【正文】 丙烯酰胺凝膠電泳 ，常用于蛋白質(zhì)分子量的測定。 ? 等電聚焦電泳 ，通過蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的差異而分離蛋白質(zhì)的電泳方法。 ? 雙向凝膠電泳 ，蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技術(shù)。 ?幾種重要的蛋白質(zhì)電泳： 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 四 、應(yīng)用相分配或親和原理可將蛋白質(zhì)進(jìn)行層析分離 待分離蛋白質(zhì)溶液（流動相）經(jīng)過一個固態(tài)物質(zhì)（固定相）時，根據(jù)溶液中待分離的蛋白質(zhì)顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質(zhì)組分在兩相中反復(fù)分配，并以不同速度流經(jīng)固定相而達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的 。 ?層析 (chromatography) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) ? 離子交換層析： 利用各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同進(jìn)行分離。 ? 凝膠過濾 (gel filtration)又稱分子篩層析，利用各蛋白質(zhì)分子大小不同分離。 ?蛋白質(zhì)分離常用的層析方法 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 五 、利用蛋白質(zhì)顆粒沉降行為不同可進(jìn)行超速離心分離 ?超速離心法 (ultracentrifugation)既可以用來分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測定蛋白質(zhì)的分子量 。 ? 蛋白質(zhì)在離心場中的行為用 沉降系數(shù)(sedimentation coefficient, S)表示 ,沉降系數(shù)與蛋白質(zhì)的密度和形狀相關(guān) 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 因?yàn)槌两迪禂?shù) S大體上和分子量成正比關(guān)系 ，故可應(yīng)用超速離心法測定蛋白質(zhì)分子量 ， 但對分子形狀的高度不對稱的大多數(shù)纖維狀蛋白質(zhì)不適用 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) ──────────────────────蛋白質(zhì) 分子量 S──────────────────────細(xì)胞色素 C( 牛心 ) 1 3 3 7 0 1 . 1 7肌紅蛋白（馬心） 1 6 9 0 0 2 . 0 4糜蛋白酶原（牛胰） 2 3 2 4 0 2 . 5 4β 乳球蛋白（羊奶） 3 7 1 0 0 2 . 9 0血紅蛋白（人） 6 4 5 0 0 4 . 5 0清白蛋白（人） 6 8 5 0 0 4 . 6 0過氧化氫酶（馬肝） 2 4 7 5 0 0 1 1 . 3 0脲酶（刀豆） 4 8 2 7 0 0 1 8 . 6 0纖維蛋白原 3 3 9 7 0 0 7 . 6 0蛋白質(zhì)的分子量和沉降系數(shù)目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 六、用化學(xué)或反向遺傳學(xué)方法可分析或演繹多肽鏈的氨基酸序列 分析已純化蛋白質(zhì)的氨基酸殘基組成（離子交換層析） 測定多肽鏈的氨基末端與羧基末端為何種氨基酸殘基 把肽鏈水解成片段，分別進(jìn)行分析 測定各肽段的氨基酸排列順序，一般采用 Edman降解法 ?一般需用數(shù)種水解法，并分析出各肽段中的氨基酸順序，然后經(jīng)過組合排列對比，最終得出完整肽鏈中氨基酸順序的結(jié)果。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 化學(xué)法 溶解法 二硝基氟苯法（ DNP法） 肼解法 二甲基氨基萘磺酰氯法（ Dansyl氯法）還原成氨基醇法 亮氨酸氨肽酶法 細(xì)胞外氨肽酶法 羧肽酶 A法 羧肽酶 B法 羧肽酶 C法 氨基酸和肽的末端測定法 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) ?通過核酸來推演蛋白質(zhì)中的氨基酸序列： 按照三聯(lián)密碼的原則推演出氨基酸的序列 分離編碼蛋白質(zhì)的基因 測定 DNA序列 排列出 mRNA序列 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 七、應(yīng)用物理學(xué)、生物信息學(xué)原理可進(jìn)行蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)測定或預(yù)測 通常采用 圓二色光譜 (circular dichroism，CD)測定溶液狀態(tài)下的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)含量 。 ?螺旋的 CD峰有 222nm處的負(fù)峰 、 208nm處的負(fù)峰和 198nm處的正峰 3個成分；而 ?折疊的 CD譜不很固定 。 （一）圓二色光譜可估算蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)比例 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) X射線衍射法 (Xray diffraction)和核磁共振技術(shù) (nuclear magic resonance, NMR)是研究蛋白質(zhì)三維空間結(jié)構(gòu)最準(zhǔn)確的方法 。 （二） X射線衍射法和核磁共振技術(shù)用于 三維空間結(jié)構(gòu)分析 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) * 用分子力學(xué) 、 分子動力學(xué)的方法 ， 根據(jù)物理化學(xué)的基本原理 ， 從理論上計算蛋白質(zhì)分子的空間結(jié)構(gòu) 。 （ 三 ） 根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸序列預(yù)測三維空間 結(jié)構(gòu) * 通過對已知空間結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析 ， 找出一級結(jié)構(gòu)與空間結(jié)構(gòu)的關(guān)系 ， 總結(jié)出規(guī)律 ， 用于新的蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的預(yù)測 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 第六節(jié) 血漿蛋白質(zhì) Plasma Proteins 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 一、采用電泳法可將血漿蛋白質(zhì)分成若干組分 電泳法是分離、分析血漿蛋白質(zhì)的主要方法。采用醋酸纖維素膜電泳，可將血漿蛋白質(zhì)分為 5個組分。 按泳動快慢依次為：清蛋白、 α α β和 γ球蛋白（ globulin）。而采用聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE)可將血漿蛋白分離出 100種以上。 A ? ? 白蛋白 ?1 ?2 ? ? 血漿蛋白的電泳圖 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 血漿蛋白質(zhì)主要成分及功能 功 能 血漿蛋白質(zhì) 抗蛋白酶 抗凝乳蛋白酶、 α1抗胰蛋白酶、 α2巨球蛋白、抗凝血酶 血液凝固 各種凝血因子、纖維蛋白原 酶 血液中功能酶：如凝血因子、膽堿酯酶 組織細(xì)胞漏出的酶：如轉(zhuǎn)氨酶 激素 紅細(xì)胞生成素 免疫功能 γ免疫球蛋白、補(bǔ)體蛋白、 β2微球蛋白 參與炎癥反應(yīng) 急性時相反應(yīng)蛋白：如 C反應(yīng)蛋白、 α1酸性糖蛋白（血清類黏蛋白） 腫瘤胚胎性蛋白 α1甲胎蛋白（ AFP） 轉(zhuǎn)運(yùn)或結(jié)合蛋白 清蛋白 —— 結(jié)合、運(yùn)輸膽紅素、非酯化脂肪酸、離子（ Ca2＋ ），金屬離子（ Cu2＋ 、Zn2＋ ）、正鐵血紅素、類固醇激素和各種藥物分子 血漿銅藍(lán)蛋白 —— 含有 Cu2＋ （但 Cu2＋ 轉(zhuǎn)運(yùn)可能主要依賴清蛋白） 皮質(zhì)類固醇結(jié)合球蛋白（運(yùn)皮質(zhì)激素蛋白） —— 結(jié)合皮質(zhì)醇 結(jié)合珠蛋白 —— 結(jié)合細(xì)胞外的血紅蛋白 脂蛋白（乳糜微粒、 VLDL、 LDL、 HDL） —— 運(yùn)輸甘油三酯、膽固醇、磷脂等 血紅素結(jié)合蛋白 —— 結(jié)合血紅素 視黃醇結(jié)合蛋白 —— 結(jié)合視黃醇 性激素結(jié)合球蛋白 —— 結(jié)合睪酮、雌二醇 甲狀腺素結(jié)合球蛋白 —— 結(jié)合 T T4 運(yùn)鐵蛋白 —— 運(yùn)輸鐵 甲狀腺素運(yùn)載蛋白 —— 結(jié)合 T4并與視黃醇結(jié)合蛋白形成復(fù)合物 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 二、血漿中大多數(shù)蛋白質(zhì)具有特殊的 生物學(xué)功能 （一）血漿蛋白質(zhì)大多數(shù)屬于分泌性蛋白質(zhì) （二）清蛋白是血漿中含量最多的蛋白質(zhì) （三）很多血漿蛋白具有特殊的結(jié)合功能 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) （三）很多血漿蛋白具有特殊的結(jié)合功能 1．前清蛋白運(yùn)輸視黃醇 2．運(yùn)鐵蛋白是鐵的轉(zhuǎn)運(yùn)載體 3．甲狀腺素結(jié)合球蛋白運(yùn)輸甲狀腺素 4．結(jié)合珠蛋白 血紅蛋白復(fù)合物可防止血紅 蛋白在腎小管沉積 5．血漿銅藍(lán)蛋白可結(jié)合銅 6．免疫球蛋白與機(jī)體的防御機(jī)制