【正文】 第三節(jié) 酶處理實(shí)驗(yàn)技術(shù) 結(jié)果的判斷 （ 1）陽性對照管凝集，陰性對照管凝集，被檢管凝集為陽 性，不出現(xiàn)凝集判定為陰性。 紅細(xì)胞血型檢測 28 四、交叉配血試驗(yàn) （一）要求和內(nèi)容 交叉配血的要求： 主側(cè)配血要求： 絕對不可以有凝集或溶血現(xiàn)象。 紅細(xì)胞血型檢測 21 三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定 二、不規(guī)則抗體的篩查方法 抗體篩選試驗(yàn)的原則是讓受檢的血清與已知血型的試劑紅 細(xì)胞即篩選紅細(xì)胞起反應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)在 37℃ 中有反應(yīng)的抗體 1. 鹽水介質(zhì)法：主要用于 IgM類抗體的篩查。 ? 3)標(biāo)本抗凝不當(dāng)，受檢過程中出現(xiàn)凝血或小的纖維蛋白凝塊，誤判為陽性。 8)紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象：紅細(xì)胞因遺傳或獲得性的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。 (1)定型方法：正、反定型的試管離心方法目前仍被認(rèn)為是最可信賴的 ABO定型方法 。ABO血型和 RhD血型定型；紅細(xì)胞同種抗體篩查和堅(jiān)定；交叉配血試驗(yàn)；血小板輸注前的抗體檢查和配合試驗(yàn)；不規(guī)則抗體的篩選和鑒定；交叉配血結(jié)果的報(bào)告和發(fā)血等。 A型人血清中含有抗 B抗體， B型人血清中含有抗 A抗體， O型人血清中含有抗 A抗體和抗 B抗體， AB型人血清中不含 ABO抗體。 3)紅細(xì)胞致敏 ：受免疫球蛋白致敏的紅細(xì)胞，在含高蛋白介質(zhì)的試劑中，可發(fā)生凝集。 Rh系統(tǒng)是最為復(fù)雜得多一個(gè)系統(tǒng)，涉及臨床的主要有 D、C、 c、 E、 e五個(gè)抗原，其中 D抗原的免疫原性最強(qiáng) ，僅次于 A或 B抗原。 ? 若 D人群作為獻(xiàn)血者按照 RhD陽性對待，其血液只能給 Rh陽性受血者輸注；作為受血者按照 RhD陰性對待，只能接受 RhD陰性血液。 紅細(xì)胞血型檢測 23 三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定 抗體鑒定試驗(yàn)結(jié)果的解釋及處理： ，確定為單一抗體或無法確定為單一抗體，應(yīng)加以鑒別。是輸血 前檢驗(yàn)最常用的試驗(yàn)方法。 3. 被檢標(biāo)本需用 EDTA抗凝，避免出現(xiàn)假陽性；標(biāo)本不宜久置，防止紅細(xì)胞上已致敏的抗體游離到血漿中，造成假陰性或陽性程度降低。 如 Rh其他抗原（ CcEe）定型 三、特征及優(yōu)點(diǎn) 結(jié)果清晰明確 ，可重復(fù)性強(qiáng)。 IgM抗體通常在 4℃ 條件下比 22℃ 或 37℃ 更容易吸收，且容易完全吸收。 適用范圍 ABO抗體的放散，如新生兒溶血病的相關(guān)檢測實(shí)驗(yàn)。 紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測的的方法有 ： PCRSSP技術(shù)、 PCRSSOP技術(shù)、 PCRRFLP技術(shù)、 PCRRDB技術(shù)、 PCRDNA測序、基因芯片、 PCR指紋圖等。 ☆ 稀釋后的效價(jià)管可導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集，最高稀釋倍數(shù)的倒 數(shù)即為唾液中血型物質(zhì)的效價(jià)。 167。 ※ 溫自身抗體 ： 溫自身抗體是指在 37℃ 條件下能和自身紅細(xì)胞反應(yīng)的抗體。 ，對缺乏唾液酸的細(xì)胞 （如： T細(xì)胞及 B細(xì)胞）無作用。 紅細(xì)胞血型檢測 46 第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù) 間接抗球蛋白試驗(yàn)： （ 1）陽性對照管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，陰性對照管不呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，被檢管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)為陽性結(jié)果，表示被檢者血 清中含有抗體。 （ 2）自身對照試驗(yàn)陽性：受血者血清內(nèi)可能有自身抗體或 同時(shí)存在不規(guī)則抗體。 紅細(xì)胞血型檢測 22 三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定 5. 微柱凝膠卡式檢測法 三、不規(guī)則抗體的鑒定 抗體篩選試驗(yàn)用的試劑篩選紅細(xì)胞，通常是 2或 3個(gè)人份的O型紅細(xì)胞成為一套試劑，每套試劑篩選紅細(xì)胞中至少有以下常見的抗原： D、 C、 E、 c、 e、 M、 N，條件不足的實(shí)驗(yàn)室不一定具備 Lua、 V、 Cw、 Kpa、 Jsa 類的抗原。 ? 4)離心后重懸細(xì)胞扣時(shí)，搖動(dòng)用力過度，搖散微弱的凝集。 ? 15)藥物等因素：藥物、右旋糖醉及靜脈注射某些造影劑可引起紅細(xì)胞凝集或類似凝集。有些工作者在定型試驗(yàn)中，常規(guī)地選擇應(yīng)用抗 AB抗血清，以避免錯(cuò)誤地把弱反應(yīng)性 A或 B型紅細(xì)胞分類為 O型。 3. 受血者配血試驗(yàn)對的血液標(biāo)本必須是輸血前 3天采集的。 如果有輸血史，這有必要進(jìn)一步了解最后一次輸血的日期，若 3個(gè)月內(nèi)輸過血，那么供血者的紅細(xì)胞沒有完全代謝消失，可能依然存在于血液循環(huán)中，導(dǎo)致血型定型試驗(yàn)中出現(xiàn)混合凝集的結(jié)果。 第四，血清必須通過 HIV， HCV， HBV等檢查或經(jīng)病毒滅活。 12)異常的血漿蛋白：受檢者血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例和高濃度的纖維蛋白原等導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象。 紅細(xì)胞血型檢測 18 二、受血者和供血者 ABO和 Rh定型 ? (2)可能出現(xiàn)假陰性的原因 ? 1)受檢細(xì)胞懸液濃度太高，與抗血清比例失調(diào)。 4. 酶法：能暴露隱蔽抗原，增強(qiáng)一些稀有抗原檢測。 盡可能確保對人和一個(gè)病人來說，輸了供血者的血不會引起有害反應(yīng)，并且使紅細(xì)胞在輸注后能保持最長的存活時(shí)間。 紅細(xì)胞血型檢測 41 第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù) 抗球蛋白試驗(yàn)原理圖 紅細(xì)胞血型檢測 42 第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù) 二、分類及應(yīng)用 抗球蛋白試驗(yàn) 直接 間接 致敏紅細(xì)胞的不完全抗體、補(bǔ)體 血清中的不完全抗體 應(yīng)用 HDN的診斷、 AIHADE的診斷、藥物誘發(fā)型溶血病的診斷 交叉配血及血型鑒定、器官移植、等 紅細(xì)胞血型檢測 43 第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù) 抗球蛋白配血方法 患者 獻(xiàn)血者 主側(cè) 次側(cè) 37 ℃ ? 37℃ 水浴 30分鐘 三洗 紅細(xì)胞血型檢測 44 第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù) 抗球蛋白方法配血方法 加抗球蛋白 離心 看結(jié)果 陽性 陰性 紅細(xì)胞血型檢測 45 第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù) 三、 結(jié)果的判斷 直接抗球蛋白試驗(yàn)： （ 1）陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，被檢管凝集， 判定為陽性。 一、實(shí)驗(yàn)原理 凝聚胺（ polymatching）法首先利用低離子介質(zhì)降低溶液的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，促進(jìn)血清（漿）中的抗體與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入帶亞電荷的高價(jià)陽離子多聚物 凝聚胺溶液，中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，縮短細(xì)胞間距，形成可逆的非特異性聚集，并使 IgG型抗體直接凝集紅細(xì)胞。這種實(shí)驗(yàn)稱為吸收放散實(shí)驗(yàn)。 乙醚為有機(jī)溶劑，可以破壞紅細(xì)胞膜，解離 IgG抗體，該方法制備的放散液，抗體回收率高。 ☆標(biāo)化人源抗血清 抗體需通過倍比稀釋，找出可也凝集紅細(xì)胞至“ ﹢﹢﹢ ” 的最高稀