細(xì)胞的研究方法ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-12 04:59本頁(yè)面
【正文】 應(yīng)用價(jià)值 。 一 、 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 二 、 顯微操作術(shù) 三 、 細(xì)胞融合技術(shù) 第三節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù) 一、細(xì)胞培養(yǎng) 活細(xì)胞離體后要 在一定的生理?xiàng)l件下 才能存活和進(jìn)行生理活動(dòng) ， 否則就要死亡 。 因此 ， 要進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng) ，就要盡可能滿(mǎn)足細(xì)胞在 正常體內(nèi)生理狀態(tài)下的各種條件 ，其中 選擇最佳培養(yǎng)基是最關(guān)鍵的因素 。 培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞 幾個(gè)概念 ? 原代細(xì)胞：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。 ? 傳代細(xì)胞：適應(yīng)在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞。 ? 細(xì)胞系：有少數(shù)細(xì)胞能傳 4050代次，仍保持原來(lái)染色體的二倍性和接觸抑制的行為。 ? 永生細(xì)胞系：有少數(shù)細(xì)胞在傳到 50代以后發(fā)生了遺傳突變，帶有了癌細(xì)胞的特點(diǎn)，可能在培養(yǎng)條件下無(wú)限制傳下去的細(xì)胞。 植物細(xì)胞培養(yǎng)最明顯的特點(diǎn)是： ① 可進(jìn)行組織培養(yǎng) ， 由外植體生長(zhǎng)出植株 ； ② 不易無(wú)限傳代和建立細(xì)胞系 。 2. 植物細(xì)胞培養(yǎng) (1) 外植體培養(yǎng) ， 誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織 ： 如果條件適宜 ， 尚可培養(yǎng)出再生植株 。 (2) 懸浮細(xì)胞培養(yǎng) ： 在愈傷組織 培養(yǎng)技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一 種培養(yǎng)技術(shù) 。 植物細(xì)胞培養(yǎng)大體有如下幾種技術(shù) : (3) 原生質(zhì)體培養(yǎng) ： 體細(xì)胞雜交 ， 轉(zhuǎn)基因等 (4) 單倍體培養(yǎng)： 通過(guò) 花藥 或 花粉 培養(yǎng)獲得單倍體植株 。 二、顯微操作技術(shù) 所謂 顯微操作技術(shù) (micromanipulation)就是在顯微鏡下 ， 用顯微操作裝置對(duì)細(xì)胞進(jìn)行解剖手術(shù)和微量注射的技術(shù) 。 現(xiàn)在顯微操作裝置的設(shè)計(jì)越來(lái)越精密，已經(jīng)有可能對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行解剖和注入微量物質(zhì)（如核酸分子片段）。 NT88NEN型顯微操縱儀 (日本 Nikon) 注射吸管 固定吸管 細(xì)胞顯微解剖手術(shù)圖解 三、細(xì)胞融合 真核細(xì)胞通過(guò)介導(dǎo)和培養(yǎng) ， 兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過(guò)程 稱(chēng)為 細(xì)胞融合 (cell fusion)或 細(xì)胞雜交 (cell hybridization)。 ? 基因型相同的細(xì)胞融合成的雜交細(xì)胞稱(chēng)為 同核體(homokaryon)； ? 來(lái)自不同基因型的雜交細(xì)胞則稱(chēng)為 異核體(heterokaryon)。 目前誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有三種： 1. 病毒介導(dǎo)的細(xì)胞融合 （ 如仙臺(tái)病毒 ） 2. 化學(xué)介導(dǎo)的細(xì)胞融合 （ 如 PEG） 3. 電激介導(dǎo)的細(xì)胞融合 ?單克隆抗體技術(shù) ?正常淋巴細(xì)胞 （ 如小鼠脾細(xì)胞 ） 具有分泌抗體的能力 ，但不能長(zhǎng)期培養(yǎng) ， 瘤細(xì)胞 （ 如骨髓瘤 ） 可以在體外長(zhǎng)期培養(yǎng) ， 但不分泌抗體 。 ?于是英國(guó)人 Kohler和 Milstein 1975將兩種細(xì)胞雜交而創(chuàng)立了單克隆抗體技術(shù) ， 獲 1984年諾貝爾獎(jiǎng) 。 HAT篩選 骨髓瘤細(xì)胞 脾細(xì)胞 目的抗原免疫的小鼠 細(xì)胞融合 抗體檢測(cè) 克隆化 大規(guī)模培養(yǎng) HGPRT TK HGPRT TK HGPRT+ TK+ 抗體檢測(cè) 骨髓瘤細(xì)胞系 抗體 克隆 單克隆抗體制備的雜交瘤技術(shù) 免疫學(xué)上的一場(chǎng)革命 次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核苷酸轉(zhuǎn)移酶 本章重點(diǎn) ? 1. 電鏡與普通光學(xué)顯微鏡的成像原理有何異同？ ? 2. 生物大分子定位研究的方法有哪些？ ?謝謝大家?。?
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