戴安hplc基礎(chǔ)知識(shí)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-01-14 17:47本頁(yè)面
【正文】 3 0 . 1 5 6 2 0 . 0 8 0 . 0 8 4 3 m g /2 8 . 6 2 8 6AC C m LA? ? ? ?供對(duì)供對(duì)＝ （ ）Cm g /0 .0 8 4 3 5 0 0 .5 0 6 3 4. 2 6 m g /0 .5 0 0 8??????供稀 釋 倍 數(shù) 平 均 片 重綠 原 酸 含 量 （ 片 ）取 樣 量＝ （ 片 ）正反相色譜 液液色譜法按固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相色譜法 (NPC)和反相色譜法 (RPC)。 正相色譜法 采用極性固定相 (如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相 )；流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑 (烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間。常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物 (如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。 反相色譜法 一般用非極性固定相（如 C1 C8）；流動(dòng)相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。 RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用最為廣泛，據(jù)統(tǒng)計(jì)，它占整個(gè)HPLC應(yīng)用的 80%左右。 正相色譜法與反相色譜法比較 從上表可看出，當(dāng)極性為中等時(shí)正相色譜法與反相色譜法沒有明顯的界線（如氨基鍵合固定相）。 正相色譜法 反相色譜法 固定相極性 高～中 中～低 流動(dòng)相極性 低～中 中～高 組分洗脫次序 極性小先洗出 極性大先洗出 高效液相色譜儀的保養(yǎng) HPLC的環(huán)境設(shè)置 HPLC的日常操作條件：溫度： 10～ 30℃ ；相對(duì)濕度 80％； 最好是恒溫、恒濕，遠(yuǎn)離高電磁干擾、高振動(dòng)設(shè)備，有良好的通風(fēng)設(shè)施。 HPLC用水可以通過以下幾個(gè)方面來得到： 1 專門的純水機(jī)或超純水機(jī)； 2 去離子水重蒸； 3 二次或三次重蒸水； 4 采用類似家用的純水機(jī)； 5 市場(chǎng)上瓶裝的純凈水或蒸餾水，如：娃哈哈純凈水； 6 其它途徑； 不管采用何種途徑，配制流動(dòng)相應(yīng)用新鮮水，水質(zhì)越高放置時(shí)間越短。 理想的 HPLC用水應(yīng)為 ，并通過 濾膜，除去熱源、有機(jī)物、無機(jī)離子及空氣等。 HPLC六通閥進(jìn)樣器的保養(yǎng) 雖然六通閥進(jìn)樣器具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便、壽命長(zhǎng)、日常無需維修等特點(diǎn)，但正確的使用和維護(hù)將能增加使用壽命，保護(hù)周邊設(shè)備，同時(shí)增加分析準(zhǔn)確度。如使用得當(dāng)?shù)脑?，六通閥進(jìn)樣器一般可連續(xù)進(jìn)樣3萬次而無需維修。 手柄處于 Load和 Inject之間時(shí)，由于暫時(shí)堵住了流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位，過高的壓力在柱頭上引起損壞，所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動(dòng)閥，不能停留在中途。在 HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是平頭注射器。一方面，針頭外側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。 六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。使用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最多為定量環(huán)體積的 75％，如 20μL的定量環(huán)最多進(jìn)樣 15μL的樣品，并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同；使用完全裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最少為定量環(huán)體積的 3至 5倍，即 20μL的定量環(huán)最少進(jìn)樣 60至 100μL的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用 100ul的平頭進(jìn)樣針配合 20ul滿環(huán)進(jìn)樣。 HPLC六通閥進(jìn)樣器的保養(yǎng) 可根據(jù)進(jìn)樣體積的需要自已制作定量環(huán)，一般不要求精確計(jì)算定量環(huán)的體積，譬如，一根名義上 10μL的定量環(huán)，實(shí)際是 9μL還是 11μL并不重要，因?yàn)楸粶y(cè)樣品和校正樣品的進(jìn)樣體積保持一致，在計(jì)算結(jié)果時(shí)誤差都被抵消了。 進(jìn)樣樣品要求無微粒和能阻死針頭及進(jìn)樣閥的物質(zhì)，樣品溶液均要用。防止微粒阻塞進(jìn)樣閥和減少對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。為防止緩沖鹽和其它殘留物質(zhì)留在進(jìn)樣系統(tǒng)中，每次結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣器，通常用不含鹽的稀釋劑、水或不含鹽的流動(dòng)相沖洗，在進(jìn)樣閥的Load和 Inject位置反復(fù)沖洗，再用無纖維紙擦凈注射器針頭的外側(cè)。 泵的保養(yǎng) 使用流動(dòng)相盡量要清潔； 進(jìn)液處的砂芯過濾頭要經(jīng)常清洗； 流動(dòng)相交換時(shí)要防止沉淀； 避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡； 每次分析結(jié)束后，要反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染。 色譜柱的保養(yǎng) 柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)； 當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈； 要注意流動(dòng)相的脫氣； 避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；盡量避免用緩沖鹽特別是磷酸鹽。 進(jìn)樣樣品要提純； 嚴(yán)格控制進(jìn)樣量； 每天分析工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品； 每天分析測(cè)定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗涣鲃?dòng)相中含酸、緩沖鹽類均應(yīng)先用甲醇 水（ 5∶ 95）沖洗至中性再用甲醇以 1mL/min的流速?zèng)_洗約 20min，若含二乙胺之類可直接用甲醇沖（用水很難沖洗至中性）。 若分析柱長(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉。 紫外燈的保養(yǎng) 在分析前、柱平衡得差不多時(shí)，再打開檢測(cè)器；在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測(cè)器。 避免頻繁關(guān)閉檢測(cè)器（開關(guān)一次氘燈，相當(dāng)于損失 30h的壽命）。 樣品池要若受污染可用異丙醇沖洗。 聯(lián)系方式 畢業(yè)設(shè)計(jì)時(shí)有液相相關(guān)和藥學(xué)圖像處理相關(guān)問題可聯(lián)系：
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