【正文】 身抗體時，患者一般均有些貧血或溶血癥狀。溫自身抗體可分為兩類 :大多數(shù)情況下為 lgG類溫自身抗體，極少數(shù)情況下也會存在 IgM性質的溫自身抗體 。 紅細胞血型檢測 61 第七節(jié) 吸收放射試驗 （二）吸收實驗 冷抗體在 4℃ 反應最強，通常用冷吸收技術（自身抗體用自身紅細胞吸收；同種抗體用對應紅細胞吸收）。 IgM抗體通常在 4℃ 條件下比 22℃ 或 37℃ 更容易吸收，且容易完全吸收。 IgG抗體通常在 37 ℃ 的吸收效果最好，但難以完全吸收。 應用范圍： ① 自身冷抗體的吸收②其他冷抗體的吸收 應用范圍： ① 自身冷抗體的吸收②其他冷抗體的吸收 紅細胞血型檢測 62 第七節(jié) 吸收放射試驗 （三）放散實驗 放散實驗是把結合到紅細胞膜上的抗體解離下來，用于其他目的。通過放散實驗得到的含有或不含有抗體的溶液稱為放散液。 ※ 放散的目的： 得到紅細胞上致敏的抗體或沒有抗體吸附的紅細胞，前者得到的是自身抗體，用于自身吸收；后者得到的是紅細胞，用于血型鑒定和交叉配血 。 ※ 放散的方法： 熱放散技術、乙醚放散技術、磷酸氯喹放散技術、凍融放散技術、檸檬酸放散技術、二甲苯放散技術等。 紅細胞血型檢測 63 第七節(jié) 吸收放射試驗 167。 應用范圍 ABO抗體的放散（新生兒溶血病實驗） 167。 注意事項 溫度過高，抗體可能變性；溫度過低，容易使 抗體從紅細胞上解離不完全 167。 乙醚為有機溶劑，可以破壞紅細胞膜，解離 IgG抗體，該方法制備的放散液，抗體回收率高。 167。 適用范圍 主要用于紅細胞上的各種 IgG抗體的擴散。 167。 主要用于得到?jīng)]有任何抗體附著的紅細胞。此方法不能將補體從紅細 胞膜上解離下來。 紅細胞血型檢測 64 第七節(jié) 吸收放射試驗 167。 適用范圍 ABO抗體的放散，如新生兒溶血病的相關檢測實驗。 167。 適用范圍 用于解離紅細胞膜上致敏的 IgG抗體對紅細胞進行抗原 的鑒定，但 Kell系統(tǒng)的鑒定除外。 167。 注意事項 該方法可破壞 Kell系統(tǒng)抗原，特別是 K抗原，因此本方法 放散后的細胞不能進行 Kll系統(tǒng)定型試驗。 紅細胞血型檢測 65 第七節(jié) 吸收放射試驗 （四）吸收放散試驗的應用 ☆ 證實存在于紅細胞上的若抗原 ☆分離、鑒定混合液體 ☆除去血清中不需要的抗體 ☆濃縮低效價抗體 ☆核實抗體特異性 ☆利用吸收放散技術鑒定引起新生溶血病和免疫性輸血反應的抗體 ☆研究鑒別免疫性溶血性貧血的抗體 紅細胞血型檢測 66 第八節(jié) 凝集抑制試驗 一、 概述： 抗體能與有相應抗原的紅細胞發(fā)生特異性凝集，體液中的可溶性抗原物質能與該抗體發(fā)生特異的中和，抑制了抗體凝集紅細胞的作用。用這種可溶性物質來抑制抗體與紅細胞凝集的試驗，稱為凝集抑制試驗。常用于 ABH或 Lewis分泌狀態(tài)的檢查，幫助 ABO亞型的確認以及特殊情況下（紅細胞標本完全溶血） ABO血型的鑒定。 紅細胞血型檢測 67 第八節(jié) 凝集抑制試驗 二、抑制物處理及抗體標化 ☆收集液體 唾液標本作為抑制物，煮沸使酶失活。 ☆標化人源抗血清 抗體需通過倍比稀釋，找出可也凝集紅細胞至“ ﹢﹢﹢ ” 的最高稀釋度，并按照該稀釋度進行稀釋。 紅細胞血型檢測 68 第八節(jié) 凝集抑制試驗 三、唾液中可溶性 ABH血型物質的檢測 （一）結果分析 ☆ 陰性對照管的凝集強度一般為 ﹢﹢﹢ ～ ﹢﹢﹢ ，陽性 對照管的凝集強度應為 ﹣ ，鹽水對照管凝集強度硬度 與相應的唾液測定管。 ☆ 在 3排試管中任何一管紅細胞不凝集，均表明檢測出唾 液中存在相應的血型物質。 ☆ 稀釋后的效價管可導致紅細胞凝集，最高稀釋倍數(shù)的倒 數(shù)即為唾液中血型物質的效價。 紅細胞血型檢測 69 第八節(jié) 凝集抑制試驗 四、血型物質的應用 （一） IgM抗體的中和 適用范圍 ※ 嘗試用于 IgG抗 A和（或）抗 B效價的測定 ※ ABO血型抗體的輔助鑒定 （二）特異性抗體的確定 適用范圍 ※ 用已知的血型物質來檢測未知抗體的特異性 紅細胞血型檢測 70 第九節(jié) 紅細胞血型分子生物學檢測 一、 紅細胞血型分子生物學檢測技術 隨著分子生物學技術的發(fā)展，檢測基因結構和突變的方法不斷涌新。尤其是 PCR技術問世后，各種與 PCR相結合的檢測技術進一步推動了基因研究的發(fā)展。分子生物學技術應用與紅細胞血型的檢測，使紅細胞血型分析的技術飛越了一個嶄新的階段。 紅細胞血型分子生物學檢測的的方法有 ： PCRSSP技術、 PCRSSOP技術、 PCRRFLP技術、 PCRRDB技術、 PCRDNA測序、基因芯片、 PCR指紋圖等。 紅細胞血型檢測 71 第九節(jié) 紅細胞血型分子生物學檢測 ※ PCRSSP即序列特異性引物引導的 PCR反應 ※ PCRSSOP即序列特異性寡核苷酸探針 ※ PCRSSCP即單鏈構象多態(tài)性 ※ PCRRFLP即限制性片段長度多態(tài)性 ※ PCRRBD即反向點雜交 ※ PCRDNA測序 ※ 液相芯片法 又稱懸浮點陣技術、 xMAP（即靈活的多元分析平臺）、多元流式熒光微球檢測技術。 紅細胞血型檢測 72 第九節(jié) 紅細胞血型分子生物學檢測 二、應用 ★ ABO疑難血型的鑒定 ★發(fā)現(xiàn) ABO血型新等位基因 ★對于 ABO基因突變的研究 ★新生兒溶血?。?HDN）的輔助診斷 ★某些疾病的病理研究 ★法醫(yī)個體識別 紅細胞血型檢測 73 第九節(jié) 紅細胞血型分子生物學檢測 分子生物學檢測血型技術的應用，使血型分析達到了更精細的水平，并因此發(fā)現(xiàn)了更多的血型的多的血型的多態(tài)性。分子生物學檢測血型技術與傳統(tǒng)的血清學技術比較，優(yōu)點是試劑由化學合成，易于獲得和標準化，取材容易，無需新鮮血樣而僅需微量樣品等，現(xiàn)已成為血清學方法的獲得者和競爭者。 對小量含 DNA的任何組織樣品，用分子生物學分型技術對紅細胞抗原 den基因型做鑒定，不受血清中自身抗體、不規(guī)則抗體以及疾病和假、弱凝集的影響，對保證安全輸血有著重要意義。 紅細胞血型檢測 74