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2025-03-03 17:47本頁(yè)面
【正文】 有機(jī)相：甲醇、乙腈。 改性劑（防止拖尾，獲得更好的分離度和峰型） 酸（ ％磷酸 /醋酸溶液）：分離有機(jī)酸； 堿（ ％二乙胺 /三乙胺）：分離生物堿； 緩沖鹽（ HAcNaAc， H3PO4NaH2PO4）：當(dāng)加酸加堿無(wú)法獲得更好 的分離效果時(shí)，考慮加適當(dāng)緩沖鹽，讓其以鹽類形式存在。 流速： 通常為 1mL/min。 柱溫： 常設(shè)值： 25℃ 、 30℃ 、 40℃ 。 打開泵，柱溫箱，檢測(cè)器（平衡 30min后）和計(jì)算機(jī)電源，并設(shè)定流動(dòng)相及比例，柱溫。 修改色譜條件：打開程序文件，修改柱溫、流動(dòng)相比例、測(cè)定波長(zhǎng)、運(yùn)行時(shí)間等 運(yùn)行樣品表：進(jìn)樣測(cè)定。 報(bào)告輸出。 以適當(dāng)溶劑沖洗色譜柱、進(jìn)樣器、進(jìn)樣針。 登記使用記錄。 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)即用各品種項(xiàng)下規(guī)定的對(duì)照品和條件對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)符合要求。 理論板數(shù) n 主要考察柱效，藥典通常要求不低于 3000或 4000。 拖尾因子 T 主要考察峰對(duì)稱性，峰高定量時(shí) T應(yīng)在 ～ ，峰面積定量可適當(dāng)放寬至 ～ 。取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣 5次，峰面積 RSD應(yīng)不大于 2％。 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 理論板數(shù)（ n）考察柱效 在選定的條件下，注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的對(duì)照物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時(shí)間tR（以分鐘或長(zhǎng)度計(jì)，下同 ,但應(yīng)取相同單位）和半高峰寬 (Wh/2),按下式計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)。 h225 .5 4 ( )RtnW?式中 : tR為保留時(shí)間； Wh/2為半峰高處的峰寬； 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 分離度（ R） 考察分離效果 在規(guī)定的條件下，注入對(duì)照液或供試液，記錄色譜圖，按下式計(jì)算待測(cè)峰（定量峰）與相鄰峰的分離度。 21122 ( )RRttRWW???式中 : tR2為相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)間； tR1為相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)間； W1及 W2為此相鄰兩峰的峰寬 。特別是采用峰高法測(cè)量時(shí)，應(yīng)檢查待測(cè)峰的 T是否符合規(guī)定。 12hWTd?式中 : 5％ 峰高處的峰寬； d1為峰頂點(diǎn)到峰前沿之間的距離 。也可按各品種校正因子測(cè)定項(xiàng)下，配制相當(dāng)于 80％、 100％和 120％的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成 3種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣 2次，計(jì)算平均校正因子，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差也應(yīng)不大于 ％。 色譜柱選擇： 填料選擇： Kromasil、 Diamonsil、 Hypersil 柱長(zhǎng)選擇： 250mm、 200mm、 150mm 流動(dòng)相種類選擇： 有機(jī)相選擇：甲醇、乙腈、甲醇 乙腈（有機(jī)相增加，峰前移） 水相選擇：分離皂苷類等中性化合物可直接用水 分離有機(jī)酸等酸性化合物加酸 (磷酸、醋酸 ),并可調(diào)節(jié) pH值 (、 %) 分離生物堿等堿性化合物加堿 (二乙胺、三乙胺 )，一般采用 %濃度 流動(dòng)相配比選擇： 等度洗脫：如甲醇 水（ 12∶88 ） 剃度洗脫：如乙腈 ％磷酸， 0min， 65∶45 ； 20min， 80∶20 ； 40min， 95∶5 柱溫選擇： 25℃ 、 30℃ 、 40℃ 等（柱溫增加，峰前移） 3. 標(biāo)準(zhǔn)品純度考察 采用面積歸一化法，應(yīng)大于 98％。 6. 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品，按樣品測(cè)定方法操作，測(cè)定五份，樣品含量 RSD％不得大于 3％ （由于每份樣品取樣量不同，故應(yīng)計(jì)算含量的 RSD） 。（通?？疾?36h內(nèi)的穩(wěn)定性） 8. 回收率實(shí)驗(yàn) 取同一樣品， 分別添加高、中、低三組濃度對(duì)照品（每組三份），測(cè)定峰面積，并計(jì)算回收率，回收率應(yīng)在 95～ 105％間， RSD不大于 5％。 高、中、低三組濃度與樣品含量之比約為： 、 含量測(cè)定 外標(biāo)法 按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱 (量 )取對(duì)照品和供試品，配制成溶液，分別精密取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測(cè)量對(duì)照品和供試品待測(cè)成分的峰面積（或峰高），按下式計(jì)算含量： 由于微量注射器不易精確控制進(jìn)樣量，當(dāng)采用外標(biāo)法測(cè)定供試品中某雜質(zhì)或主成分含量時(shí)，以定量或或自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣為好。 XXRRACCA?式中 : C 為 濃度 ， A為峰面積； X為供試品 ， R為對(duì)照品 。取一定量注入儀器，記錄色譜圖。 再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖，測(cè)量供試品中待測(cè)成分（或其雜質(zhì)）和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算含量： /XXSSACfAC??式中 : C 為 濃度 ， A為峰面積； S為內(nèi)標(biāo)物 ， X為供試品 。在建立方法時(shí)，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取雜質(zhì)對(duì)照品和待測(cè)成分對(duì)照品各適量，配制測(cè)定雜質(zhì)校正因子的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，按上法計(jì)算雜質(zhì)的校正因子。這些需作較正計(jì)算的雜質(zhì)，通常以主成分為參照采用相對(duì)保留時(shí)間定位，其數(shù)值一并載入各品種項(xiàng)下。然后，取供試品溶液和對(duì)照品溶液適量，分別進(jìn)樣，供試品溶液的記錄時(shí)間除另有規(guī)定外，應(yīng)為主成分保留時(shí)間的 2倍，測(cè)量供試品溶
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