制備hplc技術(shù)ppt課件-資料下載頁
2025-05-06 12:04本頁面
【正文】 / Dm)制備 HPLC技術(shù)問題 — 流速問題 d p , C m , C s mu HH H ? 制備 HPLC技術(shù)問題 — 組分保留時間的估計 用分析柱子在同等色譜條件下（同樣的固定相和流動相）測定保留時間后，按照單一組分的線流速（不是體積流速）一定，通過計算可以知道組分的大致保留時間區(qū)域。 制備 HPLC技術(shù)問題 — 梯度 gradient elution can be applied on prep system. two prep system: 1. Luna 20x50mm RP C18 5um column, MS as detector, gradient: 5%ACN + 95%H2O to 95%ACN + 5%H2O in 9mins, flow rate 40ml/min 2. Luna 20x150mm PR C18 5um column, UV detector, gradiatet: same as above, but total rum time 18mins, flow rate 20ml/min both systems can give good separation. 制備 HPLC技術(shù)問題 — 梯度 分離效果取決于梯度的選擇，理論上梯度越小，分辨率越高。在分析上摸好條件，上制備柱往往還要降低一些洗脫液的濃度。 制備 HPLC技術(shù)問題 — 流動相 流動相中磷酸鹽的去除： 樣品濃縮后全部進(jìn)樣吸附，用水沖去鹽后，再用甲醇或其他適當(dāng)溶劑將目標(biāo)物沖下，即可 只要樣品在水洗脫時有一定的保留（反相填料柱），可以一直加樣至最大負(fù)荷（檢測到樣品流出） 用 G25脫鹽 可以采用離子吸附的辦法去掉（可以參考離子吸附有關(guān)技術(shù)）。 制備 HPLC技術(shù)問題 — 柱子再生 柱子再生處理辦法如下： （ 1）依次用水，甲醇，四氫呋喃，氯仿，甲醇來沖洗柱子，每種溶劑 510個柱體積。 （ 2）如果效果不明顯，將柱子按以上順序反沖，一般將大大降低柱子效果，不到不要沒有辦法才采用。 （ 3）如果效果還是不好，就需要打開色譜柱，超聲波清洗篩片（這樣也會使柱子效果下降）。必要時挖掉色譜柱內(nèi)受污染部位，填入新的填料，還可用 3個月。（填的時候小心，別重新污染柱子） 制備 HPLC技術(shù)問題 — 組分的收集 收集組分時，通常有以下情況： （ 1）可獲得良好分離，主峰： 使用制備柱，超載提高效率； （ 2）兩主成分之間的小組分： 超載，分離切分使待分離組分成為主成分（富集）后，再次分離制備。 制備 HPLC技術(shù)問題 — 組分的收集 邊緣切割與中心切割技術(shù) 邊緣切割 制備 HPLC技術(shù)問題 — 組分的收集 邊緣切割與中心切割技術(shù) 中心切割 制備 HPLC技術(shù)問題 — 組分的收集 邊緣切割與中心切割技術(shù) 中心切割 制備 HPLC新技術(shù) — 循環(huán)色譜 采用循環(huán)功能，對各種難分離樣品進(jìn)行分析或制備，即使樣品可以根據(jù)用戶設(shè)定的次數(shù)反復(fù)經(jīng)過色譜柱進(jìn)行分離，最終的分離結(jié)果是每次分離效果的累加，這樣，在一般的液相色譜上很難或不能分離的樣品都可以使用循環(huán)功能分離開。 制備 HPLC新技術(shù) — 柱切換技術(shù) 包括改變流動相的所有技術(shù)?？墒挂桓V柱的洗脫液流入另一色譜柱。具有如下優(yōu)點： 分辨能力和選擇性得到提高 樣品可在運轉(zhuǎn)中純化 微量的樣品可得到富集 可以減少用于清洗色譜柱等所花的時間 制備 HPLC新技術(shù) — 柱切換技術(shù) Thank you!
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