制備hplc技術ppt課件-閱讀頁
2025-05-21 12:04本頁面
【正文】 大差異的，但為了在分析柱上摸索制備條件，就不能單純地以分析的思路去執(zhí)行 結論 制備 HPLC技術問題 — 條件的優(yōu)化 1）制備的目的是在一次操作中盡可能地多上樣，所以，首先得在分析柱上實現(xiàn)超載，否則，分析柱分離得再漂亮，再在制備柱中線性放大時就因為成本不合理而被無情地否決。 制備 HPLC技術問題 — 條件的優(yōu)化 3）制備中常常因為超載而無法使目的物與鄰近雜質間達到基線分離，可以采用分段收集的方法得到指定純度的目的物，要求越純，單次操作的得率也越低。由于重新上柱是會增加成本的，所以超載的量要平衡單次操作的純品得量和效益與返工成本，以單位純品數(shù)量進行成本核算，以優(yōu)化最佳上樣量。 （ 2）如果樣品在流動相中溶解度小，在制備色譜上會有不同的峰展寬。 制備 HPLC技術問題 — 流速問題 一根大柱子（ c18，高壓柱 )，可使用流速在150ml/min左右，但系統(tǒng)只能提供 20ml/min的流速，如果使用這套系統(tǒng)進行純化，效果會如何呢？這樣會不會使樣品擴散？使分離效果下降？ 對分離不會有什么問題的，一般來講，制備柱的填料大于分析型色譜填料，內擴散阻力也相應地大很多。唯一的壞處是：分離時間會很長 ？ V a n D e e m t e r 方 程H = A + B / u + C u渦 流 擴 散 項 縱 向 擴 散 項傳 質 阻 抗 項（ 可 忽 略 不 計 ）C = Cm+ Cs m+ CsCm= Cm39。 ( d p 39。 制備 HPLC技術問題 — 梯度 gradient elution can be applied on prep system. two prep system: 1. Luna 20x50mm RP C18 5um column, MS as detector, gradient: 5%ACN + 95%H2O to 95%ACN + 5%H2O in 9mins, flow rate 40ml/min 2. Luna 20x150mm PR C18 5um column, UV detector, gradiatet: same as above, but total rum time 18mins, flow rate 20ml/min both systems can give good separation. 制備 HPLC技術問題 — 梯度 分離效果取決于梯度的選擇，理論上梯度越小，分辨率越高。 制備 HPLC技術問題 — 流動相 流動相中磷酸鹽的去除： 樣品濃縮后全部進樣吸附，用水沖去鹽后，再用甲醇或其他適當溶劑將目標物沖下，即可 只要樣品在水洗脫時有一定的保留（反相填料柱），可以一直加樣至最大負荷（檢測到樣品流出） 用 G25脫鹽 可以采用離子吸附的辦法去掉（可以參考離子吸附有關技術）。 （ 2）如果效果不明顯，將柱子按以上順序反沖，一般將大大降低柱子效果，不到不要沒有辦法才采用。必要時挖掉色譜柱內受污染部位，填入新的填料，還可用 3個月。 制備 HPLC技術問題 — 組分的收集 邊緣切割與中心切割技術 邊緣切割 制備 HPLC技術問題 — 組分的收集 邊緣切割與中心切割技術 中心切割 制備 HPLC技術問題 — 組分的收集 邊緣切割與中心切割技術 中心切割 制備 HPLC新技術 — 循環(huán)色譜 采用循環(huán)功能，對各種難分離樣品進行分析或制備，即使樣品可以根據(jù)用戶設定的次數(shù)反復經(jīng)過色譜柱進行分離，最終的分離結果是每次分離效果的累加，這樣，在一般的液相色譜上很難或不能分離的樣品都可以使用循環(huán)功能分離開。可使一根色譜柱的洗脫液流入另一色譜
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