紅細胞檢驗的基本方法(編輯修改稿)
2025-05-27 05:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ATP糾正物的溶血率＜ ％。 臨床評價： ① 遺傳性球形紅細胞增多癥自身溶血率增加，加入葡萄糖或 ATP后明顯糾正。 ② G－ 6－ PD缺乏癥等戊糖旁路代謝缺陷的病人自身溶血率增加，能被葡萄糖糾正。 ③丙酮酸激酶缺乏癥時不能利用葡萄糖產(chǎn)生ATP ,其自身溶血率明顯增加，加葡萄糖不能糾正，加 ATP可糾正。 ④獲得性溶血性貧血或自身免疫性溶血時試驗結(jié)果常各有不同，對診斷意義不大。 ⑤本試驗不夠敏感和特異，僅對遺傳性球形紅細胞增多癥有較大診斷價值 . 二、自身溶血試驗及其糾正試驗 原理： 三、紅細胞膜三磷酸腺苷活性測定 Na＋ － K＋ － ATP酶、 Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶和 Mg2＋－ ATP 酶都是紅細胞膜上的 ATP酶。為測定酶的活性可分別測定酶作用于 ATP的水解產(chǎn)物無機磷含量，若在基質(zhì)中只加入 Ca2＋ － Mg2＋ －ATP酶可測定 Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶的活性，若在基質(zhì)中加入 Na＋ 、 K＋ 、 Mg2＋ 和 ATP，測定的為 Na＋ － K＋ － ATP酶和 Mg2＋ － ATP酶的共同含量，再在基質(zhì)中加入 Na＋ － K＋ － ATP酶的抑制劑，測定結(jié)果僅為 Mg2＋ － ATP酶活性，兩者的差為 Na＋ － K＋ － ATP酶活性。 參考值 : 紅細胞膜 Na＋ － K＋ － ATP酶：（ 177。 ） mU／ 109 紅細胞 Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶： ～ mol／ L－ 1mg 膜蛋白 h－ 1 臨床評價： 遺傳性球形紅細胞增多癥： Na＋ － K＋ － ATP酶活性增加， Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶活性減低。 蠶豆?。?Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶活性降低。 許多藥物作用于紅細胞時， Na＋ － K＋ － ATP酶和Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶活性改變。 四、酸化甘油溶血試驗 當(dāng)甘油存在于低滲溶液氯化鈉磷酸緩沖液時， 可阻止其中的水快速進入紅細胞內(nèi)，使溶血過 程緩慢。但甘油與膜脂質(zhì)又有親和性，可使膜 脂質(zhì)減少。當(dāng)紅細胞膜蛋白及膜脂質(zhì)有缺時， 它們在 解速度快，導(dǎo)致紅細胞懸液的吸光度降至 50％ 的時間（ AGLT50）明顯縮短。 參考值： 正常人 AGLT50＞ 290s 臨床評價： 遺傳性球形紅細胞增多癥 AGLT50明顯縮短 （ 25～ 150s）。自身免疫性溶血性貧血、腎 功能衰竭、妊娠等 AGLT50也可縮短。 原理 五、高滲冷溶血試驗 在高滲狀態(tài)下，溫度驟然變化影響紅細胞膜脂質(zhì)的流動性，并可能累及膜磷脂與膜骨架蛋白結(jié)合位點，紅細胞容易破裂而發(fā)生溶血。當(dāng)膜蛋白缺陷致膜表面積與體積比值降低，溶血率明顯增加。而膜表面積與體積比值增加，溶血率降低。高滲冷溶血試驗（ hyperosmotic cold hemolysis test）即測定紅細胞在不同濃度的高滲緩沖液中，從 37℃ 水浴立即置于 0℃ 水浴一定時間的最大溶血率。 參考值： 9mmol／ L或 12mmol／ L蔗糖 最大溶血率 ％～ ％ 7mmol／ L蔗糖 最大溶血率 ％～ ％ 臨床評價： ① 遺傳性球形紅細胞增多癥明顯增加。 ②珠蛋白生成障礙性貧血和異常血紅蛋白病明顯降低。 ③自身免疫性溶血性貧血基本正常。 原理： 六、紅細胞膜蛋白電泳分析 原理： 將制備的紅細胞膜樣品進行 SDS－ PAGE(SDS聚丙烯酰胺凝膠 )電泳，根據(jù)樣品中各蛋白相對分子質(zhì)量的不同，分離得到紅細胞膜蛋白的電泳圖譜，從而可見各膜蛋白組分百分率。 參考值： 各種膜蛋白組分百分率變化較大，多以正常紅 細胞膜蛋白電泳圖譜作比較；或以帶 3蛋白為 基準(zhǔn)，各膜蛋白含量以與帶 3蛋白的比例表示。 臨床評價： 許多溶血性疾病常見紅細胞膜蛋白異常。各 種膜缺陷疾病如遺傳性球形紅細胞增多癥有 收縮蛋白等含量減低或結(jié)構(gòu)異常。某些血紅 蛋白病骨架蛋白等可明顯異常。 第五節(jié) 紅細胞酶缺陷的檢驗 一、高鐵血紅蛋白還原試驗 二、變性珠蛋白小體生成試驗 三、葡萄糖－ 6－磷酸脫氫酶熒光斑點試 驗和活性測定 四、丙酮酸激酶熒光斑點試驗和活性測定 五、谷胱甘肽還原酶缺陷檢測 原理： 一、高鐵血紅蛋白還原試驗 在血液中加入亞硝酸鹽使紅細胞中的亞鐵血紅蛋白變成高鐵血紅蛋白，正常紅細胞的 G－ 6－PD催化戊糖旁路使 NADP變成 NADPH，其脫的氫通過亞甲藍試劑的遞氫作用而使高鐵血紅蛋白（ Fe3＋ ）還原成亞鐵血紅蛋白（ Fe2＋ ），通過比色可觀察還原的多少。當(dāng) G－ 6－ PD缺乏時，高鐵血紅蛋白還原率下降。 參考值： 正常人高鐵血紅蛋白還原率 ≥ 75％ （臍帶血 ≥ 77 ％） 臨床評價： G－ 6－ PD缺乏時，高鐵血紅蛋白還原率下降。 中間缺乏（雜合子）為 31％～ 74％，嚴(yán)重缺 乏（半合子或純合子）＜ 30％。 二、變性珠蛋白小體生成試驗 原理： 正常人含 5個及以上珠蛋白小體的紅細胞， 一般＜ 30％。 G－ 6－ PD缺乏的病人血樣加入乙酰苯肼于 37 ℃ 孵 2～ 4小時，用煌焦油藍染色觀察紅細胞中珠蛋白小體的生成情況，計算含 5個及以上珠蛋白小體的紅細胞的百分率。 參考值： 臨床評價： G－ 6－ PD缺乏癥常高于 45％，故可作為 G－ 6 － PD缺乏的篩檢試驗。但還原型谷胱甘肽缺 乏癥也增高；不穩(wěn)定血紅蛋白病含小體的細 胞百分率為 75％～ 84％， HbH病和化
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