紅細胞檢驗的基本方法-資料下載頁
2025-04-30 05:03本頁面
【正文】 現(xiàn)象對不穩(wěn)定血紅蛋白進行篩檢。 參考值： 正常人血紅蛋白液為陰性（ 30分鐘內(nèi)不沉淀） 臨床評價： 不穩(wěn)定血紅蛋白存在時，常于 5分鐘時出現(xiàn)沉 淀， 20分鐘開始出現(xiàn)絨毛狀沉淀。血液中含有 較多 HbF、 HbH、 HbE時也可出現(xiàn)陽性結(jié)果。 原理： 六、熱變性試驗 熱變性試驗（ heat instability test）是根據(jù)不穩(wěn) 定血紅蛋白比正常血紅蛋白更容易遇熱變性， 觀察血紅蛋白液在 50℃ 時是否出現(xiàn)沉淀，對不 穩(wěn)定血紅蛋白進行篩檢。 參考值： 正常人熱沉淀的血紅蛋白＜ 1％ 臨床評價： 血紅蛋白沉淀率增加，說明不穩(wěn)定血紅蛋 白存在。 原理 七、聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測 尿素或?qū)β裙郊姿崮芷茐难t蛋白的空間 結(jié)構(gòu)，血紅蛋白的珠蛋白可被裂解成肽鏈亞 單位，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳可分離出各 肽鏈區(qū)帶。 參考值： 正常血紅蛋白 HbA裂解后出現(xiàn) β 、 HbA、 HbA2 和 α 四條帶。 臨床評價： 本試驗若有異常血紅蛋白肽鏈的區(qū)帶出現(xiàn)， 表示有異常血紅蛋白存在。對珠蛋白生成障 礙性貧血的診斷和鑒別有參考價值。 原理： 八、尿素裂解試驗 尿素將血紅蛋白分子的珠蛋白解離成多肽鏈， 進行醋酸纖維膜電泳分析其肽鏈區(qū)帶。 參考值： 正常人 HbA裂解為兩條肽鏈，在 維膜電泳時，向陽極泳動的為 β 鏈，向陰極 泳動的為 α 鏈。 臨床評價： 異常血紅蛋白存在時，出現(xiàn) β 、 α 鏈區(qū)帶以 外的異常區(qū)帶。 原理： 九、高壓電泳檢測 通過高壓電泳對異常肽鏈裂解的肽段進行分離， 再應(yīng)用紙層析法使各肽段展開，得肽段斑點圖 （指紋圖），對其進行分析可更準確地診斷血 紅蛋白病和研究異常血紅蛋白結(jié)構(gòu)。 參考值： 正常人有正常指紋圖譜 臨床評價： 異常血紅蛋白存在時，出現(xiàn)異常肽段的斑點， 將異常肽段水解后可進行氨基酸序列分析， 確定異常血紅蛋白的結(jié)構(gòu)。 原理： 十、血紅蛋白基因 PCR技術(shù)檢測 應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR）技術(shù)檢測血紅蛋 白基因序列，一般 PCR產(chǎn)物用 DNA印跡法、酶 切法或直接測序等方法進行檢測?？蓹z測出 異常血紅蛋白基因的存在，是純合子還是雜 合子，基因缺陷的部位等。 臨床評價： 血紅蛋白異?；虻臋z測，可在分子水平上 進行血紅蛋白病的診斷和研究。 第七節(jié) PNH的檢驗 一、酸化血清溶血試驗 二、蔗糖溶血試驗 三、蛇毒因子溶血試驗 一、酸化血清溶血試驗 原理 參考值： 正常人：陰性 臨床評價： 本試驗陽性主要見于 PNH，某些自身免疫性血性貧血發(fā)作嚴重時可呈陽性。 酸化血清溶血試驗，也稱 Ham’s test ，即紅細 胞在酸性（ ～ ）的正常血清中孵育， 補體被激活， PNH紅細胞破壞而產(chǎn)生溶血。而 正常紅細胞不被溶解，無溶血現(xiàn)象。 原理： 二、蔗糖溶血試驗 蔗糖溶血試驗（ sucrose hemolysis test）是根據(jù) PNH患者的紅細胞 ,在低離子強度的蔗糖溶液中對補體敏感性增強，經(jīng)孵育，補體與紅細胞膜結(jié)合加強，蔗糖溶液進入紅細胞內(nèi)，導(dǎo)致滲透性溶血而設(shè)計的。 定性試驗：正常為陰性 定量試驗：正常溶血率＜ 5％ 參考值 ： 臨床評價： 陽性或溶血率增加： PNH患者（可作為 PNH的篩選試驗）；自身免疫性溶血性貧血。 假陽性：白血病、骨髓硬化。 原理： 三、蛇素毒因子溶血試驗 蛇毒因子溶血試驗（ venom hemolysis test）采 用從眼鏡蛇毒中提取的一種蛇毒因子（ C3b）， 通過旁路途徑激活補體， PNH患者的紅細胞補體 系統(tǒng)激活后，促使 PNH補體敏感細胞破壞、溶血。 參考值： 正常人溶血率＜ 5％ 臨床評價： 溶血率增加， PNH的可能性大，可反映 PNH Ⅲ 型紅細胞的溶血情況。正常紅細胞、 PNH I型 和 PNH Ⅱ 型等的紅細胞均不發(fā)生溶血。 第八節(jié) 免疫性溶血性貧血的檢驗 抗人球蛋白試驗 原理： 抗人球蛋白試驗 直接 Coombs試驗： 間接 Coombs試驗 : 應(yīng)用抗人球蛋白試劑（抗 IgG/或抗 C3d）與紅細胞表面的 IgG分子結(jié)合，如紅細胞表面存在自身抗體，出現(xiàn)凝集反應(yīng)。 應(yīng)用 Rh(D)陽性 O型正常人紅細胞與受檢血清混合孵育，如血清中存在不完全抗體，紅細胞致敏，再加入抗人球蛋白血清，可出現(xiàn)凝集。 + + + Coombs試驗檢測原理圖 完全抗體 凝集 凝集 致敏紅細胞無凝集 不完全抗體 參考值： 正常人 DAGT/IAGT試驗均為陰性。 臨床評價： 自身免疫性溶血性貧血 冷凝集素綜合癥 新生兒同種免疫性溶血 陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿 藥物性免疫性溶血等 陽性： 冷凝集素試驗 原理： 冷凝集素綜合征的患者血清中存在冷凝集素，為 IgM類完全抗體在低溫時可使自身紅細胞、O型紅細胞 或與受檢者血型相同的紅細胞發(fā)生凝集。凝集反應(yīng)的高峰在 0～ 4℃ ，當溫度回升到 37℃ 時凝集消失。 參考值： 正常人血清抗紅細胞抗原的 IgM冷凝集素效價＜ 1:32。 臨床評價： 冷凝集素綜合征的患者為陽性，效價可達1:1000以上。淋巴瘤、支原體肺炎、瘧疾、流行性感冒等可引起冷凝集素效價繼發(fā)性增高。 謝謝！
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