【正文】 身抗體時(shí)，患者一般均有些貧血或溶血癥狀。溫自身抗體可分為兩類 :大多數(shù)情況下為 lgG類溫自身抗體，極少數(shù)情況下也會(huì)存在 IgM性質(zhì)的溫自身抗體 。 紅細(xì)胞血型檢測 61 第七節(jié) 吸收放射試驗(yàn) （二）吸收實(shí)驗(yàn) 冷抗體在 4℃ 反應(yīng)最強(qiáng)，通常用冷吸收技術(shù)（自身抗體用自身紅細(xì)胞吸收；同種抗體用對應(yīng)紅細(xì)胞吸收）。 IgM抗體通常在 4℃ 條件下比 22℃ 或 37℃ 更容易吸收，且容易完全吸收。 IgG抗體通常在 37 ℃ 的吸收效果最好，但難以完全吸收。 應(yīng)用范圍： ① 自身冷抗體的吸收②其他冷抗體的吸收 應(yīng)用范圍： ① 自身冷抗體的吸收②其他冷抗體的吸收 紅細(xì)胞血型檢測 62 第七節(jié) 吸收放射試驗(yàn) （三）放散實(shí)驗(yàn) 放散實(shí)驗(yàn)是把結(jié)合到紅細(xì)胞膜上的抗體解離下來，用于其他目的。通過放散實(shí)驗(yàn)得到的含有或不含有抗體的溶液稱為放散液。 ※ 放散的目的： 得到紅細(xì)胞上致敏的抗體或沒有抗體吸附的紅細(xì)胞，前者得到的是自身抗體，用于自身吸收；后者得到的是紅細(xì)胞，用于血型鑒定和交叉配血 。 ※ 放散的方法： 熱放散技術(shù)、乙醚放散技術(shù)、磷酸氯喹放散技術(shù)、凍融放散技術(shù)、檸檬酸放散技術(shù)、二甲苯放散技術(shù)等。 紅細(xì)胞血型檢測 63 第七節(jié) 吸收放射試驗(yàn) 167。 應(yīng)用范圍 ABO抗體的放散（新生兒溶血病實(shí)驗(yàn)） 167。 注意事項(xiàng) 溫度過高，抗體可能變性；溫度過低，容易使 抗體從紅細(xì)胞上解離不完全 167。 乙醚為有機(jī)溶劑，可以破壞紅細(xì)胞膜，解離 IgG抗體，該方法制備的放散液，抗體回收率高。 167。 適用范圍 主要用于紅細(xì)胞上的各種 IgG抗體的擴(kuò)散。 167。 主要用于得到?jīng)]有任何抗體附著的紅細(xì)胞。此方法不能將補(bǔ)體從紅細(xì) 胞膜上解離下來。 紅細(xì)胞血型檢測 64 第七節(jié) 吸收放射試驗(yàn) 167。 適用范圍 ABO抗體的放散，如新生兒溶血病的相關(guān)檢測實(shí)驗(yàn)。 167。 適用范圍 用于解離紅細(xì)胞膜上致敏的 IgG抗體對紅細(xì)胞進(jìn)行抗原 的鑒定，但 Kell系統(tǒng)的鑒定除外。 167。 注意事項(xiàng) 該方法可破壞 Kell系統(tǒng)抗原，特別是 K抗原，因此本方法 放散后的細(xì)胞不能進(jìn)行 Kll系統(tǒng)定型試驗(yàn)。 紅細(xì)胞血型檢測 65 第七節(jié) 吸收放射試驗(yàn) （四）吸收放散試驗(yàn)的應(yīng)用 ☆ 證實(shí)存在于紅細(xì)胞上的若抗原 ☆分離、鑒定混合液體 ☆除去血清中不需要的抗體 ☆濃縮低效價(jià)抗體 ☆核實(shí)抗體特異性 ☆利用吸收放散技術(shù)鑒定引起新生溶血病和免疫性輸血反應(yīng)的抗體 ☆研究鑒別免疫性溶血性貧血的抗體 紅細(xì)胞血型檢測 66 第八節(jié) 凝集抑制試驗(yàn) 一、 概述： 抗體能與有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞發(fā)生特異性凝集，體液中的可溶性抗原物質(zhì)能與該抗體發(fā)生特異的中和，抑制了抗體凝集紅細(xì)胞的作用。用這種可溶性物質(zhì)來抑制抗體與紅細(xì)胞凝集的試驗(yàn)，稱為凝集抑制試驗(yàn)。常用于 ABH或 Lewis分泌狀態(tài)的檢查，幫助 ABO亞型的確認(rèn)以及特殊情況下（紅細(xì)胞標(biāo)本完全溶血） ABO血型的鑒定。 紅細(xì)胞血型檢測 67 第八節(jié) 凝集抑制試驗(yàn) 二、抑制物處理及抗體標(biāo)化 ☆收集液體 唾液標(biāo)本作為抑制物，煮沸使酶失活。 ☆標(biāo)化人源抗血清 抗體需通過倍比稀釋，找出可也凝集紅細(xì)胞至“ ﹢﹢﹢ ” 的最高稀釋度，并按照該稀釋度進(jìn)行稀釋。 紅細(xì)胞血型檢測 68 第八節(jié) 凝集抑制試驗(yàn) 三、唾液中可溶性 ABH血型物質(zhì)的檢測 （一）結(jié)果分析 ☆ 陰性對照管的凝集強(qiáng)度一般為 ﹢﹢﹢ ～ ﹢﹢﹢ ，陽性 對照管的凝集強(qiáng)度應(yīng)為 ﹣ ，鹽水對照管凝集強(qiáng)度硬度 與相應(yīng)的唾液測定管。 ☆ 在 3排試管中任何一管紅細(xì)胞不凝集，均表明檢測出唾 液中存在相應(yīng)的血型物質(zhì)。 ☆ 稀釋后的效價(jià)管可導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集，最高稀釋倍數(shù)的倒 數(shù)即為唾液中血型物質(zhì)的效價(jià)。 紅細(xì)胞血型檢測 69 第八節(jié) 凝集抑制試驗(yàn) 四、血型物質(zhì)的應(yīng)用 （一） IgM抗體的中和 適用范圍 ※ 嘗試用于 IgG抗 A和（或）抗 B效價(jià)的測定 ※ ABO血型抗體的輔助鑒定 （二）特異性抗體的確定 適用范圍 ※ 用已知的血型物質(zhì)來檢測未知抗體的特異性 紅細(xì)胞血型檢測 70 第九節(jié) 紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測 一、 紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測技術(shù) 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，檢測基因結(jié)構(gòu)和突變的方法不斷涌新。尤其是 PCR技術(shù)問世后，各種與 PCR相結(jié)合的檢測技術(shù)進(jìn)一步推動(dòng)了基因研究的發(fā)展。分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用與紅細(xì)胞血型的檢測，使紅細(xì)胞血型分析的技術(shù)飛越了一個(gè)嶄新的階段。 紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測的的方法有 ： PCRSSP技術(shù)、 PCRSSOP技術(shù)、 PCRRFLP技術(shù)、 PCRRDB技術(shù)、 PCRDNA測序、基因芯片、 PCR指紋圖等。 紅細(xì)胞血型檢測 71 第九節(jié) 紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測 ※ PCRSSP即序列特異性引物引導(dǎo)的 PCR反應(yīng) ※ PCRSSOP即序列特異性寡核苷酸探針 ※ PCRSSCP即單鏈構(gòu)象多態(tài)性 ※ PCRRFLP即限制性片段長度多態(tài)性 ※ PCRRBD即反向點(diǎn)雜交 ※ PCRDNA測序 ※ 液相芯片法 又稱懸浮點(diǎn)陣技術(shù)、 xMAP（即靈活的多元分析平臺(tái)）、多元流式熒光微球檢測技術(shù)。 紅細(xì)胞血型檢測 72 第九節(jié) 紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測 二、應(yīng)用 ★ ABO疑難血型的鑒定 ★發(fā)現(xiàn) ABO血型新等位基因 ★對于 ABO基因突變的研究 ★新生兒溶血?。?HDN）的輔助診斷 ★某些疾病的病理研究 ★法醫(yī)個(gè)體識別 紅細(xì)胞血型檢測 73 第九節(jié) 紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測 分子生物學(xué)檢測血型技術(shù)的應(yīng)用，使血型分析達(dá)到了更精細(xì)的水平，并因此發(fā)現(xiàn)了更多的血型的多的血型的多態(tài)性。分子生物學(xué)檢測血型技術(shù)與傳統(tǒng)的血清學(xué)技術(shù)比較，優(yōu)點(diǎn)是試劑由化學(xué)合成，易于獲得和標(biāo)準(zhǔn)化，取材容易，無需新鮮血樣而僅需微量樣品等，現(xiàn)已成為血清學(xué)方法的獲得者和競爭者。 對小量含 DNA的任何組織樣品，用分子生物學(xué)分型技術(shù)對紅細(xì)胞抗原 den基因型做鑒定，不受血清中自身抗體、不規(guī)則抗體以及疾病和假、弱凝集的影響，對保證安全輸血有著重要意義。 紅細(xì)胞血型檢測 74