功能基因組學ppt課件-資料下載頁
2025-05-12 06:35本頁面
【正文】 RNA形成雙鏈 RNA特異性抑制靶基因的轉錄后表達的現象，存在于從低等的線蟲到人類培養(yǎng)細胞等多種有機體。 RNAi相關技術是研究轉錄后調控的有效工具，可用于功能基因組學研究以及基因治療等臨床用途。 RNAi 研 究 史 十幾年前， Rich Jensen 在矮牽?；ㄖ邪l(fā)現轉基因沉默 七年前， researchers Guo 和 Kemphues 注入反義 RNA及正義鏈 RNA都能抑制線蟲 par1 基因的表達；三年后， Fire等注入雙鏈 RNA到線蟲中發(fā)現比注入單鏈更有效，隨后發(fā)展了通過 RNAi進行線蟲基因敲除的策略。 近年來，顯微注射，基因槍，基因工程手段誘導 RNAi也成為果蠅研究中的反向遺傳學工具。 2022年 Elbashir等 《 Nature》 上首次報道通過 21個核苷酸的 siRNA成功地在哺乳動物培養(yǎng)細胞中誘導特異性基因沉默。隨后，在小鼠等多種細胞中也取得了成功。 RNAi 機制模式圖 ? 核心技術： siRNA（ Small interfering RNA）的設計與合成 ? siRNA的標記 ? siRNA的轉染 ? RNAi的檢測（核酸及蛋白水平） RNA干擾技術 ： 哺乳動物： 2123bp dsRNA 其它生物：更長的片段 dTdT（ UU） （ UU） dTdT siRNA的設計 （選擇 siRNA靶位點） ?從轉錄本 AUG起始密碼子開始，搜尋下游 AA序列，記錄跟每個 AA 3’端相鄰的 19個核苷酸作為候選的 siRNA靶位點；根據 5‘和 3’非翻譯區(qū)（ UTR)及靠近起始密碼子（ 75個堿基之內）等富含調節(jié)蛋白結合位點區(qū)域來設計 siRNA。 ?將候選靶位點與相應的基因組數據庫比較，去掉哪些與其它編碼序列同源的靶序列。 ?設計陰性對照：陰性對照 siRNA應與 siRNA的核苷酸組成相同但沒有與基因組明顯同源的序列。一般通過改變 siRNA核苷酸順序并經同源序列比較確證而得。 siRNA的設計 RNAi技術的應用 ? 功能基因組學 蛋白表達調控，蛋白功能研究 … ? 基因治療 候選治劑；藥物靶位點鑒定 ? 轉錄調控機理研究 RNAi技術應用舉例－功能研究 Anna M. Krichevsky* and Kenh S. Kosik RNAi functions in cultured mammalian neurons PNAS u September 3, 2022 宿主：大鼠皮層和海馬細胞 靶基因：內源： MAP2 /YB1 外源： pEGFP/ dsRed2 報告基因 21nt GFP siRNA 在原代腦皮層神經元中的 RNAi 21nt MAP2 siRNA在神經元中的 RNAi actinbound phalloidin (red）
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