紅細(xì)胞檢驗(yàn)的基本方法(編輯修改稿)
2025-05-27 05:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ATP糾正物的溶血率＜ ％。 臨床評價(jià)： ① 遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥自身溶血率增加，加入葡萄糖或 ATP后明顯糾正。 ② G－ 6－ PD缺乏癥等戊糖旁路代謝缺陷的病人自身溶血率增加，能被葡萄糖糾正。 ③丙酮酸激酶缺乏癥時(shí)不能利用葡萄糖產(chǎn)生ATP ,其自身溶血率明顯增加，加葡萄糖不能糾正，加 ATP可糾正。 ④獲得性溶血性貧血或自身免疫性溶血時(shí)試驗(yàn)結(jié)果常各有不同，對診斷意義不大。 ⑤本試驗(yàn)不夠敏感和特異，僅對遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥有較大診斷價(jià)值 . 二、自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn) 原理： 三、紅細(xì)胞膜三磷酸腺苷活性測定 Na＋ － K＋ － ATP酶、 Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶和 Mg2＋－ ATP 酶都是紅細(xì)胞膜上的 ATP酶。為測定酶的活性可分別測定酶作用于 ATP的水解產(chǎn)物無機(jī)磷含量，若在基質(zhì)中只加入 Ca2＋ － Mg2＋ －ATP酶可測定 Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶的活性，若在基質(zhì)中加入 Na＋ 、 K＋ 、 Mg2＋ 和 ATP，測定的為 Na＋ － K＋ － ATP酶和 Mg2＋ － ATP酶的共同含量，再在基質(zhì)中加入 Na＋ － K＋ － ATP酶的抑制劑，測定結(jié)果僅為 Mg2＋ － ATP酶活性，兩者的差為 Na＋ － K＋ － ATP酶活性。 參考值 : 紅細(xì)胞膜 Na＋ － K＋ － ATP酶：（ 177。 ） mU／ 109 紅細(xì)胞 Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶： ～ mol／ L－ 1mg 膜蛋白 h－ 1 臨床評價(jià)： 遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥： Na＋ － K＋ － ATP酶活性增加， Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶活性減低。 蠶豆?。?Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶活性降低。 許多藥物作用于紅細(xì)胞時(shí)， Na＋ － K＋ － ATP酶和Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶活性改變。 四、酸化甘油溶血試驗(yàn) 當(dāng)甘油存在于低滲溶液氯化鈉磷酸緩沖液時(shí)， 可阻止其中的水快速進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)，使溶血過 程緩慢。但甘油與膜脂質(zhì)又有親和性，可使膜 脂質(zhì)減少。當(dāng)紅細(xì)胞膜蛋白及膜脂質(zhì)有缺時(shí)， 它們在 解速度快，導(dǎo)致紅細(xì)胞懸液的吸光度降至 50％ 的時(shí)間（ AGLT50）明顯縮短。 參考值： 正常人 AGLT50＞ 290s 臨床評價(jià)： 遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥 AGLT50明顯縮短 （ 25～ 150s）。自身免疫性溶血性貧血、腎 功能衰竭、妊娠等 AGLT50也可縮短。 原理 五、高滲冷溶血試驗(yàn) 在高滲狀態(tài)下，溫度驟然變化影響紅細(xì)胞膜脂質(zhì)的流動性，并可能累及膜磷脂與膜骨架蛋白結(jié)合位點(diǎn)，紅細(xì)胞容易破裂而發(fā)生溶血。當(dāng)膜蛋白缺陷致膜表面積與體積比值降低，溶血率明顯增加。而膜表面積與體積比值增加，溶血率降低。高滲冷溶血試驗(yàn)（ hyperosmotic cold hemolysis test）即測定紅細(xì)胞在不同濃度的高滲緩沖液中，從 37℃ 水浴立即置于 0℃ 水浴一定時(shí)間的最大溶血率。 參考值： 9mmol／ L或 12mmol／ L蔗糖 最大溶血率 ％～ ％ 7mmol／ L蔗糖 最大溶血率 ％～ ％ 臨床評價(jià)： ① 遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥明顯增加。 ②珠蛋白生成障礙性貧血和異常血紅蛋白病明顯降低。 ③自身免疫性溶血性貧血基本正常。 原理： 六、紅細(xì)胞膜蛋白電泳分析 原理： 將制備的紅細(xì)胞膜樣品進(jìn)行 SDS－ PAGE(SDS聚丙烯酰胺凝膠 )電泳，根據(jù)樣品中各蛋白相對分子質(zhì)量的不同，分離得到紅細(xì)胞膜蛋白的電泳圖譜，從而可見各膜蛋白組分百分率。 參考值： 各種膜蛋白組分百分率變化較大，多以正常紅 細(xì)胞膜蛋白電泳圖譜作比較；或以帶 3蛋白為 基準(zhǔn)，各膜蛋白含量以與帶 3蛋白的比例表示。 臨床評價(jià)： 許多溶血性疾病常見紅細(xì)胞膜蛋白異常。各 種膜缺陷疾病如遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥有 收縮蛋白等含量減低或結(jié)構(gòu)異常。某些血紅 蛋白病骨架蛋白等可明顯異常。 第五節(jié) 紅細(xì)胞酶缺陷的檢驗(yàn) 一、高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn) 二、變性珠蛋白小體生成試驗(yàn) 三、葡萄糖－ 6－磷酸脫氫酶熒光斑點(diǎn)試 驗(yàn)和活性測定 四、丙酮酸激酶熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定 五、谷胱甘肽還原酶缺陷檢測 原理： 一、高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn) 在血液中加入亞硝酸鹽使紅細(xì)胞中的亞鐵血紅蛋白變成高鐵血紅蛋白，正常紅細(xì)胞的 G－ 6－PD催化戊糖旁路使 NADP變成 NADPH，其脫的氫通過亞甲藍(lán)試劑的遞氫作用而使高鐵血紅蛋白（ Fe3＋ ）還原成亞鐵血紅蛋白（ Fe2＋ ），通過比色可觀察還原的多少。當(dāng) G－ 6－ PD缺乏時(shí)，高鐵血紅蛋白還原率下降。 參考值： 正常人高鐵血紅蛋白還原率 ≥ 75％ （臍帶血 ≥ 77 ％） 臨床評價(jià)： G－ 6－ PD缺乏時(shí)，高鐵血紅蛋白還原率下降。 中間缺乏（雜合子）為 31％～ 74％，嚴(yán)重缺 乏（半合子或純合子）＜ 30％。 二、變性珠蛋白小體生成試驗(yàn) 原理： 正常人含 5個(gè)及以上珠蛋白小體的紅細(xì)胞， 一般＜ 30％。 G－ 6－ PD缺乏的病人血樣加入乙酰苯肼于 37 ℃ 孵 2～ 4小時(shí)，用煌焦油藍(lán)染色觀察紅細(xì)胞中珠蛋白小體的生成情況，計(jì)算含 5個(gè)及以上珠蛋白小體的紅細(xì)胞的百分率。 參考值： 臨床評價(jià)： G－ 6－ PD缺乏癥常高于 45％，故可作為 G－ 6 － PD缺乏的篩檢試驗(yàn)。但還原型谷胱甘肽缺 乏癥也增高；不穩(wěn)定血紅蛋白病含小體的細(xì) 胞百分率為 75％～ 84％， HbH病和化
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