法適用于各類食物中硫胺素的測(cè)定，但不適用于有吸附硫胺素能力的物質(zhì)和含有影響噻嘧色素?zé)晒馕镔|(zhì)的樣品。 本方法的最小檢出限為 。 2. 主要試劑 活性人造浮石 硫胺素標(biāo)準(zhǔn)溶液 3. 儀器設(shè)備 熒光分光光度計(jì) MaizelGerson 反應(yīng)瓶 鹽基交換管 3. 操作步驟 （ 1）試樣處理 樣品勻漿（或粉碎）于低溫冰箱中冷凍保存。 （ 2）提取 ①水解 ②酶解 稱樣 三角瓶 高壓水解 鹽酸溶液 調(diào) pH值 乙酸鈉溶液 酶解 淀粉酶 定容 （ 3）凈化 樣品 熱水 酸性氯化鉀 收集酸性氯化鉀定容至 25ml （ 4）氧化 靜置 → 過濾 → 脫水 反應(yīng)瓶編號(hào) 標(biāo)準(zhǔn) A瓶 標(biāo)準(zhǔn) B瓶 樣品 A瓶 樣品 B瓶 加標(biāo)準(zhǔn)液或樣品液 標(biāo)準(zhǔn)液 5ml 標(biāo)準(zhǔn)液 5ml 樣品液 5ml 樣品液 5ml 加氫氧化鈉 3ml —— 3ml —— 加堿性鐵氰化鉀 —— 3ml —— 3ml 加正丁醇 10ml 10ml 10ml 10ml （ 5）熒光強(qiáng)度測(cè)定 激發(fā)波長(zhǎng) 365nm；發(fā)射波長(zhǎng) 435nm； 激發(fā)波狹縫 5nm；發(fā)射波狹縫 5nm。 ? ? ? ?1000100121 ????????mVVSSVCUUXbb二、維生素 B2的測(cè)定 維生素 B2又稱核黃素 測(cè)定方法主要有：微生物法、熒光法、 HPLC法 GB/T 123911990采用的是微生物法和熒光法。 （一）微生物法 原理： 某一種微生物的生長(zhǎng) (繁殖 )必需某些維生素。例如干酪乳酸桿菌 (Lactobacillus casei，簡(jiǎn)稱 .)的生長(zhǎng)需要核黃素，培養(yǎng)基中若缺乏這種維生素該細(xì)菌便不能生長(zhǎng)。在一定條件下，該細(xì)菌生長(zhǎng)情況，以及它的代謝物乳酸的濃度與培養(yǎng)基中該維生素含量成正比，因此可以用酸度及混濁度的測(cè)定法來測(cè)定樣品中核黃素的含量。 （二）熒光法 ： 核黃素在 440～ 500nm波長(zhǎng)光照射下發(fā)生黃綠色熒光。在稀溶液中其熒光強(qiáng)度與核黃素的濃度成正比。在波長(zhǎng) 525nm下測(cè)定其熒光強(qiáng)度。試液再加入低亞硫酸鈉 (Na2S2O4)，將核黃素還原為無(wú)熒光的物質(zhì)，然后再測(cè)定試液中殘余熒光雜質(zhì)的熒光強(qiáng)度，兩者之差即為食品中核黃素所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度。 為使 VB2游離出來，采用需經(jīng)酸解和酶解 為消除干擾，試樣通過氧化處理和柱層析處理。 （ 1）樣品提取 稱樣 三角瓶 高壓水解 鹽酸溶液 調(diào) pH值 氫氧化鈉溶液 酶解 淀粉酶 定容 蛋白酶 （ 2）氧化去雜 樣品提取液 具塞試管 水 雙氧水 冰乙酸 高錳酸鉀 氧化去雜 褪色 標(biāo)準(zhǔn)液按相同方法進(jìn)行 （ 3）柱層析 樣品液 水 丙酮 乙酸 水混合液 水 收集洗脫液 定容至 10ml *標(biāo)準(zhǔn)液按相 同操作進(jìn)行 （ 4）熒光測(cè)定 ? 激發(fā)光波長(zhǎng) 440nm，發(fā)射光波長(zhǎng) 525nm，測(cè)量樣品管及標(biāo)準(zhǔn)管的 熒光值 。 ? 待樣品及標(biāo)準(zhǔn)的熒光值測(cè)量后，在各管的剩余液中加 20%低亞硫酸鈉 溶液，立即混勻，在 20s內(nèi) 測(cè)出各管的熒光值，作為各自的 空白值 。 ? ?? ? 1 0 0 01 0 02 ??????? fmDCSBAX
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